该基因是调控中心粒复制的最关键的基因之一,且已有研究报道其参与了乳腺癌、前列腺癌、胃癌等多种人类肿瘤的发生。我们关注到PLK4基因及其启动子区域存在众多SNPs,同时TCGA和KM-plotter数据库资料显示PLK4在肝癌中被异常激活,且与预后不良相关。本研究目的明确PLK4 SNPs与HBV相关肝癌遗传易感性的关联,分析PLK4在肝癌发生发展中的作用,并在此基础上初步讨论靶向PLK4寻找更多治疗肝癌的可行性。研究方法我们采用病例对照研究设计,纳入病例组(HBV相关肝癌)1,300例,对照组(HBV慢性感染患者)1,344例,并按照年龄、性别及居住地进行匹配。基于1000 Genomes Project数据库选取CT基因PLK4及其启动子区域(TSS上游5kb)的所有SNPs,并根据如下质量控制程序进行筛选(1)最小等位基因频率(MAF)<0.05;临床试验(2)哈迪-温伯格平衡(HWE)<0.05)的SNPs;(3)满足上述标准的位点之间根据高连锁不平衡(r2)>0.8构建单倍型。并利用3DSNP网站(http//cbportal.org/3dsnp/)进行功能预测,最终选取其中的3个功能性标签SNPs进行分析。应用Logistic回归模型在相加模型下计算遗传变异的关联P值、比值比(odds ratio,OR)及INCB018424花费其95%可信区间。采用多因素Cox 比例风险模型计算PLK4不同表达肝癌患者的死亡风险,以风险比(HR)表示。研究进一步构建PLK4敲降及过表达的肝癌细胞系,通过MTT、平板克隆、划痕及Transwell等体外实验评估PLK4对肝癌细胞增殖、克隆形成、迁移和侵袭能力影响。药物敏感试验模型用于评估不同PLK4表达状态的肝癌细胞对PLK4小分子抑制剂CFI-400945的敏感性。根据基线表达情况,将细胞株分为PLK4冬高表达组和PLK4-低表达组。