JNK通路介导软脂酸对Mcl-1的负向调节。 结论 本研究发现软脂酸诱导肝细胞凋亡过程中Mcl-1的蛋白水平显著下调,并进一步明确软脂酸诱导肝细胞凋亡主要是通过激活JNK通路、促进Mcl-1下调实现的,提示JNK/Mcl-1途径在软脂酸诱导的肝细胞脂性凋亡过程中具有重要作用。本研究为深入理解非酒精性脂肪肝发病机制提供新的线索,并为该病的治疗提供新的潜在靶点和策略。
肝纤维化(
hepatic fibrosis)是机体对慢性肝损伤的一种修复反应,是一种渐进的病理过程,是慢性肝病的共有病理变化,是多种类型细胞、氧化应激、细胞因子和生长因子等一系列复杂作用的结果。肝纤维化的特征改变是肝脏内细胞外基质( extracellu2larmatrix, ECM)的过度增生和异常沉积,如不加以及时治疗,将引起严重的肝纤维化并导致肝硬化,甚至引起肝功能衰竭。肝纤维化已成为一个危害人类生命健康的世界性问题,如果能阻止其发生,肝硬化及其并发症就能得到有效控制。近年来国内外研究认为,肝星状细胞(hepatic BI 6727制造商 stellate cell,HSC)是肝纤维化时过量ECM的主要来源,激活的HSC大量增殖,发生表型改变并分泌更多的ECM沉积于肝脏,是肝纤维化形成的关键。目前从肝纤维化发生发展的不同环节入手研制了许多抗纤维化药物,但仍未有十分确定、特效的药物,因此,寻找理想的抗肝纤维化药物及有关肝纤维化发病机制的阐明,具有重要的理论和临床意义。 苦参素(oxymatrine,OM),又名氧化苦参碱,是苦参碱经氧化合成、纯化、提取而得到的有效单体,是苦参碱的N-氧化物,氧化苦参碱因具有特殊的氧结构,从而使分子极性大增,较苦参碱具有独特的作用机理和疗效。以往的研究证实苦参素具有调节免疫、抗炎和抗肿瘤等多种功效。近年又有研究表明,OM具有抗乙肝及防治肝纤维化的作用,引起关注。本实验采用四氯化碳诱导的大鼠肝纤维化模型,首先从整体水平考察了OM对大鼠肝纤维化的作用;进一步在体外从细胞和分子水平探讨OM抑制HSC增殖的分子机制,观察OM对TGF-β1刺激HSC-T6增殖的影响,探讨MAPK信号转导通路与TGF-β1/smads信号通路在TGF-β1刺激HSC-T6增殖中的作用及相互关系,以企探讨OM的作用机制。
以及 本研究内容包括以下两个部分 一. OM对CC14诱导的大鼠肝纤维化的保护作用 建立CC14诱导的大鼠肝纤维化模型,设立正常组、模型组、OM给药组(30mg?kg-1, 60mg?kg-1, 120mg?kg-1)、秋水仙碱阳性对照组(0.2 mg?kg-1)。结果显示,OM对CC14诱导的大鼠肝纤维化具有良好的保护作用。模型组HA,LN, CIV,PCIII等纤维化血清学标志物水平较正常组明显升高,给予OM(60mg?kg-1, 120mg?kg-1)后可使其显著降低。肝纤维化的另一个重要指标肝组织Hyp含量的检测结果显示,OM可显著降低模型组的Hyp值。组织病理学结果表明OM可明显的抑制肝纤维化程度,改善肝组织结构,减少胶原沉积。 模型组大鼠肝匀浆中SOD和GSH-Px酶活性显著下降,而MDA含量显著升高。给予(30mg?kg-1,
selleck合成 60mg?kg-1, 120mg?kg-1)后可显著降低升高的MDA值,并显著升高SOD和GSH-Px活性。提示OM可缓解肝纤维化大鼠肝脏的氧化应激状态。 实验观察了OM对模型大鼠肝组织中α-SMA、TGF-β1、smad2、smad3、smad7mRNA的表达含量的影响,RT-PCR检测结果显示OM治疗后模型大鼠肝组织α-SMA、TGF-β1、smad2、smad3含量明显降低,smad7则有所上升。 在肝纤维化模型大鼠中,p38、JNK、ERK1/2磷酸化程度明显增加,给予OM可以有效降低肝纤维化大鼠p38、JNK、ERK1/2磷酸化的程度。 二探讨OM抗肝纤维化的分子机制 1苦参素对TGF -β1刺激的HSC-T6增殖的抑制作用 建立体外TGF-β1诱导的HSC-T6模型,OM在0.01,0.1,1,10,100mg·L-1浓度可抑制HSC-T6增殖,抑制率与OM浓度呈浓度依赖性。 2.苦参素对TGF -β1刺激的HSC-T6 p38MAPK信号通路的影响 Western blot检测结果显示,TGF -β1刺激HSC-T6可引起p38MAPK的迅速磷酸化,OM可显著抑制TGF -β1刺激的HSC-T6 p38MAPK的激活,明显降低p38磷酸化水平。提示抑制TGF-β1刺激的HSC-T6 p38MAPK磷酸化是OM抗肝纤维化的作用机制之一。 3.苦参素对TGF -β1刺激的HSC-T6 TGF–β1/smads信号通路的影响 Western blot检测结果显示,随TGF-β1刺激HSC-T6时间的递增,TβRI, smad2,Smad3蛋白表达递增,Smad7则有所降低。 OM可显著抑制TGF-β1刺激的HSC-T6 TβRI,smad2, Smad3蛋白的表达,上调Smad7的表达。提示抑制TGF–β1/smad通路是OM抗肝纤维化的作用机制之一。 4.