1正常组、空白组以及各治疗组之间颗粒细胞中ACTA、ACTRIIB、ALK4、Smad2、Smad3、Smad4 m RNA表达比较正常组较空白组颗粒细胞中ACTA、ACTRIIB、ALK4、Smad2、Smad3、Smad4 m RNA表达升高(P<0.05);疏肝中剂量组表达高于疏肝低剂量组(P<0.05),其余各组表达由高至低依次是补肾中剂量组、疏肝高剂量组、疏肝中剂量组、补肾低剂量组、疏肝低剂量组,差异具有统计学意义(P0.05);空白组、正常组与疏肝低剂量组ACTA、ACTRIIB、ALK4、Smad2、Smad3、Smad4

m RNA表达下降(均P0.05);空白组、正常组与补肾低剂量组ACTA、ACTRIIB、ALK4、Smad2、Smad3、Smad4m RNA表达下降(均P<0.05)。2各组之间体外培养卵巢壁颗粒细胞中ACTA、ACTRIIB、ALK4、Smad2、Smad3、P-Smad2、P-Smad3、Smad4蛋白的表达2.1免疫组化结果2.1.1正常组、空白组以及各治疗组之间颗粒细胞中ACTA、ACTRIIB、ALK4、Smad2、Smad3、P-Smad2、P-Smad3、Smad4蛋白表达比较正常组与空白组之间比较,正常组颗粒细胞中ACTA、ACTRIIB、ALK4、Smad2、Smad3、P-Smad2、P-Smad3、Smad4蛋白表达均高于空白组(均P<0.05)。与空白组、正常组比较,疏肝低、中、高剂量组颗粒细胞中ACTA、ACTRIIB、ALK4、Smad2、Smad3、P-Smad2、P-Smad3、Smad4蛋白表达升高(均P<0.05);且疏肝高剂量组蛋白表达最高,其次为疏肝中、低剂量组,呈剂量依赖性。与正常组、空白组比较,补肾低、中、高剂量组的颗粒细胞中ACTA、ACTRIIB、ALK4、Smad2、Smad3、P-Smad2、P-Smad3、Smad4蛋白表达升高(均P0.05),补肾中剂量组较疏肝中剂量组蛋白表达均升高(P0.05)。2.1.2疏肝、补肾阻断剂组与非阻断剂各组ACTA、ACTRIIB、ALK4、Smad2、Smad3、P-Smad2、P-Smad3、Smad4蛋白表达比较与疏肝阻断剂组比较,疏肝高剂量组ACTA、ACTRIIB、ALK4、P-Smad2、P-Smad3、Smad2、Smad3、Smad4蛋白表达明显升高(均P0.05);空白组、正常组与疏肝低剂量组ACTA、ACTRIIB、ALK4、Smad2、Smad3、P-Smad2、P-Smad3、Smad4蛋白表达下降(均P<0.05)。与补肾阻断剂组比较,补肾高剂量组ACTA、ACTRIIB、ALK4、Smad2、Smad3、P-Smad2、P-Smad3、Smad4蛋白表达明显升高(均P0.05);空白组、正常组与补肾低剂量组ACTA、ACTRIIB、ALK4、Smad2、Smad3、P-Smad2、P-Smad3、Smad4蛋白表达下降(均P<0.05)。2.2细胞免疫荧光结果2.2.1正常组、空白组以及各治疗组之间颗粒细胞中ACTA、ACTRIIB、ALK4、Smad2、Smad3、P-Smad2、P-Smad3、Smad4蛋白表达比较正常组与空白组之间比较,正常组颗粒细胞中ACTA、ACTRIIB、ALK4、Smad2、Smad3、P-Smad2、P-Smad3、Smad4蛋白表达均高于空白组(均P<0.05)。与空白组、正常组比较,疏肝低、中、高剂量组颗粒细胞中ACTA、ACTRIIB、ALK4、Smad2、Smad3、P-Smad2、P-Smad3、Smad4蛋白表达升高(均P<0.05);且疏肝高剂量组蛋白表达最高,其次为疏肝中、低剂量组,呈剂量依赖性。与正常组、空白组比较,补肾低、中、高剂量组的颗粒细胞中ACTA、ACTRIIB、ALK4、Smad2、Smad3、P-Smad2、P-Smad3、Smad4蛋白表达升高(均P0.05),补肾中剂量组较疏肝中剂量组蛋白表达均升高(P0.05)。2.2.2疏肝、补肾阻断剂组与非阻断剂各组ACTA、ACTRIIB、ALK4、Smad2、Smad3、P-Smad2、P-Smad3、Smad4蛋白表达比较与疏肝阻断剂组比较,疏肝高剂量组ACTA、ACTRIIB、ALK4、Smad2、Smad3、P-Smad2、P-Smad3、Smad4蛋白表达明显升高(均P0.05);空白组、正常组与疏肝低剂量组ACTA、ACTRIIB、ALK4、P-Smad2、P-Smad3、Smad2、Smad3、Smad4蛋白表达下降(均P<0.05)。与补肾阻断剂组比较,补肾高剂量组ACTA、ACTRIIB、ALK4、Smad2、Smad3、P-Smad2、P-Smad3、Smad4蛋白表达明显升高(均P0.05);空白组、正常组与补肾低剂量组ACTA、ACTRIIB、ALK4、Smad2、Smad3、P-Smad2、P-Smad3、Smad4蛋白表达下降(均P
肺癌(1ung

Microtubule Associated抑制剂 所以 Purmorphamine订单 cancer)是原发性肺癌的简称,其中85%是非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)。2008年,全球确诊为肺癌约1.61亿人,为癌症总人数的13%。我国每年肺癌发生增长率为26.9%,若不及时采取相关措施,2025年可能达100万人,其中云南宣威市肺癌标准化死亡千分率为0.83,是全国平均水平的4.

