21±0.39、2.27±0.28、2.21±0.27、1.93±0.30、1.64±0.31、1.85±0.41;人参皂苷Rg1各组p-JNK蛋白含量显著降低,与模型组比较有显著性差异(P＜0.05),其中10 mg/kg组p-JNK蛋白含量最高,40 mg/kg组p-JNK蛋白含量最低;10、40 mg/kg组与阳性药物对照组比较有显著性差异(P＜0.05),而20 mg/kg组与阳性药物对照组比较无统计学差异(P＞0.05)。 (2)假手术组、模型组、人参皂苷Rg1 10、20、40 mg/kg组和阳性药物对照组海马CA1区p-c-jun蛋白表达含量分别为0.51±0.07、2.02±0.17、1.21±0.11、0.87±0.22、0.69±0.07、0.80±0.18;模型组大鼠p-c-jun含量最高,假手术组p-c-jun含量最低;人参皂苷Rg1
20、40 mg/kg组p-c-jun蛋白含量显著降低,与模型组比较有显著性差异(P＜0.05),其中40 mg/kg组p-c-jun蛋白含量最低;人参皂苷Rg1 10 mg/kg组与阳性药物对照组比较有显著性差异(P＜0.05),而Rg1 20、40 mg/kg组与阳性药物对照组比较无统计学差异(P＞0.05)。 结论: 1.人参皂苷Rg1可以显著改善脑缺血再灌注大鼠的神经功能缺损症状。 2.人参皂苷Rg1能显著降低脑缺血再灌注大鼠海马CA1区神经元凋亡率;进一步研究显示Rg1可能通过抑制脑缺血后海马CA1区的JNK及其效应分子c-jun的活化,进一步调节死亡受体、线粒体依赖的凋亡途径,抑制脑缺血再灌注后的神经元凋亡,降低缺血后迟发性神经元死亡,控制缺血半暗带向梗死区的发展,以发挥其对脑缺血再灌注损伤的保护作用。
肝细胞癌是目前严重威胁人类生命安全的疾病之一。寻求高效低毒的抗肿瘤药物及治疗方法一直是科学界研究的热点。氯喹是老药,具有广泛的生理学效应,以往主要用来治疗疟疾、自身免疫性疾病等,近年来发现氯喹具有治疗肿瘤的作用。本研究旨在研究氯喹的抗肝细胞癌作用并对其作用机制进行探讨。采用MTT法检测氯喹对人肝细胞癌HepG2细胞生长抑制作用;采用流式细胞术检测氯喹对人肝细胞癌HepG2细胞周期和凋亡的影响;采用免疫印迹法检测氯喹对HepG2细胞周期蛋白cyclinB1及NF-кB、p-IкBa、ERK、p-JNK和P38蛋白表达水平的影响。结果表明,氯喹可抑制HepG2细胞生长,诱导细胞发生G2/M期阻滞而影响细胞周期进程以及通过抑制HepG2细胞周期蛋白cyclinB1表达、抑制NF-кB、p-IкBa及ERK和诱导p-JNK蛋白表达水平促进细胞凋亡和抑制细胞增殖有关。本研究结果将为肝细胞癌的治疗提供新的药物,并且对老药氯喹用于治疗肝细胞癌的临床应用提供重要的实验依据。
【目的】建立三种干细胞即神经干细胞(NSC)、骨髓问充质细胞(BMSC)和造血干细胞(HSC),及两种支持细胞即嗅鞘细胞(OEC)和雪旺细胞(SC)的体外培养技术,并将两种支持细胞分别和三种干细胞分别联合移植入SD大鼠和猴损伤的脊髓,筛选出细胞联合移植治疗SCI的优化方案,并探讨与其相关的分子表达,找出相对重要的调节分子,研究该分子在SCI中的作用。为寻找细胞移植治疗SCI的有效方法和相关的分子机制提供实验依据,为指导临床应用干细胞移植治疗SCI提供新思路。
