1中TIP30免疫组织化学法检测。2.3TIP30和EGFR蛋白表达与HER-2过表达晚期乳腺癌患者临床病理特征及预后之间的关系 收集53例HER-2过表达晚期乳腺癌病人的临床资料,按照患者的年龄(≥50、
蛋白酪氨酸激酶(Protein tyrosine kinases, PTK)是细胞信号转导过程中极为重要的物质,具有多种细胞功能。蛋白酪氨酸激酶的过度表达激活其下游信号通路,从而导致细胞转化、增殖、对抗细胞凋亡、促进细胞生存,最终导致肿瘤的形成。以酪氨酸激酶ABL为靶点的分子设计已经促使了Imatinib、Dasatinib等药物的成功上市,但临床耐药性一直存在。研究表明,PI3K/AKT/mTOR信号通路的补偿作用是导致Imatinib耐药的机制之一。因此,以ABL和P13K为双靶点的分子设计已成为当今药物研发的热点。 本论文以SVM (Support Vector Machine)筛选模型,以ABL和P13K为双靶点,对PubChem和MDDR化合物分子库进行了虚拟筛选,初步筛选出来的苗头化合物再经过“Lipinski’s

rule of mTOR抑制剂 5″、分子对接和合成可行性等一系列评价,最终设计合成了26个包含(S)-3-氨基吡咯烷母核的、具有潜在抗肿瘤活性的化合物。 采用MTT方法,以人肝癌细胞HepG-2、乳腺癌细胞MCF-7和白血病细胞K562为测试细胞株,对所合成的化合物进行了体外抗肿瘤活性测试。结果表明,该系列化合物对三组细胞株均有不同程度的抑制作用,其中对K562细胞有一定程度的选择性(5k-5m的IC50值分别是3.6μM,3.3μM和4.3μM)。激酶筛选实验结果表明,化合物5k-5m对ABL、PI3K(alpha)显示出一定的抑制作用,而且能够阻滞PI3K/AKT信号通路；细胞凋亡实验表明,该系列化合物较好的细胞活性的确是源于抑制了ABL和P13K蛋白激酶。

LY3009104化学结构 虽然本文设计的化合物针对单一靶点的抑制活性都较低,但协同作用使得它们表现出良好的细胞活性,而且以(S)-3-氨基吡咯烷为母核的ABL和P13K双重抑制剂尚未见报到。以此为先导化合物,有望设计出结构更加新颖、活性更好、选择性更强的的ABL和P13K双重抑制,克服Imatinib临床耐药性。
目的 探讨LY294002增强胃癌对5-氟尿嘧啶(5-FU)敏感性的可能机制。 方法 (1)不同浓度5-FU(0、1、5、10μM)联合25μM LY294002对胃癌细胞BGC823、MGC803进行处理,分别应用流式细胞术、体外细胞侵袭实验、划痕实验检测细胞凋亡、侵袭、迁移能力的变化。 (2)不同浓度LY294002(0、1、10、20μM)联合10μM 5-FU对BGC823、MGC803细胞进行处理,分别应用流式细胞术、体外细胞侵袭实验、划痕实验检测细胞凋亡、侵袭、迁移能力的变化。

(3)两种胃癌细胞分别在无任何处理、25μM LY294002、10μM 5-FU、25μMLY294002联合10μM 5-FU条件下培养24小时。采用免疫印迹法检测AKT(Ser473)磷酸化(p-AKT-Ser473)、FKHR 时间 (Ser24)及FKHRL1 (Thr253)磷酸化(p-FKHR-Ser24、p-FKHRL1-Thr253)、Fas配体(FasL)、caspase-8/FLICE抑制蛋白(c-FLIP)的表达,caspase-8及caspase-3的活化,Bid的分裂(t-Bid的形成)情况,以及基质金属蛋白酶2(MMP-2)、MM-P9、基质金属蛋白酶抑制剂1(TIMP-1)、TIMP-2、膜型基质金属蛋白酶-1(MT1-MMP)、MT2-MMP表达情况；采用电泳迁移位移试验(EMSA)法检测核转录因子κB(NFKB)/DNA结合活性；用免疫沉淀法检测Fas相关死亡结构域蛋白(FADD)的募集；采用凝胶酶谱法检测MMP-2、MMP-9的活性。 (4)使用了FasL小分子干扰RNA(siRNA)抑制FasL蛋白表达。免疫印迹法检测FasL siRNA对FasL蛋白表达的抑制情况。流式细胞仪检测使用FasL siRNA后对5-FU、LY294002、5-FU联合LY294002诱导细胞凋亡的影响。 (5)采用培养细胞皮下接种法建立裸鼠异位移植瘤模型,观察无任何处理、25mg/kg LY294002、40mg/kg 5-FU、25mg/kg LY294002联合40mg/kg 5-FU对肿瘤生长的抑制。TUNEL法检测不同处理下肿瘤细胞的凋亡情况。用免疫组化法检测p-AKT-Ser473、p-FKHR-Ser24、p-FKHRL1-Thr253、FasL活化的caspase-8(active-caspase-8)、短链c-FLIP(c-FLIPs)、t-Bid、active-caspase-3表达。 (6)建立裸鼠胃癌原位移植模型,观察无任何处理、25mg/kg LY294002、40mg/kg 5-FU.