应用胆管正常上皮细胞、肝内胆管癌及肝门部胆管癌细胞株,经qRT-PCR和Western blot检测各细胞株中FBXW7 mRNA和蛋白表达水平。2.收集山东大学齐鲁医院普外科手术切除胆管癌及对应癌旁新鲜组织,经Western blot检测胆管癌及癌旁组织中FBXW7蛋白表达水平。3.收集山东大学齐鲁医院普外科手术切除肝内胆管癌及癌旁石蜡组织,并制成石蜡组织切片,经免疫组织化学染色检测肝内胆管癌癌旁组织、无转移的胆管癌组织及有转移的胆管癌组织中的FBXW7蛋白表达水平,并统计分析其与肿瘤大小、转移、分化程度及TNM分期之间的关系。4.收集山东大学齐鲁医院普外科手术切除肝门部胆管癌及癌旁石蜡组织,并制成石蜡组织切片,经免疫组织化学染色检测肝门部胆管癌癌旁组织、无转移的胆管癌组织及有转移的胆管癌组织中的FBXW7蛋白表达水平,并统计分析其与肿瘤大小、转移、分化程度及TNM分期之间的关系。5.收集山东大学齐鲁医院普外科手术切除远端胆管癌及癌旁石蜡组织,并制成石蜡组织切片,经免疫组织化学染色检测远端胆管癌癌旁组织、无转移的胆管癌组织及有转移的胆管癌组织中的FBXW7蛋白表达水平,并统计分析其与肿瘤大小、转移、分化程度及TNM分期之间的关系。[结果]1.

Tariquidar体外 qRT-PCR和Western blot结果显示正常胆管上皮细胞(HIBEpic)中FBXW7 mRNA和蛋白水平明显高于肝内胆管癌细胞(HuCCT1和RBE)及肝门部胆管癌细胞(QBC939和FRH0201)。2.收集7例胆管癌及对应癌旁新鲜组织,Western blot结果显示其中6例胆管癌癌旁组织中FBXW7表达明显高于胆管癌组织。3.通过免疫组织化学染色检测肝内胆管癌癌旁组织、无转移的胆管癌组织及有转移的胆管癌组织中的FBXW7蛋白表达水平,结果表明肝内胆管癌癌旁组织中FBXW7表达最高,无转移的胆管癌中表达较高,而具有转移灶的胆管癌中FBXW7的表达最低；统计学分析显示FBXW7表达与肝内胆管癌肿瘤大小、转移、分化程度及TNM分期明显相关。4.通过免疫组织化学染色检测肝门部胆管癌癌旁组织、无转移的胆管癌组织及有转移的胆管癌组织中的FBXW7蛋白表达水平,结果表明肝门部胆管癌癌旁组织中FBXW7表达最高,无转移的胆管癌中表达较高,而具有转移灶的胆管癌中FBXW7的表达最低；统计学分析显示FBXW7表达与肝门部胆管癌转移、分化程度及TNM分期明显相关。5.通过免疫组织化学染色检测远端胆管癌癌旁组织、无转移的胆管癌组织及有转移的胆管癌组织中的FBXW7蛋白表达水平,结果表明各组间FBXW7表达无明显差异；统计学分析显示FBXW7表达与远端胆管癌肿瘤大小、转移、分化程度及TNM分期无明显相关性。[结论]1.FBXW7在胆管正常上皮细胞中表达量明显高于肝内胆管癌细胞及肝门部胆管癌细胞,且FBXW7在胆管癌癌旁组织中表达明显高于胆管癌组织,提示FBXW7在胆管癌中为抑癌基因。2.

NVP-AUY922 FBXW7可抑制肝内胆管癌及肝门部胆管转移,且与肿瘤分化程度及TNM分期明显相关。第二部分FBXW7调控胆管癌上皮-间质转化、干细胞特性及转移的作用研究[目的]上述临床研究结果表明FBXW7可抑制胆管癌转移,且与肝内胆管癌及肝门部胆管癌分化程度及TNM分期明显相关。本部分通过体外细胞实验和体内裸鼠转移模瘤型进一步检测FBXW7在胆管癌EMT、干细胞特性和转移中的作用。[方法]1.构建FBXW7干扰质粒(pBabe-shFBXW7.1及pBabe-shFBXW7.2),经逆转录病毒转染pBabe-shFBXW7.1、pBabe-shFBXW7.2及其空白对照质粒,使用FBXW7基础表达水平相对较高的HuCCT1细胞和RBE细胞构建FBXW7稳定低表达的细胞株及其对照组细胞。通过qRT-PCR和Western

