7细胞系,希望通过这一研究体系对Nalplb炎性体的激活机制进行深入研究。一方面,我们使用全基因组RNAi筛选直接在RAW264.7细胞系中通过检测细胞死亡和RFP-ASC成点现象筛选能够影响致死因素激活caspase-1的基因,另一方面,以蛋白酶体和N端规则在Nalplb炎性体激活中的重要作用为起点直接研究UBR家族蛋白成员的作用,这两种不同的研究思路最终都集中到N端规则泛素E3连接酶UBR家族成员UBR2身上,我们发现UBR2的RNAi能够有效的抑制致死毒素对Nalplb炎性体的激活,进而影响caspase-1的激活,细胞死亡和ASC的成点现象。 该研究证实了N端规则泛素化在致死毒素激活Nalplb炎性体过程中的重要作用,并发现了参与其中的泛素E3连接酶UBR2,有助于揭示致死毒素激活Nalplb炎性体的具体机制。
背景与目的：多种病毒可以感染卵巢,影响卵巢功能。而且一些病毒如乙型肝炎病毒(HBV)、及艾滋病毒(HIV)等可能通过感染卵细胞和胚胎而直接传播给后代。然而卵巢、卵细胞及胚胎的天然抗病毒机制,尚未研究。本论文旨在分析模式识别受体介导的卵巢及早期胚胎的天然抗病毒反应。 selleckchem 材料与方法：免疫组化和Western blotting方法用于蛋白的定位与定量分析。Real-time RT-PCR用于分析mRNA表达水平分析。ELISA方法用来分析细胞因子的浓度。分离小鼠颗粒细胞、卵细胞、卵黄囊细胞,通过转染Poly(I:C)模拟病毒感染,分析细胞的天然抗病毒反应。

结果：病毒RNA模式识别受体TLR3、MDA5、RIG-1在卵巢颗粒细胞与间质细胞中表达。Poly(I:C)可以诱导颗粒细胞的天然抗病毒反应,包括上调TNF-α、IL-6、 IFN-α、IFN-β等炎症因子,以及抗病毒蛋白ISG15、OAS1、Mx1的表达。抑制TLR3、MDA5、RIG-I中任一个受体表达显著地降低了上述反应。颗粒细胞的抗病毒反应干扰雌激素的合成。而且MDA5、RIG-I表达于卵母细胞及成熟的卵细胞,Poly(I:C)诱导卵细胞抗病毒蛋白ISG15、OAS1表达上调。在胚胎发育早期,TLR3、MDA5、RIG-I受体特异表达于卵黄囊细胞,Poly(I:C)可诱导卵黄囊细胞产生天然抗病毒反应。Poly(I:C)诱导的天然抗病毒反应需要TLR3、MDA5、RIG-I受体介导的核转录因子κB(NF-κB)与干扰素调节因子3(IRF3)的活化。 Apoptosis Compound Library cell assay 结论：卵巢颗粒细胞与卵细胞表达TLR3、MDA5、RIG-I受体,并可介导天然抗病毒反应,卵巢的抗病毒反应干扰其自身的激素分泌功能。在早期胚胎发育过程,天然抗病毒机制主要存在于卵黄囊中。结果表明,卵巢颗粒细胞、卵细胞及胚胎卵黄囊中具有天然抗病毒活性。
目的

胃癌是近发病率排名第四的恶性肿瘤,接近2/3的胃癌发生在发展中国家,而其中有42%发生在中国。尽管在胃癌的诊断方法及治疗手段上已取得不少进展,但在癌症相关死亡率排名中,胃癌仍高居世界第二。化疗是目前应用于胃癌的临床治疗方案中非常重要的一个手段,对于术后残留癌细胞的清除、防止复发、改善预后等方面都具有积极作用。但是越来越多的临床证据表明,目前常用于一线治疗的多种药物及多种给药方案的总体疗效评价不甚理想,为进一步探询内在原因及探索新的治疗方案提出要求。WD重复区域62(WDR62)是最近发现的和中心体相关的基因,它有32个外显子,1个CpG岛和poly(A)尾。WDR62位于人类染色体19q13.12区,而且靠近CEBPG,GPI和UBA2基因的功能区,参与细胞循环与增殖等生物学过程。这些基因都已被证实在DNA复制及细胞周期中发挥极其重要的作用。WDR62蛋白有13个WD重复区域,在C末端有6个可以被丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)磷酸化激活的位点,具有调控细胞信号通路、转录、有丝分裂和细胞凋亡的功能。当有丝分裂发生时,WDR62的内源性表达大量聚集在分裂细胞的纺锤体极,而不是在细胞核周围,提示我们WDR62在肿瘤细胞的增殖过程中发挥着关键作用,但WDR62在人类恶性肿瘤中的作用仍然未知。本研究的目的即在于明确WDR62在人类胃癌发展与预后中的作用。 方法 采集372例临床胃癌患者的癌组织及癌旁胃粘膜标本,分别进行苏木素伊红(HE)染色剂免疫组织化学染色。请两名有经验的病理诊断学家分别独立阅片确认胃腺癌的诊断。用实时荧光定量PCR及Western

Blotting法检测各组织标本中WDR62的表达水平。采集胃癌病例的临床病理学特征,收集随访资料,建立Cox回归模型分析WDR62表达水平、临床病理学特征与预后之间的关系。细胞培养8株人类胃癌细胞系(AGS, CDK and cancer SGC7901, BGC-823, MGC-803, HGC-27, SGC7901/VCR, SGC7901/DDP和SGC7901/ADM),用定量RT-PCR及Western blotting检测WDR62的表达水平。构建慢病毒质粒载体分别转染BGC-823和多重耐药株SGC7901/VCR细胞,研究沉默WDR62对细胞生殖、侵袭转移能力、细胞周期、凋亡发生、细胞活力、化疗敏感性等的影响,并检测WDR62, cyclin B, CDK1, caspase3及Akt、 ERK等其他若干信号转导分子的mRNA及蛋白表达水平。分别用慢病毒LV-shRNA-Control and LV-shRNA-WDR62转染的BGC-823和SGC7901/VCR细胞行裸鼠皮下成瘤试验,31天后,处死裸鼠,取出肿瘤测量其大小及重量,并行HE染色,IHC染色WDR62及Ki67。 结果 用实时荧光定量PCR (qRT-PCR)法检测372例胃癌组织标本及其癌旁胃粘膜组织标本(NT)中WDR62mRNA表达水平发现,胃癌组织中的WDR62mRNA表达水平显著高于癌旁组织(0.0065±0.0016V.S.0.0027±0.0009, p<0.