2、100、200、300nM克唑替尼处理H2228细胞48h,通过Annexin V流式细胞仪检测凋亡细胞,了解克唑替尼诱导细胞凋亡的作用。 3、采用50、100、200、400、800μm/L浓度的低氧模拟剂氯化钴(CoCl2)作用H2228细胞24h,观察HIF-1α的mRNA表达水平变化。采用200μm/L浓度的氯化钴作用H2I-BET-762半抑制浓度228细胞0、3、6、12、24、48h,通过逆转录PCR(reversetranscription-PCR, RT-PCR)方法观察HIF-1α的mRNA表达水平变化。 4、采用0、60、125、250、500、1000nM的克唑替尼处理H2228细胞24h,采用RT-PCR方法观察HIF-1α的mRNA表A-1210477体内达水平变化。 5、采用500nM克唑替尼分别处理常氧组(未经氯化钴处理)、低氧组(经氯化钴处理)细胞24h,通过RT-PCR方法检测HIF-1α以及其上游调控因子丝氨酸苏氨酸蛋白激酶Akt、下游靶基因血管内皮生长因子(vascularendothelial growth factor,VEGF)的mRNA表达AZD6244体外水平变化。 结果: 1、随着克唑替尼药物浓度升高,细胞增殖抑制率逐渐升高,呈剂量依赖性,半增殖抑制浓度(IC50)为335nM。 2、H2228细胞凋亡率随着克唑替尼浓度增加而升高,呈剂量依赖性。 3、当氯化钴作用时间为6-48h或氯化钴浓度大于100μm/L,随着氯化钴浓度及作用时间的增加,HIF-1α的mRNA表达水平逐渐下降,呈剂量及时间依赖性,于200μm/L浓度时下降最明显。