blot检测所构建的稳定转染细胞系中FBXW7 mRNA及蛋白表达水平。2.构建FBXW7高表达质粒(pBabe-FBXW7),经逆转录病毒转染pBabe-FBXW7及其空白对照质粒,使用FBXW7基础表达水平相对较低的QBC939细胞和FRH0201细胞构建FBXW7稳定过表达的细胞株及其对照组细胞。通过qRT-PCR和Western cMet inhibitor blot检测所构建的稳定转染的细胞系中FBXW7 mRNA及蛋白表达水平。3.应用FBXW7稳定低表达及高表达细胞株,普通光学显微镜观察FBXW7表达改变对细胞表型的影响；经Western blot检测EMT相关标志分子(E-cadherin、 α-catenin、Fibronectin及Vimentin)的表达水平改变,验证FBXW7对胆管癌EMT的调控作用。4.应用FBXW7稳定低表达及高表达细胞株,通过Western blot检测其干细胞特性标志分子(Nanog、OCT4)的表达；经Primary sphere formation及Secondary sphere formation实验检测干细胞自我更新能力,验证FBXW7对胆管癌干细胞特性的调控作用。5.应用FBXW7稳定低表达及高表达细胞株,通过细胞划痕实验、Transwell小室细胞迁移实验检测FBXW7在调控胆管癌细胞迁移能力中的作用；经Matrigel侵袭实验检测FBXW7在调控胆管癌细胞侵袭能力中的作用。6.

猪诱导多能性干细胞的转录组分析 对LFB2i-piPSCs进行了mRNA和sRNA测序，并且和PEF、FGF2-piPSCs（能够产生嵌合体动物的piPSCs）数据进行了比较。mRNA-seq结果显示LFB2i-piPSCs表达高水平的SOX2,

L-MYC, ESRRB等基因以及相对低水平的POU5F1(OCT4), KLF4和NANOG基因。miRNAs分析表明LFB2i-piPSCs高表达与多能性相关的miR-17-92、miR-302b-367、miR-106a-363、miR-290家族中的miRNAs，低表达let-7家族中的miRNAs。 4.山羊NANOG启动子报告载体的构建和细胞多能性监控 Temsirolimus供应商 首先尝试用不同的培养条件进行了山羊ES样细胞的分离和iPS样细胞的诱导，并对获得的细胞进行了初步鉴定。之后克隆并验证了山羊NANOG近端启动子，将其与EGFP相连接构建了报告载体。通过细胞转染和显微注射证明该报告载体具备表达功能和组织特异性。将该载体稳定转染到山羊成纤维细胞中作为重编程的受体细胞，从而对山羊体细胞重编程过程进行监控。同时将该报告载体显微注射到山羊胚胎中用于监控山羊早期胚胎的发育进程。
胚胎干细胞（Embryonic stem cells, ESCs）主要来源于胚胎囊胚期的内细胞团，具有分化的多潜能性和自我更新能力。转录因子调控网络和表观修饰调节，包括microRNA（miRNA）调控，在ESC的多能性维持和分化调节中都发挥着重要的作用。2010年，研究发现维生素C能促进诱导干细胞（induced pluripotent stem cells, 此网站 iPSC）产生，此后维生素C在诱导细胞重编程和ESCs调控领域的研究引起了广泛关注。研究表明，维生素C有利于促进ESCs多能性维持，改善iPSC的诱导效率以及提高iPSC的重编程质量。目前研究表明，维生素C主要调控干细胞的表观修饰，包括DNA甲基化和组蛋白修饰等。 本研究以小鼠胚胎干细胞J1（J1mESCs）和小鼠畸胎瘤细胞系F9为研究对象，结合转录组表达谱芯片分析、miRNA测序分析以及实验验证等方法，探索维生素C调控干细胞多能性维持的作用机理。 1.维生素C促进无饲养层J1mESCs的自我更新和克隆形态。在无LIF的干细胞培养液中培养J1mESCs，加入维生素C后，J1mESCs的克隆形态变大，碱性磷酸酶（alkalinephosphatase, AP）活性升高。而维甲酸（retinoic acid, RA）诱导分化后，J1mESCs克隆形态明显变小，周围出现大量分化细胞，AP活性也显著降低。重新加入维生素C后，干细胞克隆形态明显恢复，AP活性也恢复较高水平。表明维生素C有助于促进干细胞的自我更新，并能够拮抗RA诱导的干细胞分化。 2.维生素C能够促进小鼠J1mESCs多能性基因的表达，并下调一些与分化相关的细胞信号转导途径。 a）基因表达谱芯片证实维生素C有利于小鼠J1mESCs多能性基因表达。收集维生素C处理的J1mESCs，进行基因表达谱芯片分析，以寻找维生素C的下游调控基因。利用在线软件DAVID（Database

for Annotation, Visualization and Integrated Discovery）对实验数据进行GO（Gene Ontology）和KEGG（Kyoto Encyclopedia of Genes andGenomes）分析，结果发现，维生素C广泛促进多能性基因的表达，其中包括Esrrb、Utf1、Klf4、Tcl1、Eras、Nanog等重要的多能性因子，同时下调分化相关转录因子的表达。上述结果得到实时定量PCR（qPCR）的验证。

