而后通过点突变的方法使STAT3的3′UTR区包含可能与miR-125b结合的一段碱基序列发生突变,构建STAT3突变型(STAT3MUT-luc)荧光素酶报告基因质粒。采取脂质体转染的方法将STAT3WT-luc和STAT3MUT-luc与miR-125b模拟物(miR-125b mimics)和阴性对照(Negative control)ABT-737小白鼠同时转染到MG-63细胞内。转染48小时后收取细胞,本实验采取双荧光素酶报告基因系统,以海肾荧光素酶(Renilla)作为内参,检测萤火虫荧光素酶(Firefly)的活性。最终以二者的比值作为相对表达量数值(Firefly/Renilla)。 3.采用脂质体转染的方法将不同浓度miR-125b模拟物(miR-125b购买SCH772984 mimics)转染到Saos-2细胞内,采用蛋白质印迹(Western blot)检测STAT3蛋白表达水平；CKK8法检测细胞增殖活性。 4.采用脂质体转染的方法将miR-125b模拟物(miR-125b mimics)、化学合成并化学修饰的miR-125b反义核酸(anti—miR-125b)或者阴性对照(NeEPZ6438gative control)转染至MG-63和Saos-2细胞内。收集细胞后提取总蛋白,采用蛋白质印迹法(Western blot)检测STAT3蛋白表达水平。 结果： 1.STAT3为miR-125b的靶基因,miR-125b通过结合3’UTR区抑制靶基因STAT3的表达。 2.miR-125b浓度依赖性的调节细胞增殖,过表达miR-125b能抑制Saos-2细胞增殖,抑制STAT3蛋白表达量。