研究方法:以含有HGF/NK4基因的质粒为模板PCR扩增NK4基因，将回收的NK4PCR产物片段克隆至腺病毒穿梭载体pYr-adshuttle-6获得重组质粒pYr-adshuttle-6-NK4。从该重组质粒上，利用LR同源重组将NK4-IRES-EGPF表达框转移至腺病毒骨架质粒pAD/BL-DEST，获得重组腺病毒质粒pAd-NK4-IRES-EGFP。该质粒经pacI线性已经化后转染293包装细胞获得重组腺病毒rAd-NK4-IRES-EGFP。采用TCID50（Tissue cell infectious dosage50，TCID50）法测定重组腺病毒滴度。重组腺病毒分别经酶切和PCR等方法进行鉴定。荧光显微镜观察转染效果。研究结果:证实腺病毒载体中含有NK4基因的目的片段；病毒滴度为6.3×108PFU/ml；荧光显微selleck产品镜发现该重组腺病毒能在HEK293细胞中高效的表达。结论:利用Gateway技术可以快速地构建同时表达NK4蛋白和绿色荧光的重组腺病毒，为下一步开展关于NK4基因的肿瘤治疗提供了基础。 第二部分Ad-NK4对人多发性骨髓瘤RPMI8226细胞增殖的影响 研究目的:观察Ad-NK4对人多发性骨髓瘤RPMI8226细胞增殖的影响及可能机制。研究方法:1. W一般estern blot和RT-PCR检测在转染Ad-NK4的RPMI8226细胞中NK4的表达。2.MTT法体外观察Ad-NK4对RPMI8226细胞增殖抑制作用。3. PI单染流式细胞仪检测Ad-NK4对RPMI8226细胞凋亡发生率的影响。4. DNA琼脂糖凝胶电泳实验验证Ad-NK4对RPMI8226细胞的诱导凋亡作用。5. Western blot检测Akt/mTOR通路主要执行蛋白、细胞周期调控蛋白及细胞凋亡相关蛋白的表达。