b）维生素C激活核心多能性基因转录。分别构建小鼠Nanog、Oct4、Sox2、Klf4基因近端启动子萤光素酶报告载体，检测维生素C处理对这些启动子活性的影响。结果发现，维生素C能促进Nanog和Oct4近端启动子活性上升。同时qPCR和Western Blot验证表明，维生素C能够促进Nanog基因表达上升。 c）维生素C下调部分与细胞分化相关的信号转导途径。采用信号通路报告载体转染J1mESCs和小鼠F9细胞，加入维生素C后检测信号通路效应元件的变化。结果发现，维生素C下调NF-κB、JNK、Myc等与细胞凋亡、分裂、周期调控相关的细胞信号转导途径。 3.维生素C促进mESC中特异性miRNA的表达，并通过miRNA介导的基因表达调控，抑制与细胞分化和发育相关基因。 a） miRNA深度测序结果表明维生素C能促进mESC中特异性miRNAs的表达。收集维生素C处理的J1mESCs，在Illumina HiSeq2000平台上进行小RNA深度测序分析。结果发现，维生素C促进干细胞中miRNA整体表达水平，发生显著变化的miRNAs中，超过70%被上调，尤其是干细胞特异性miRNA簇，包括miR-290–295、miR-17–92、miR-106b–25等，许多Dlk1-Dio3印记区编码的miRNAs也能被维生素C显著上调，包括miR-143、miR-434、miR-540、miR-433等，而与分化相关的miRNAs表达则下调，如miR-470。上述结果得到miRNA Tubastatin A qPCR的验证。 b）筛选上述实验中维生素C上调的miRNAs，利用在线软件TargetScan预测靶标，并进行GO分析，发现这些靶标主要富集于调控细胞分化与发育相关途径。筛选miR-296,miR-361, miR-143, miR-331, miR-434部分靶标，利用双萤光素酶报告检测miRNA对靶标抑制作用以及qPCR验证靶标mRNA表达水平。结果表明，预测到的11条靶标序列，其中有9条能被相应的miRNAs抑制，同时，qPCR检测的4个靶基因mRNA水平，其中3个靶基因表达显著下调。说明预测具有较高的准确性，预测结果可以反映出miRNA的调控作用。 c）维生素C上调miR-296, miR-361, miR-143, miR-331, miR-434的表达，维生素C下调Kdm6b、Sox6、Klf13、Sox17等与调控发育相关基因，同时，这些上调的miRNA靶向抑制这些下调的基因。上述结果表明，维生素C通过介导miRNA表达抑制干细胞中与分化和发育相关的基因。 4.

40±4.77/)ml,HGF/SF组(126.80±5.40/)ml,PD98059组(82.80±4.15/)ml,P
目的探讨包被磁珠的人视网膜色素上皮(RPE)细胞在受磁场作用时丝裂素活化蛋白激酶(MAPK)信号转导通路的变化。方法将胶原包被的磁珠悬液加入体外培养的人RPE细胞后孵育,附着磁珠的细胞放置在恒定磁场中。用免疫印迹法检测MAPK的细胞外信号调控激酶(ERK)、c-jun氨基端激酶(JNK)及p38信号分子在3~30min时间段的表达情况和p38特异性阻断剂(SB203580)的干预作用,用免疫荧光染色法观察活化型p38的表达变化。结果在RPE细胞中,总ERK、JNK及p38均有表达,活化型ERK、p38亦有表达,活化型JNK未见表达。活化型ERK的表达无明显变化,而活化型p38在受磁场作用前表达量很低,但作用5min后即显著增高。吡啶异咪哒唑类化合物SB203580可以抑制牵拉作用造成的p38磷酸化。免疫荧光染色也显示牵拉刺激可以增加活化型p38的荧光量。结论磁场可以对包被磁珠的RPE细胞产生作用,部分作用可能通过p38信号转导途径产生。
目的探讨降钙素基因相关肽(CGRP)对角质形成细胞表达和分泌血管内皮生长因子(VEGF)的调控。方法用实时定量PCR(RT-PCR)方法检测CGRP、CGRP1型受体拮抗剂CGRP8-37、细胞外信号调节激酶ERK1/2特异性的抑制剂PD98059、p38MAPK特异性拮抗剂SB203580对HaCaT角质形成细胞表达VEGF

可能 mRNA水平的影响;用酶联免疫吸附方法检测HaCaT细胞分泌至培养液中VEGF蛋白的水平。结果CGRP时间依赖性地促进HaCaT细胞表达VEGF mRNA和分泌VEGF蛋白; CGRP8-37和PD98059均可明显抑制CGRP刺激的HaCaT细胞表达和分泌VEGF,SB203580不能减弱CGRP刺激的VEGF表达和分泌。结论CGRP可以上调HaCaT细胞表达和分泌VEGF,CGRP1型受体及其相关的ERK1/2信号通路参与其调控。
Aim:To observe the effects of sodium ferulate (SF) on amyloid beta (Aβ)_(1-40)-induced p38 mitogen-activated protein kinase (MAPK) signal transduction path-way and the neuroprotective effects of SF.Methods:Rats were injectedintracerebroventricularly with Aβ_(1-40).Six hours after injection,Western blottingwas used to Mocetinostat 价格 determine the expressions of phosphorylated mitogen-activated pro-tein kinase kinase (MKK)3/MKK6,phospho-p38

