1及NF-κB P65、P50;(5)实时定量RT-PCR法检测CollagenⅠ/Ⅲ、TGF-p、ICAM-1、IL-6、TNF-α、IKKβ及NF-κB等mRNA的表达;(6)Western
Blot法检测Ivd3、NF-κB、JNK、IRS-1及Akt等蛋白表达。 结果 1.大鼠代谢指标比较 实验开始时NC组与模型组两组大鼠代谢指标比较:体重(BW)、尾动脉收缩压(SBP)、空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FINS)、胰岛素抵抗指数(IRI)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C)等指标均无统计学差异(P＞0.05)。 HF饮食喂养16周后NC组与模型组两组大鼠代谢指标比较:与NC组比较,模型组大鼠BW、SBP、TC、FINS、FBG及IRI升高(P＜0.01),HDL-C降低(P＜0.01)。 药物干预12周后NC、MS及HLJDT三组大鼠代谢指标比较:与NC组比较,MS组大鼠BW、SBP、TC、FINS、FBG及IRI进一步升高(P＜0.01);与MS组比较,HLJDT组大鼠BW、SBP、FINS、FBG及IRI降低(P＜0.01～0.05),HDL-C有所升高(P＜0.05)。 CDK 抑制剂 2.血清ELISA检测 药物干预12周后三组大鼠血清IL-6及TNF-α水平比较:与NC组比较,MS组大鼠IL-6及TNF-α表达升高(P＜0.01);与MS组比较,HLJDT组大鼠IL-6及TNF-α表达降低(P＜0.01)。 3.超声心动图检测 常规超声心动图指标情况:实验开始时NC组与模型组两组大鼠左室舒张、收缩末期内径(LVEDd、LVEDs)、舒张末期室间隔厚度(IVS)及左室后壁厚度(LVPW)、相对室壁厚度(RWT)、左室相对质量(LVRW)、左室短轴缩短率(FS)、舒张早期与舒张晚期峰值速度比值(E/A)及E峰减速时间(DT)均无差异(P＞0.05)。HF饮食喂养16周后,与NC组比较,模型组IVS、LVPW、RWT及LVRW明显增加(P＜0.01),E/A比值明显减小(P＜0.01),DT时间延长但差异无统计学意义(P＞0.05)。药物干预12周后,与NC组比较,MS组IVS、LVPW、RWT及LVRW均明显增加(P＜0.01),E/A比值明显减小(P＜0.01),DT延长(P＜0.05);与MS组比较,HLJDT组IVS、LVPW、RWT及LVRW均明显减小(P＜0.01),E/A比值明显升高(P＜0.05),DT有所缩短但无显著性差异(P＞0.05)。 Selleckchem PR-171 IBS指标情况:实验开始时两组大鼠IVS、LVPW的心肌校正IBS(IBS%)及背向散射积分周期变化幅度(CVIB)均无差异。HF饮食喂养16周后,与NC组比较,模型组IVS、LVPW的IBS%明显升高(P＜0.01),CVIB明显降低(P＜0.01)。药物干预12周后,与NC组比较,Ms组IVS、LVPW的IBS%明显升高(P＜0.01),CVIB明显降低(P＜0.01);与MS组比较,HLJDT组IVS、LVPW的IBS%明显降低(P＜0.05),CVIB明显升高(P＜0.05)。
4.透射电镜检测 NC组左室心肌组织细胞排列整齐,心肌细胞质膜连续、完整;粗细肌丝排列整齐,肌小节及明暗各带清晰可见;线粒体丰富、大小均一、圆形或椭圆形;核膜光滑完整,异染色质成簇状聚集在核周部;闰盘清晰、连续,结构完整;细胞间质可见成纤维细胞和少量胶原纤维;微血管管腔大小正常,内皮细胞结构正常。MS组左室心肌组织细胞部分肌节宽窄不一,有的肌节Z带、I带特征性结构变浅或消失,肌丝排列紊乱,质膜模糊、断裂;一些心肌细胞肌原纤维呈灶性溶解,有残存的膜结构和散乱的线粒体;线粒体明显增多,呈堆积状,肿胀、可见指纹状线粒体;核形状极不规则,多见深的切迹,常染色质呈团块状聚集;闰盘扭曲模糊断裂;微血管管腔狭窄,内皮细胞肿胀明显,呈柱状向管腔突起。HLJDT组左室心肌组织总体较MS组明显好转,细胞排列较整齐;肌原纤维断裂、溶解现象好转,可见T管系统略有扩张;线粒体大小较一致,排列较规整,未见指纹状线粒体;核形状较MS组规则,闰盘基本连续,间质内胶原堆积明显好转,微血管腔内皮细胞肿胀好转。
5.组织病理检测 HE染色显示,NC组心肌细胞排列整齐,细胞核大小均一,胞浆染色均匀;MS组心肌细胞排列紊乱,细胞核大小不甚规则,可见肌纤维断裂、排列紊乱;HLJDT组较MS组明显好转,心肌细胞排列较规整,肌纤维断裂少见,细胞核较规则。 6.Masson染色胶原含量检测 Masson染色显示胶原纤维呈蓝绿色,心肌纤维呈红色或黄色。NC组胶原组织分布均匀,排列整齐;MS组心肌间质胶原纤维明显增多,围绕心肌细胞的胶原纤维断裂、排列紊乱;HLJDT组较MS组心肌间质胶原纤维明显减少,相邻细胞的胶原纤维排列整齐。 定量分析显示:与NC组比较,MS组左室心肌组织胶原含量明显升高(P＜0.01);与MS组比较,HLJDT组左室心肌组织胶原含量明显降低(P＜0.05)。 PF-01367338供应商 7.TUNEL检测 TUNEL染色阳性细胞为细胞核呈棕褐色或棕黄色颗粒。NC组大鼠心肌细胞中可见极少量TUNEL染色阳性细胞。定量分析显示:与NC组比较,MS组大鼠心肌细胞中TUNEL染色阳性细胞明显增多(P＜0.01):与MS组比较,HLJDT组染色阳性细胞明显减少(P＜0.01)。 8.免疫组织化学染色检测 ICAM-1及MCP-1:染色阳性信号为棕色颗粒,定位于心肌细胞胞浆内。NC组心肌细胞胞浆内可见分布均匀、稀疏的浅棕色颗粒;MS组心肌细胞胞浆内可见浓密的深棕色颗粒;HLJDT组心肌细胞胞浆内可见较MS组明显稀疏、浅淡的棕色颗粒。 NF-κB P65、P50:染色阳性信号为棕色颗粒,主要定位于心肌细胞胞核中。NC组NF-κB在少许心肌细胞的胞浆及胞核有弱表达;MS组心肌细胞核着色分布广且呈强阳性染色;HLJDT组较MS组核着色变弱,分布局限。 9.实时定量RT-PCR检测各关键分子mRNA表达水平 与NC组比较,MS组CollagenⅠ/Ⅲ、TGF-β、ICAM-1、IL-6、TNF-α、IKKβ及NF-κB mRNA表达明显升高(P＜0.01);与MS组比较,HUDT组CollagenⅠ/Ⅲ、TGF-β、ICAM一1、IL-6、TNF-α、IKKβ及NF-κB mRNA表达明显下降(P＜0.01～0.05)。 10.Western Blot检测各关键分子蛋白表达水平 与NC组比较,MS组大鼠心肌组织IκB蛋白降解增多(P＜0.01);与MS组比较,HLJDT组大鼠心肌组织IκB蛋白降解减少(P＜0.05)。 与NC组比较,MS组大鼠心肌组织总蛋白及核蛋白NF-κB P65水平均升高(P＜0.