362±0.022和0.636±0.047。⑥FCM对细胞凋亡及细胞周期分布的检测显示:48h高糖组细胞凋亡率(11.53±2.16
%)较对照组(1.23±0.07 %)明显增高;细胞周期G0/G1期比例明显增多,S期、G2/M期比例明显减少。 4尿酸对高糖环境下HMC细胞ONOO-、JAK/STAT信号途径、TGF-β1、FN表达的影响及其与HMC增殖和凋亡的关系 ①HMC形态学改变:高糖+尿酸组HMC形态接近正常对照组;与高糖组相比,细胞变短,突起增多,胞质内颗粒减少。②免疫细胞化学显示:高糖+尿酸组,NT总蛋白、p-JAK2、p-STAT3、TGF-β1蛋白表达较高糖组均明显减弱。③Western blot结果显示:与同期高糖组相比,高糖+尿酸组NT总蛋白、p-JAK2、p-STAT3表达均明显下降。④ELISA检测显示:尿酸可以有效的减少高糖组各个时段(12h、24h、48h)细胞上清液中TGF-β1及FN的含量。⑤MTT法检测细胞增殖水平显示:48h高糖+尿酸组细胞增殖活性较48h高糖组增高,OD值分别为0.698±0.014和0.362±0.022。⑥FCM对细胞凋亡及细胞周期分布检测显示:48h高糖+尿酸组细胞凋亡率(4.61±0.39 %)较48h高糖组(11.53±2.16 %)减少;细胞周期G0/G1期比例减少,S期、G_2/M期比例增多。 5 AG490对高糖环境下HMC细胞ONOO-、JAK/STAT信号途径、TGF-β1、FN表达的影响 很少 ①免疫细胞化学显示:高糖+AG490组,p-JAK2、p-STAT3、TGF-β1蛋白表达较高糖组均明显减弱。②Western blot结果显示:与同期高糖组相比,高糖+AG490组p-JAK2、p-STAT3表达均明显下降;而NT总蛋白表达与同期高糖组差异无统计学意义。③ELISA检测显示:高糖+AG490组各个时段(12h、24h、48h)细胞上清液中TGF-β1和FN的含量较同期高糖组明显减少。④FCM对细胞凋亡的检测显示:48h高糖+AG490组细胞凋亡率(5.70±0.72 %)较48h高糖组(11.53±2.16 %)减少。 结论: 1 NT总蛋白(ONOO-的标志物)高表达可能与DN的发生发展相关,ONOO-的特异性清除剂—尿酸可能在防治DN中发挥重要作用。 2 JAK/STAT信号通路的激活与DN的发生发展可能相关;尿酸对ONOO-的清除可能与JAK/STAT信号通路的激活受抑有某种相关性;ONOO-可能是作为JAK/STAT信号通路的上游信号分子参与DN的发生发展。
3 所以 TGF-β1及FN的过多生成可能是引发DN的机制之一;JAK/STAT信号通路的激活与TGF-β1及FN的过多生成可能相关;TGF-β1及FN的过多生成可能参与了ONOO-介导的糖尿病肾损伤。 4 ONOO-可能参与介导了高糖对MC增殖、凋亡和细胞周期的影响。
目的:研究低强度脉冲超声波(Low intensity pulsed ultrasound, LIPUS)对体外培养兔膝关节软骨细胞增殖、软骨细胞中金属蛋白酶-13(matrix metalloproteinase,MMP-13)及Ⅱ型胶原的影响,探讨LIPUS对软骨细胞活性的促进作用及机制。 方法:选用6只1月龄的新西兰白兔膝关节软骨进行体外培养,体外培养每只兔的软骨细胞传至第二代后,均分为对照组与4个LIPUS照射组,LIPUS强度分别是20 点击此处 mW /cm~2、30 mW /cm~2、40 mW /cm~2、50 mW /cm~2,每天照射20min,连续10天。每天进行细胞计数;分别在第0天、5天及第10天收集细胞,提取软骨细胞全蛋白及RNA,采用Western-blot技术、qRT-PCR技术检测软骨细胞中MMP-13、Ⅱ型胶原的含量。
结果:1.软骨细胞计数:与对照组相比,各LIPUS照射组软骨细胞数均明显增高(P<0.05),但各照射组MMP-13含量均较其对照组显著降低(P<0.05)。但各照射组Ⅱ型胶原表达量均显著高于对照组(P<0.01);MO组关节软骨损伤明显,Mankin评分较MC组显著升高(P<0.01)。与EO组相比,ET组组织病理学改变程度轻,Mankin评分显著降低(P0.05)。2. PCNA检测:EO组PCNA较EC组显著升高(P 0.05)。3. PI3K检测: EO组PI3K与EC组相比,无显著增高(P >0.05);ET组PI3K较EO组显著升高(P 0.05)。 结论:研究提示LIPUS早期干预更有利于促进兔骨关节炎软骨修复,其作用机制与LIPUS促进了软骨细胞增殖,并激活PI3K信号转导通路密切相关。 目的:研究LIPUS对兔膝OA早期关节软骨Ⅱ型胶原、MMP-13及MAPKs信号通路的影响,探讨在OA早期应用LIPUS延缓关节软骨退变的作用机制。方法:新西兰白兔18只,随机分为照射组(operation plus LIPUS,O+L组)、假照射组(operation without LIPUS,O-L组)和假手术组( sham operation, SO组),每组6只。O+L组,右膝接受ACLT术,术后第3天起进行LIPUS照射,频率为3MHz,照射强度为40mW/cm~2,每次20min,每天1次,6天/周,持续6周。O-L组,手术及照射方案与O+L组一致,但无超声输出。SO组仅行关节囊切开术。治疗6周后将兔处死,取兔右侧膝关节行大体组织学观察,进行改良Mankin评分;应用蛋白质印迹法(Western-blot)检测Ⅱ型胶原蛋白、基质金属蛋白酶13(matrix metalloproteinase-13,MMP-13)及细胞外信号调节激酶1/2 (extracellular signal-regulated kinase1/2,ERK1/2)、丝裂原活化蛋白激酶38(Mitogen-activated protein kinase38,p38)、C6N末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)的表达。 结果:1.关节软骨Mankin评分:与SO组相比, O+L组、O-L组显著高于SO组(P<0.05,P<0.01);与O+L组相比,O-L组显著增高(P<0.05)。2.