MAPK,interleukin (IL)-1β,phospho-MAPK activating protein kinase 2 (MAPKAPK-2),the 27 或者 kDa heat shockprotein (Hsp27),procaspase-9,-3,and-7 cleavage,and poly (ADP-ribose) poly-merase (PARP) cleavage.Seven days after injection,Nissl staining was used toobserve the morphological

change in hippocampal CA1 regions.Results:Intracerebroventricular injection of Aβ_(1-40)induced an increase in phosphorylatedMKK3/MKK6 and p38 MAPK expressions in hippocampal tissue.These increases,in combination with enhanced interleukin (IL)-1β protein expression and reducedphospho-MAPKAPK2 and phospho-Hsp27 expression,mediate the Aβ-inducedactivation of cell death events as assessed by cleavage of procaspase-9,-3,and -7and caspase-3 substrate PARP cleavage.Pretreatment with SF (100 mg/kg and 200mg/kg daily,3 weeks) significantly prevented Aβ_(1-40)-induced increases in phos-phorylated MKK3/MKK6 and p38 MAPK expression.The Aβ_(1-40)-induced in-crease in IL-1β protein level was attenuated by pretreatment with SF.In addition,Aβ_(1-40)-induced decreases in phosphorylated MAPKAPK2 and Hsp27 expressionwere abrogated by administration of SF.In parallel with these findings,Aβ_(1-40)-induced changes in activation of caspase-9,caspase-7,and caspase-3 wereinhibited by pretreatment with SE Conclusion:SF prevents Aβ_(1-40)-induced neu-rotoxicity through suppression of MKK3/MKK6-p38 MAPK activity and IL-1expression and upregulation of phospho-Hsp27 expression.

79×102Da,旋光度为[α]D20-48.62°(c0.1, H2O),总糖含量为57.18%,酸性多糖含量为12.39%,SO42-含量为29.75%。HS-4的理化性质为：分子量为4.23×105Da,总糖含量为38.12%,酸性多糖含量为16.52%,硫酸根含量为32.64%,单糖组分主要以岩藻糖为主,还含有小部分半乳糖,不含蛋白质和核酸。 2、HS-3促进神经干细胞球迁移作用研究。 从胎龄为E14.5d胚胎大脑皮层中提取的神经干细胞,在含有外源性生长因子bFGF和EGF存在的条件下细胞会分裂增殖,聚集成团,即神经细胞球。经鉴定提取的神经干细胞BrdU染色呈阳性,Nestin荧光染色呈阳性,经含.2%胎牛血清诱导后可以分化为星形胶质细胞(GFAP阳性)和神经元细胞(TUJ1阳性)。HS-3能诱导神经球在末铺P-L-L的培养板中粘附和迁移,迁移距离呈现浓度依赖性,在80μg/mL

HS-3作用72h后,神经球的迁移距离为438μm。HS-3还能有效维持神经球在撤离生长因子后细胞的存活。在HS-3的刺激下，神经干细胞能分化为神经元和星形胶质细胞,浓度增加,分化为神经元的比例增大；且更有意义的是分化的神经元细胞能沿着神经球轴线向外迁移,而分化的星形胶质细胞滞留在神经球中,。PD98059和Noggin对HS-3介导的细胞迁移没有影响,而LY294002能有效抑制神经球的迁移(P
糖皮质激素是治疗炎症及自身免疫性疾病的常见药物。内源性及外源性合成的糖皮质激素均能有效抑制炎症反应,纠正炎症反应的失衡,避免过度或持续炎症所引起的组织损伤。正由于疗效显著,糖皮质激素数十年来一直应用于临床一线,广泛用于败血症性休克、哮喘、炎性肠病、类风湿性关节炎和多发性硬化症等炎症相关性疾病的治疗。然而,由于长期使用所带来的副作用及日益增加的耐药性,糖皮质激素的临床效能正面临前所未有的挑战。因而,深入研究和进一步阐明糖皮质激素的作用机理是一项重要的科学问题。 并且 selleckchem 长期以来广为人们认可的糖皮质激素作用机制是基因组学说,即：通过与糖皮质激素受体(Glucocorticoid receptor, GR)结合形成复合物,转位进入细胞核后,与靶基因启动子区域糖皮质激素反应元件(Glucocorticoid responsive element,GRE)结合或者与转录因子相互作用,从而直接或间接调控靶基因的转录。以往的研究主要聚焦在信号分子及炎症介质等蛋白编码基因上,而对于与基因表达异常关系密切的非编码序列如microRNAs

(miRNAs)的作用则知之甚少。 近年来,miRNA已成为基因表达调控的“明星”分子。它们由细胞内核基因组转录为RNA,经过Drosha和Dicer酶剪切加工后,成为成熟的miRNA。成熟miRNA的种子序列可与靶基因mRNA的3’端非编码区互补结合,导致mRNA降解或者蛋白翻译抑制。越来越多的证据表明：miRNA是机体内各种生理及病理活动的关键调节因子,并参与固有免疫应答及适应性免疫应答。Toll样受体(Toll

Epigenetics合成 Library like receptor, TLR)是固有免疫细胞重要的识别受体,可结合病原体的特定结构成分,从而激活免疫细胞。其中,TLR4信号通路的活化,诱导大量不同的miRNA,例如miR-146a,miR-147,let-7e,let-7i和miR-155表达上调等；而这些miRNA又可靶向抑制某些信号传导蛋白的表达,反馈调控TLR4信号通路的强度,从而促进或者抑制炎症应答。这些研究结果提示：miRNA在炎症应答中扮演着重要角色。那么,糖皮质激素是否调控miRNA的表达?miRNA是否参与糖皮质激素的抑炎作用?作用机制又如何?目前,均未见系统的研究报道。 有鉴于此,我们以脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)诱导的巨噬细胞炎症反应模型为研究对象,利用基因芯片等技术系统分析了糖皮质激素地塞米松对miRNA表达谱的改变情况,并对糖皮质激素调控miRNA表达的机制、miRNA参与糖皮质激素抑炎的作用及分子机制展开研究,以期阐明糖皮质激素抗炎的非编码RNA机制,为后续的药物开发提供理论和实验基础。 第一部分糖皮质激素影响microRNAs在炎症反应中的表达 巨噬细胞是天然免疫系统的重要组成部分,在炎症反应中起十分关键的作用。巨噬细胞等炎症细胞渗出是炎症反应最主要的特征。渗出的巨噬细胞是一柄双刃剑,一方面,巨噬细胞被激活后,释放炎性介质,激活免疫系统,有效地杀伤病原体,构成炎症反应的防御环节；另一方面,巨噬细胞过度激活则释放过量炎性介质、蛋白水解酶及氧自由基等加重组织损伤并延长炎症过程。Raw264.7细胞是小鼠来源的单核巨噬细胞系,在受到LPS刺激时,可模拟机体炎症细胞的反应状态,已成为一种常见的炎症反应细胞模型被广泛应用于炎症领域的相关研究。 据此,我们首先以LPS刺激Raw264.

