0058士0.0019V.S.0.0022±0.00059,p<0.01)。沉默WDR62基因表达能显著减少细胞周期蛋白B和CDK1的表达水平,而使具有诱导凋亡作用的caspase-3表达增高。活体内沉默WDR62可抑制胃癌细胞生长,LV-shRNA-WDR62-BGC-823组肿瘤平均大小明显小于LV-shRNA-Control-BGC-823组,差异具有统计学意义(1.62±0.17cm3V.S.3.87±0.36cm3,p
最近的报告发现的CD4+Th细胞亚群,在特定的细胞因子环境下,有能力改变他们的基因表达模式。我们之前发现Thl细胞在受到抗原OVA,IL-2和IL-18刺激下可以产生IL-3,IL-9,IL-13和粒细胞巨噬细胞集落刺激因子GM-CSF,基于其独特的Thl细胞的可塑性特点,我们将这一类活化的Thl细胞命名为“超级Thl细胞”(Super Dinaciclib分子量 Thl cells)。在这篇论文中,我们采用流式细胞分选技术分离提取小鼠原代naive CD4+T细胞,将其分化至成熟的Thl细胞,给予IL-18和TCR再刺激后,利用流式细胞分析技术,酶联免疫吸附实验,RT-PCR等手段观察Thl表型的改变。我们首次发现IL-18和T细胞受体的刺激可以使分化成熟Thl细胞分泌更多的TGF-β,这些TGF-β对于T细胞调控起到了关键作用,因为它们参与了Super

Th1细胞分泌IL-9的过程。此外,将分化成熟的Thl细胞给予CD3抗体刺激后,我们发现Thl细胞会同时分泌少量的IL-4,这些IL-4和TGF-β协同起来促使Thl细胞分泌大量的IL-9。同时,IL-4/STAT6信号通路也是IL-9得以大量表达的必要条件。总之,在本篇论文中,我们首次发现并论证了在Super Thl细胞合成IL-9的过程中,TGF-β发挥着极为关键的作用。Thl细胞在IL-18和TCR的共同刺激条件下改变自己的表型,通过NF-κB调控通路的影响,合成并分泌TGF-β,与IL-4协同一起调控Il9的转录。
研究背景再生障碍性贫血(再障,Aplastic Anemia, AA)发病机理较为复杂,近来逐渐认识到免疫机制紊乱包括T淋巴细胞活化,调节性T细胞抑制在再障发中的作用,目前其已成为再障基础研究方面一个最活跃的领域。而调节性T细胞对再障发病机制的研究尚鲜有报道。 红髓脂肪化是再障特征性病理改变。对于再障骨髓中的骨髓组织减少、脂肪组织增多的原因及作用今年来逐渐成为研究热点之一。由于成骨细胞和脂肪细胞共同来源于骨髓间充质干细胞(Bone 很少 marrow mesenchymal stem cells, BMMSCs), BMMSCs作为骨髓基质细胞的起源细胞,BMMSCs及其分化成的细胞在再障发病过程中的作用逐渐引起人们的重视。 目前国内外均认为骨髓间充质干细胞成骨分化与成脂分化不是彼此孤立的过程,而是存在着相互制约的平衡关系。目前该领域已成为干细胞生物学研究的热点。大量的研究证实这两种分化机制与多种生长因子、及胞内外信号通路紧密相关。成脂分化的诱导因素常常是成骨分化的抑制因素,反之亦然。如过氧化物酶体增殖物激活受体-γ

(Peroxisome proliferation-activated receptor-gamma, PPAR-γ)是成脂分化的主要的诱导因子,同时它可以抑制细胞的成骨分化。 成脂分化与成骨分化是多种信号通路间相互作用的结果,包括BMP、Wnt、 确认细节 Hedgehogs, Delta/jagged蛋白、FGF、IGF、以及转录因子PPAR-γ(?)Runx2等多条信号通路。目前认为在非Wnt途径中,骨形态发生蛋白(bone

morphogenetic proteins,BMPs)途径具有重要地位。BMPs是研究最早和最有潜力的诱导间充质干细胞成骨分化的细胞因子,其属于转化生长因子β (transform growth factor-β, TGF-β)超家族的成员之一,BMP-2是目前研究的较多且作用明显的成骨因子。近来越来越多的研究发现,BMPs可通过MAPKs,PI3K等通路进行信号转导,这些信号转导通路不直接依赖转录因子Smad的激活,其中BMPs-MAPKs通路是通路中重要的一环。 Leptin和Adiponectin是脂肪组织参与免疫调节反应的两个主要的脂肪因子。Leptin对T淋巴细胞、单核细胞、巨噬细胞都具有免疫调节作用。免疫细胞受到免疫刺激后,产生细胞因子(尤其是TNF-a)作用于脂肪细胞,使其分泌Leptin,从而达到使免疫信号扩大化的目的。Adiponectin是脂肪细胞表达最丰的激素。主要在天然免疫效应中发挥作用,能抑制髓单核细胞祖细胞的增殖,抑制巨噬细胞的活性。 那么调节性T细胞是否可以诱导BMMSCs定向分化,分化方向,可能机制及作用。我们对此进行以下研究,以期从一个新的角度探索再生障碍性贫血的发病机制。 目的(1)体外分离、培养、鉴定小鼠BMMSCs,并研究其生物学特点。(2)体外分离、纯化、鉴定小鼠调节性T细胞。(3)调节性T细胞对骨髓间充质干细胞成骨成脂分化的影响及可能机制。(4)建立免疫相关骨髓衰竭小鼠模型,输注调节性T细胞、BMMSCs,观察其对骨髓脂肪化的影响。 方法(1)贴壁筛选法分离纯化BALB/c小鼠BMMSCs,胰酶消化传代,FCM鉴定细胞表型,并在特定诱导剂下诱导向脂肪细胞、成骨细胞及软骨细胞分化。(2)磁珠分选法分离纯化BALB/c小鼠脾脏调节性T细胞,用流式细胞仪鉴定其免疫表型。(3)将磁珠分选法分离纯化的BALB/c小鼠脾脏调节性T细胞与BALB/c小鼠BMMSCs共培养72小时,Real-time PCR, Western Blot检测BMMSCs成骨分化和脂肪分化相关基因和蛋白表达的变化；共培养7天后PNPP法测定碱性磷酸酶活性并进行碱性磷酸酶染色,EL1SA法和免疫组织化学染色进行I型胶原检测；共培养14天进行油红O染色检测脂滴的形成及Von Kossa染色观察钙化结节的形成。(4)应用SiRNA技术沉默BMP-2基因,p38MAPK抑制剂SB203580和ERK1/2抑制剂PD98059, PKA抑制剂H-89, Real-time PCR, Western Blot, Elisa.免疫组化方法检测BMMSCs成骨分化和脂肪分化相关基因和蛋白表达的变化,研究BMP-2, MAPKs, cAMP-PKA通路对调节性T细胞对BMMSCs成骨作用影响。(5)C57BL/6小鼠(父本)和BALB/c小鼠(母本)杂交产生CByB6F1小鼠,将F1小鼠γ射线亚致死量照射(4.