更多 B-Raf inhibition 【方法】 1.建立嗅鞘细胞、雪旺细胞、神经干细胞、骨髓间充质细胞和造血干细胞的体外培养技术,并对培养细胞进行鉴定。 2.建立SD大鼠脊髓T10全横断损伤模型。将动物分假手术组、单纯脊髓全横断手术组、脊髓全横断手术注射免疫抑制剂组,NSC移植组、BMSC移植组、HSC移植组、SC细胞移植组,OEC移植组,以及NSC+OEC,BMSC+OEC,HSC+SC联合移植组。术后14d沿原切口暴露损伤脊髓,选取距离瘢痕5mm的脊髓上下端和瘢痕各取左右两个位点(脊髓上下端旁开脊髓后正中沟0.5mm,瘢痕处的左右侧位点参照脊髓上下端的左右位点定位),共6个位点用立体定向仪进行细胞移植(1.0×10~5/5uL,每个位点)。用5mg/kg/天腹腔注射环孢素(CsA)以减轻细胞移植后的免疫排斥反应。 GSK2656157细胞系 3.后肢运动功能评分:移植术后1～24周,采用双盲法由三名观察人员每周末进行大鼠后肢BBB运动功能评分。最后将三人所得分值求平均分后进行统计学处理。筛选出促进脊髓损伤功能恢复最好的一组为NSC+OEC联合移植组。 4.神经电生理检测:对NSC+OEC联合移植组,及其相应对照组进行神经电生理检测,进一步探讨NSC+OEC联合移植组促进SCI的实验依据。 (1)运动诱发电位(MEP)的测定 采用了神经电生理经颅磁刺激器对NSC+OEC联合移植组14d组,及其对照组假手术组、脊髓全横断手术注射免疫抑制剂组、NSC移植组和OEC移植组的MEP进行检测。3.6%水合三氯乙醛麻醉固定动物后,用盘状电极通过导电膏粘附于大鼠耳朵作为地线,记录电极置于大腿股四头肌,正负电极间距1cm,磁力板中心置于大脑皮质运动区之上刺激大脑皮质,以刺激强度40%刺激大脑皮质,记录股四头肌收集到得电位变化,待波形稳定且重复3次时中止并描记结果。
(2)皮层体感诱发电位(CSEP)的测定 本实验采用了皮层体感诱发仪(MEDTRONIC公司产品-KEYPOINY)对移植14d的NSC+OEC联合移植组,及其对照组假手术组、脊髓全横断手术注射免疫抑制剂组、NSC移植组和OEC移植组进行了检测。电流为方波脉冲型,刺激电极置于大鼠左下肢胫后神经处,正负电极间距为1cm,参考电极置于大鼠鼻正中皮下,记录电极置于大鼠右侧大脑皮层处皮下,接地电极置于大鼠耳朵。参数设置:扫描速度10ms/D,灵敏度10uv/D,滤波低频10Hz,滤波高频2KHz,刺激强度以引起大鼠后爪抖动为止。每次均记录300次波形后将其叠加平均得到最终的检测结果。 5.植入细胞存活检测: 在第12和24W末取部分动物用3.6%的水合氯醛进行腹腔注射麻醉,4%的多聚甲醛灌注固定后取材、冰冻切片,荧光显微镜下观察植入细胞存活,迁移。 6.PCR扩增疤痕组织的神经营养因子及其受体,和凋亡相关因子: 将14d、21d、28d的各组全横断脊髓(手术注射免疫抑制剂组、NSC移植组、OEC移植组和NSC+OEC联合移植组)活体取出疤痕部位及临近组织,匀浆、裂解、提取总RNA、逆转录合成cDNA,进行神经营养因子NGF、BDNF、NT-3、CNTF、PDGF-B、IGF-1、bFGF、TGF-β1,及其受体TrkA、TrkB和TrkC,和凋亡相关因子Bax、Bcl-2、Caspase-3及内参照β-actin的PCR扩增,琼脂糖凝胶电泳检测扩增产物。测光密度值,进行统计学分析,筛选出有变化的因子。推测其中与SCI有关的重要分子。 7.