哮喘对照组;E.哮喘+ diazoxide组;F.哮喘+5-HD组。以激光共聚焦显微镜成像法检测线粒体膜电位;western blot法检测细胞PKCα蛋白的表达;realtime PCR法检测细胞PKCαmRNA的表达;MTT法检测细胞的增殖情况,及流式细胞术检测细胞周期。 结果 (1)B组中R-123荧光明显增强,PKCα蛋白表达量增高,PKCαmRNA表达量增高,细胞增殖明显增加,与A组比较,均有p<0.05;而C组与正常对照组相比较,上述指标均无明显变化。(2)D组与E组较A组R-123荧光明显增强,PKCα蛋白与PKCαmRNA表达量增高,细胞增殖明显增加(p<0.05);其中E组上述指标的增高较D组更显著(p<0.05)。而哮喘气道平滑肌细胞以5-HD干预24小时后,与哮喘对照组相比(即F组与D组相比),R-123荧光明显减弱,PKCα蛋白与mRNA表达量降低,细胞增殖明显减少(P
目的探讨PI3K/Akt/GSK-3β通路对人肾小管上皮细胞(HK-2)缺血再灌注损伤过程中细胞凋亡的调控及重组人红细胞生成素(rHuEPO)的预保护作用。

方法正常培养的HK-2细胞,分为7组,正常对照组、缺血再灌注(I/R)组、LY294002干预组(PI3K/Akt阻断剂、10 umol/L)、Licl干预组(GSK-3β阻断剂、20 umol/L)、rHuEPO干预组(20 U/L)、rHuEPO+LY294002双干预组、HuEPO +Licl双干预组。RT-PCR及Western印迹法检测蛋白激酶B (Akt)、糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶Caspase-3基因水平及蛋白活性水平; compound screening assay MTT法检测细胞活力;AnnexinV/PI染色结合流式细胞仪技术检测细胞凋亡。 结果缺血再灌注损伤诱导HK-2细胞凋亡率上调(15.2±1.43%)、Akt活性水平下降、GSK-3β活性水平上调、Caspase-3mRNA及蛋白活性水平上调,与正常对照组相比,差异有统计学意义( PARP phosphorylation P0.05)。与I/R组相比,LY294002干预使细胞凋亡率进一步上调(18.2±2.06%)、Akt活性水平下调、GSK-3β活性上调,Caspase-3mRNA及蛋白活性上调,Licl干预使细胞凋亡率下调(12.3±0.85%)、Akt活性水平上调、GSK-3β活性下调,Caspase-3mRNA及蛋白活性下调,差异均有统计学意义(P
急性心肌梗死(Acute

Myocardial Infarction, AMI)是一种急性心肌缺血性心脏病,过去主要在欧美国家常见,近年来由于我国人民生活水平的提高,心肌梗死发病率也日益增多。尽管心肌梗死引起的缺血/再灌注损伤在临床上受到了广泛的关注,但目前还没有减轻缺血/再灌注损伤的有效疗法。实验表明,阿片受体参与心脏预处理和后处理引起的心脏保护作用,但其具体机制尚不完全清楚。 目的: 本研究的目的是探讨吗啡作为公认的心肌保护物质是否通过合成一氧化氮(NO)来诱发细胞内锌离子(Zn~(2+))释放以抑制糖原合成激酶-3β(Glycogen synthase kinase 3β,GSK-3β)的活性,从而阻止线粒体膜通透性转移孔(Mitochondrial Permeability Transition Pore,mPTP)开放,最终产生心肌保护作用。 对象与方法: 1以大鼠分离心肌细胞为研究对象。 1.1用标记Zn~(2+)的特异性荧光染料Newport Green DCF来测定细胞内Zn~(2+)的释放; 1.2用标记NO的特异性染料DAF-FM来检测细胞内NO的生成; 1.3用标记线粒体膜电位的特异性染料Tetramethylrhodamine ethyl ester(TMRE)来测定细胞线粒体膜电位(△Ψm)的变化,以判断mPTP的开放程度; 1.4用标记线粒体Ca2+的荧光染料Rhod-2来测定细胞线粒体内Ca2+的变化。上述荧光图像均通过共聚焦显微镜获得。 1.5用Western blot法测定细胞内GSK-3β(Ser9)的磷酸化程度。

