选择明显上调的基质金属蛋白酶-12(matrix metalloproteinase-12,MMP-12)和组织蛋白酶(Cathepsin)E基因进行验证分析。经RT-PCR验证,实验组大鼠肺组织30d、60d、90d时,MMP-12 mRNA表达的吸光度值分别为对照组的4.306、5.338、6.713倍,Cathepsin E分别为1.434、2.974、3.889倍;经免疫组织化学验证,实验组大鼠肺组织30d、60d、90d时,MMP-12蛋白表达的平均光密度(OD)值分别为对照组的1.435、1.746、2.069倍,Cathepsin E分别为1.372、1.663、2.103倍;经Western Danusertib Blot验证,实验组大鼠肺组织30d、60d、90d时,MMP-12蛋白表达的OD值分别为对照组的1.214、1.531、1.959倍,Cathepsin E分别为1.262、1.828、1.907倍。与对照组相比,实验组大鼠肺组织MMP-12和Cathepsin E mRNA和蛋白表达量明显上调,且上调的趋势与基因芯片的结果一致,差异有显著性(p
目的:支气管哮喘(简称哮喘)是由多种细胞因子参与的慢性气道炎症性疾病,气道重构和气道炎症是哮喘的特征性病理改变。气道重构是哮喘发病的重要环节,但其发病机制至今尚未完全明确。支气管上皮作为气道内的物理屏障,当其受到各种损伤因素作用后,不仅其屏障及保护作用减退,还会释放TNF-a、RANTES、IL-8等多种细胞因子,诱导气道平滑肌细胞(Airway
smooth muscle cells,ASMCs)跨膜迁移,在哮喘气道重构中发挥重要作用。Toll样受体(Toll-like receptors,TLRs)和磷脂酰肌醇3激酶(Phosphoinositide 3-Kinases,PI3K)参与多种疾病过程,与哮喘密切相关。 我们拟观察气道上皮细胞在基础状态及干预状态下的分泌功能,检测其对哮喘ASMCs跨膜迁移功能的影响,进而更科学、全面的评价哮喘状态下ASMCs的功能变化,通过使用抗TLR4抗体、渥曼青霉素和二硫代氨基吡咯烷(PDTC)干预,以探讨TLR4/PI3K相关信号分子在气道上皮细胞诱导的ASMCs迁移功能中的作用。同时,通过建立哮喘大鼠模型,我们尝试探讨传统中药合剂小青龙汤对哮喘TLR4、p-Akt表达及ASMCs迁移的影响,以寻找哮喘治疗的新药物。 方法:我们将建立大鼠哮喘模型,分离哮喘气道平滑肌细胞进行原代培养,并取肺组织,用图象分析软件测量气道壁厚度,使用免疫组织化学、ELISA、改良Boyden小室等方法,用TNF-α、抗TLR4抗体、渥漫青霉素、PDTC和小青龙汤等作为工具药,探讨哮喘状态下TLR4/PI3K信号相关分子在哮喘气道上皮诱导的气道平滑肌细胞迁移中的作用及其机制。
结果: ⑴与正常对照组相比,各浓度TNF-a组IL-8和RANTES的分泌水平显著增加(P<0.01),平滑肌距基底膜的距离显著减小(P
目的探讨SHR和2K1C两型高血压模型血管重构形式是否相同。检测MAPK家族成员ERK1/2、上游调解激酶MEK1/2以及下游底物CPLA2在两型高血压模型中主动脉和肾脏血管平滑肌细胞中的表达特点,对比研究ERK1/2信号通路在两型高血压模型血管平滑肌细胞增殖/凋亡中的作用及调节途径,进一步明确高血压血管平滑肌细胞变化的分子机制。 方法5周龄的雄性Wistar kyoto大鼠(WKY)36只,随机分为两肾一夹型高血压组(简称2K1C组,18只)和假手术正常血压对照组(简称SHAM组,12只)以及空白对照组(简称CON组,6只)。2K1C组大鼠用直径0.25mm的银夹部分夹闭左肾动脉,关闭切口。SHAM组仅分离出左肾动脉,不做其它处理,作为假手术对照组;空白对照组不做任何处理。术后各组大鼠分别观察至8周龄、16周龄和24周龄。SHR大鼠不做特殊处理,分别于8周龄(简称SHR8组,6只),16周龄(简称SHR16组,6只)和24周龄(简称SHR24组,6只)处死,迅速提取肾脏和胸主动脉,一半置于4%中性多聚甲醛溶液固定,行HE和免疫组化染色。另一半置于-80℃冰箱中冻存用于Western-blotting检测。目镜测微尺测量两型高血压大鼠各周龄主动脉和肾脏细小动脉血管中膜厚度/血管内径比值,免疫组织化学和Western 那个 blot方法对比研究两型高血压大鼠主动脉、肾脏细小动脉平滑肌细胞中p-ERK1/2、p-MEK1/2及CPLA2的表达。 结果1、血压变化:2K1C组大鼠造模一周后血压明显升高(P<0.01),随后稳定保持在较高水平(192.58±12.92mmHg)。SHR从8周龄组开始血压升高,随着周龄增加SHR组血压逐渐升高,18周龄后,SHR组血压明显高于2K1C组(P<0.01或P<0.01),SHR各周龄组肾小球损伤率均明显高于同周龄2K1C组(P<0.05或P<0.05)。5、CPLA2检测情况:SHR和2K1C主动脉、肾脏细小动脉平滑肌细胞CPLA2表达均明显高于同周龄假手术组(P<0.05或P<0.01)。相同周龄SHR和2K1C比较,2K1C8和16周龄组叶间动脉CPLA2表达明显高于相应SHR组(P<0.05),SHR8、16、24周龄组小叶间动脉CPLA2表达明显高于相应2K1C组(P<0.05或P
目的：通过构建动物模型,研究信号分子p38MAPK在心肌缺血再灌注损伤中的作用,同时探讨p38MAPK抑制剂及蒙诺对心肌缺血再灌注损伤的作用及其与p38MAPK信号传导途径的关系。
GDC-0449半抑制浓度 方法：雄性SD大鼠随机分为5组(N组：假手术组；A组：单纯缺血组；B组：缺血再灌注组；C组：蒙诺干预+缺血再灌注组；D组：p38MAPK抑制剂干预+缺血再灌注组)。术前及术中监测心电图变化,C组用蒙诺进行干预,D组用抑制剂进行干预,余用生理盐水干预。造模完成后抽血进行心肌酶谱分析,并处死大鼠取心肌组织用PCR及免疫组化方法检测磷酸化p38MAPK (p-p38MAPK)的基因和蛋白表达。 结果：1.B组、C组及D组的血清CK、CKMB含量值较对照组(N组)均升高,D组和C组的含量值较B组降低,差异均极显著(P<0.01)。2.B组p38MAPK基因的含量较N组升高,D组的含量较B组降低,差异均极显著(P<0.01)。3.A组、B组、C组及D组的p-p38MAPK含量均高于N组,A组和D组含量低于B组,差异均极显著(P
目的：探索异戊烯基黄酮异补骨脂甲素(Isobavachin, IBA)是否具有促小鼠胚胎干(embryonic stem, ES)细胞定向分化为神经细胞的作用,并探索其相应的分化机制。 方法：采用悬滴培养4-/4+法模拟体内胚胎发育状态,形成拟胚体,继而进行贴壁培养。IBA以终浓度为10-7mol/L诱导小鼠ES细胞定向分化为神经细胞,10-7mol/L全反式维甲酸(Retinoic acid, RA)为阳性对照,0.