01）。熊果酸干预组的gp91phox、p67phox蛋白的表达高于DPI及LY294002干预组（P0.05）。上述结果表明熊果酸能抑制瘦素诱导的gp91phox、 p22phox、 p67phox、 Rac1蛋白表达。 2．熊果酸对瘦素诱导的HSC-T6细胞PI3K、Akt及P38MAPK信号通路活化的影响 2.1.熊果酸对瘦素诱导的HSC-T6细胞PI3K蛋白表达的影响 瘦素刺激HSC-T6细胞30min后，细胞内PI3K蛋白表达较空白对照组显著升高（P<0.01）；给予熊果酸干预后PI3K蛋白的表达明显低于瘦素组（P<0.01）。DPI及LY294002干预后PI3K的表达均低于瘦素组（均P0.05）。上述结果表明熊果酸可以抑制瘦素诱导的PI3K蛋白表达。 2.2.熊果酸对瘦素诱导的HSC-T6细胞Akt蛋白磷酸化的影响 瘦素刺激HSC-T6细胞30min后，细胞内P-Akt表达较空白对照组显著升高（P<0.01）；给予熊果酸干预后P-Akt表达明显低于瘦素组（P<0.01）。DPI及LY294002干预后P-Akt表达均低于瘦素组（均P<0.01）；熊果酸干预组的P-Akt蛋白的表达低于DPI干预组（P0.05）。上述结果表明熊果酸可以抑制瘦素诱导的Akt蛋白磷酸化。
时间 2.3.熊果酸对瘦素诱导的HSC-T6细胞P38MAPK蛋白磷酸化的影响 瘦素刺激HSC-T6细胞30min后，细胞内p-P38MAPK表达较空白对照组显著升高（P<0.01）；给予熊果酸干预后p-P38MAPK表达明显低于瘦素组（P<0.01）。DPI、SB203580及LY294002干预后p-P38MAPK均低于瘦素组（均P<0.01）；熊果酸干预组的p-P38MAPK的表达低于SB203580及LY294002干预组（P0.05）。上述结果表明熊果酸可以抑制瘦素诱导的P38MAPK蛋白磷酸化。 3．熊果酸对瘦素诱导的HSC-T6细胞TIMP-1、MMP-1蛋白表达的影响 ABT-263溶解度 3.1.熊果酸对瘦素诱导的HSC-T6细胞TIMP-1蛋白表达的影响 瘦素刺激HSC-T6细胞24h后TIMP-1蛋白表达较空白对照组升高（P<0.05）；给予熊果酸干预后TIMP-1蛋白表达明显低于瘦素组（P<0.01）。DPI、SB203580及LY294002干预后TIMP-1蛋白表达均低于瘦素组（均P<0.01）；熊果酸干预组的TIMP-1的表达低于LY294002干预组（P0.05）。上述结果表明熊果酸可以抑制瘦素诱导的TIMP-1蛋白表达。
3.2.熊果酸对瘦素诱导的HSC-T6细胞MMP-1蛋白表达的影响 瘦素刺激HSC-T6细胞24h后MMP-1蛋白表达较空白对照组降低（P<0.05）；熊果酸干预后MMP-1蛋白表达明显高于瘦素组（P<0.01）。分别给予DPI、SB203580及LY294002干预后MMP-1的表达均高于瘦素组（P<0.01或P<0.05）；熊果酸干预组的MMP-1的表达高于SB203580干预组（P0.05）。上述结果表明熊果酸可以阻断瘦素诱导的MMP-1蛋白表达下调。
结论： 1.熊果酸能抑制瘦素诱导的大鼠HSC-T6细胞NOX亚基gp91phox、p22phox、p67phox、Rac1表达及PI3K/Akt、P38MAPK信号通路的活化。 2.熊果酸下调TIMP-1蛋白及上调MMP-1蛋白表达的机制可能与熊果酸抑制NOX调控的PI3K/Akt及P38MAPK信号通路有关。
目的： 研究肝细胞核因子4α(hepatocyte nuclear factor4α,HNF4α)对肝癌细胞凋亡的影响以及与p38MAPK信号转导通路的关系,揭示HNF4a抗肝癌的机制。 方法： 1.收集处于对数生长期的肝癌细胞HepG2,利用阳离子聚合物转染技术用外源基因pCMVHNF4a转染肝癌细胞HepG2,对照组转染pEGFP-N1,转染24h后将培养基更换为新鲜的10%胎牛血清DMEM培养基,继续培养24h荧光显微镜观察对照组绿色荧光蛋白表达,选取三个视野白光下计算视野内细胞数,激发光下计算同视野发绿色荧光的细胞数,计算对照组转染效率,Western 什么 blot检测目的基因在肝细胞HepG2中的蛋白表达。 2.P38MAPK信号通路阻断剂SB203580阻断p38MAPK信号转导通路,AnnexinV-FITC-PI双染细胞后,流式细胞仪检测各组细胞凋亡率,比较转染HNF4α组的肝癌细胞HepG2凋亡率与转染pCMV组以及HNF4α+SB203580组凋亡率。RT-PCR检测凋亡相关基Caspase-3、Fas表达量,比较HNF4α组两种基因表达量与pCMV组以及HNF4α+SB203580组两种基因表达量。 结果： 1.利用阳离子聚合物转染技术用HNF4α转染肝癌细胞HepG2,荧光显微镜下观察对照组绿色荧光蛋白表达,计算48h时对照组转染效率为57%,Western blot检测转染HNF4a蛋白表达,实验组表达量明显高于对照组,与对照组相比HNF4a蛋白表达量有显著差异(P<0.