2以大鼠心脏组织来源的H9c2心肌细胞株为研究对象,采用转染持续激活型GSK-3β突变基因的方法,探讨GSK-3β在Zn~(2+)引起心肌保护中的作用。 结果: 1 Zn~(2+)测定实验中,与空白对照组(109.8±9.4%)相比,吗啡使Zn~(2+)特异性荧光标记染料Newport Green DCF的荧光强度明显增强(155.9±26.1%),有明显统计学差异(p < 0.001),说明吗啡诱发细胞内Zn~(2+)的释放。这一作用被一氧化氮合酶(NOS)的抑制剂L-NAME所阻止(100.6±6.6%),与空白对照组相比无统计学差异,说明NO参与吗啡引起Zn~(2+)的释放过程。 2吗啡使NO特异性荧光标记染料DAF-FM的荧光强度值明显增加(154.9±62.2%),与空白对照(102.2±5.3%)相比有统计学差异(p< 0.05),说明吗啡刺激NO生成。 3鸟苷酸环化酶的抑制剂ODQ和NS2028明显减弱吗啡引起Zn~(2+)释放的作用,Newport Green DCF的荧光强度值分别为119.3±6.3%和108.0±5.9%,与吗啡处理组的荧光强度(156.9±10.6%)相比,均有统计学差异(p= 因为 0.002、p < 0.001),说明环磷酸鸟苷(cGMP)参与吗啡诱导Zn~(2+)释放的作用。蛋白激酶G(PKG)的特异性抑制剂KT5823也同样抑制吗啡的作用,Newport Green DCF荧光强度为106.5±3.2 %,与吗啡处理组相比有统计学差异(p < 0.001),表明PKG也在吗啡诱导Zn~(2+)释放的过程中起重要作用。 4吗啡和Zn~(2+)都能够明显增加GSK-3β(Ser9)的磷酸化,提示吗啡可能通过Zn~(2+)而抑制GSK-3β的活性。 5线粒体膜电位(?Ψm)测定实验中,100μM H2O2使TMRE的荧光强度明显减弱(45.1±8.2%),提示氧化应激使mPTP开放,而吗啡可防止这种作用(90.0±2.0%),与H2O2对照相比有明显统计学差异(p < 0.001),说明吗啡抑制了mPTP的开放;PKG的抑制剂KT5823或Zn~(2+)的螯合剂TPEN阻断吗啡的作用,TMRE的荧光强度分别为51.1±4.8%、57.5±2.0%,明显低于吗啡组的TMRE荧光值,说明吗啡可能是通过PKG/Zn~(2+)通路阻止mPTP开放而产生心肌保护作用。 6线粒体Ca2+测定实验中,与H2O2对照相比(218.4±21.9%),吗啡使线粒体Ca2+特异性荧光标记染料Rhod-2荧光值减弱(128.0±10.6%),有统计学差异(p= 0.

Chemotherapy is one of the major treatments for gastric cancer,but drug resistance limits the effectiveness of chemotherapy,which results in treatment failure.Resistance to chemotherapy can be present intrinsically

before the administration of chemotherapy or it can develop during chemotherapy.The mechanisms of chemotherapy resistance in gastric cancer are complex and multifactorial.A variety of factors have been demonstrated to be involved in chemoresistance,including the reduced intracellular concentrations of drugs,alterations in drug targets,the dysregulation of cell survival and death signaling pathways,and interactions between cancer cells and the tumor microenvironment.This RGFP966供应商 review focuses on the molecular mechanisms of chemoresistance in gastric cancer and on recent studies that have sought to overcome the underlying mechanisms of chemoresistance.
磷酸肌醇3激酶(PI3K)通路是一个关键的信号转导系统,它可将癌基因和多种受体与许多细胞功能联系在一起,还是肿瘤中最常被激活的通路。靶向PI3K同工酶和通路中包括AKT和mTOR在内的其他主要节点的抑制剂已进入临床试验阶段,但存在一定问题。本文重点阐述人们在理解PI3K通路方面取得的进展,并讨论研发靶向这条通路的抗肿瘤药物的机遇与面临的挑战。
曲妥珠单抗(trastuzumab)在治疗ErbB2高表达的乳腺癌病人中存在耐药现象,对其机制进行研究发现,主要有曲妥珠单抗同ErbB2受体的有效结合受阻、EGFR家族受体和IGF-IR等共表达以及PI3K-AKT信号通路的异常活化等方面。针对这些机制研制了一些可能提高曲妥珠单抗疗效的新型药物。
在美国,SCLC(small

www.selleckchem.cn/products/bmn-673.html RO4929097体外 cell lung cancer,SCLC)占所有确诊肺癌病例的13%。尽管其对放、化疗均较敏感,但SCLC复发迅速,患者的五年生存率仅为5%。这种极差的预后可能要归咎于治疗方式的进展缓慢,因为在过去三十年中,针对SCLC的医疗及护理方案
肿瘤是影响人类健康的重大疾病之一,近年来随着多种因素的影响,肿瘤的发病率呈不断上升趋势。经过60多年的发展,抗肿瘤药物在提高患者生存时间和改善生活质量方面取得了明显进展,近10年FDA先后批准40个抗肿瘤新分子实体药物上市。分子靶向药物的临床使用经验表明开发不易耐药的多靶点激酶抑制剂和高效低毒的细胞毒类药物仍是抗肿瘤创新药物研发的主体。
观察吡格列酮对缺血再灌注后原代心肌细胞凋亡的影响,探讨其与Akt/GSK3β信号通路的关系。本实验采用1~3 d龄Wistar大鼠乳鼠心室肌细胞体外培养,通过缺氧4 h复氧2 h,模拟心肌缺血再灌注损伤。随机将细胞分为空白组(C)、缺血再灌注组(IR)、缺血再灌注+吡格列酮预处理组(IR+P)、缺血再灌注+吡格列酮预处理+MK2206(MK2206为Akt特异性抑制剂)组(IR+P+MK)。应用流式细胞仪、膜联蛋白-V与碘化
Trastuzumab(曲妥珠单抗,商品名赫赛汀)是一个人源化的重组单克隆抗体(mAb),于1998年获美国FDA批准上市,被批准作为HER2阳性复发转移性乳腺癌(MBC)一线治疗。然而,随着trastuzumab的广泛应用,trastuzumab的耐药(refractory)逐渐成为临床一大挑战,甚至临床上还有一些患者初始治疗就对trastuzumab无反应或抗拒,或者在辅助trastuzumab治疗一年之内进展,而表现为原发性耐药。
The RUNX3 gene has been shown to function as a tumor suppressor gene implicated in various cancers,but its association with tumor chemoresistance has not been fully understood.Here,we investigated the effect of epigenetic downregulation of RUNX3 in docetaxel resistance of human lung adenocarcinom…

7拟南芥35S::GmZnFl生理实验指标测定 在2.0μM ABA,200mM NaCl,250mM甘露醇以及4.0℃冷胁迫条件下,转基因株系的SOD, POD, CAT,丙二醛和脯氨酸,与对照组相比均有不同程度的升高,揭示转基因系对这些逆境有一定的抗性,细胞结构更加稳定,膜系统不易降解。 1.8大豆转化与检测 使用含有目的基因的表达载体的农杆菌,使用组培方法转化大豆,然后对T1代植株进行检测：其中的35S::GmZnF1阳性植株,利用CTAB法提取DNA,进行Southern Blot检测。结果表明,在收获的T1代植株300棵植株中,共有阳性植株6棵,阳性比例2.0%,检测为阳性植株中的该目的基因都是单拷贝插入基因组。 很少 2GmPK6的获得与初步功能分析 2.1GmPK6基因的芯片结果验证 RT-PCR分析表明,GmPK6基因在盐胁迫下,表达量随着胁迫时间的延长而逐渐增加。 2.2GmPK6蛋白结构、性质及系统进化分析

GmPK6基因编码的蛋白蛋白激酶,属于LAMMER类型的亚家族。结果显不：GmPK6与Glycine max PKC-like, Arabidopsis thaliana AFC2, Arabidopsis thaliana FUS3和烟草PK12的同源性较高(～100.0%),其次是与蓖麻AFC有同源性(43.0%)。 2.3GmPK6蛋白表达 克隆含有酶切位点的基因GmPK6,使用pGEX GST4T-1载体构建重组载体,并且转化Rosseta菌株。PCR检测阳性菌株,二次活化后,取出适量菌液作为0hr对照组,其余菌液中加入IPTG(终浓度1.0mM),28.0℃摇菌诱导目的蛋白表达,并且在3hr,6hr和8hr时间点分别取样。SDS-PAGE电泳表明,目的蛋白在3h开始表达,表达量随时间逐渐增多。 Seliciclib研究购买 2.4GmPK6表达模式分析 qPCR结果表明,GmPK6在大豆的根、茎和叶片中表达量最高,在花和种子中表达量很低；而且GmPK6明显受ABA、盐、干旱和冷胁迫的诱导。 2.5GmPK6的克隆及拟南芥过表达株系的获得 从“圣豆9号”中首次分离了1个蛋白激酶基因CDS序列,命名为GmPK6,序列长度分别为1419bp,分别编码473个氨基酸。 克隆了GmPK6基因CDS全长,构建了植物表达载体,并转化拟南芥野生型植株,得到此基因的过表达纯系。 2.6拟南芥GmPK6过表达系的抗逆性分析 比较不同盐浓度梯度下种子萌发率,发现随着盐浓度的升高,过表达系的萌发率高于野生型的趋势越来越明显,并且差异显著。比较在不同盐浓度下的主根平均长度发现,在含有150mM以及200mM氯化钠的1/2MS培养基上,过表达系植株的主根长度比野生型植株的有显著增长。 叶片失水率结果显示,35S::GmPK6过表达系植株叶片的失水率低于野生型,揭示转基因株系的植株有较强的保水能力。 拟南芥35S::GmPK6系耐冷性分析结果显示,植株在10h冷胁迫处理(4.0℃)后表现出明显的耐冷性,存活率与对照组相比有显著提高。 2.7拟南芥35S::GmPK6生理实验指标测定 在2.0μM ABA,200mM NaCl,250mM甘露醇以及4.0℃冷胁迫条件下,35S::GmPK6转基因株系的SOD,POD,CAT,丙二醛和脯氨酸,与对照组相比均有不同程度的升高,揭示转基因株系对这些逆境有一定的抗性,细胞结构更加稳定,膜系统抗氧化能力增强。

2.8大豆转化与检测 使用含有目的基因的表达载体的农杆菌,使用组培方法转化大豆,然后对T1代植株进行检测：其中的35S::GmPK6阳性植株,利用CTAB法提取DNA,进行Southem

Blot检测。结果表明,在收获的T1代植株800棵植株中,共有阳性植株20棵,阳性比例2.5%,检测为阳性植株中的该目的基因都是单拷贝插入基因组。
背景与目的： 肺癌是全球范围内发病率及死亡率最高的恶性肿瘤之一。美国数据统计,在2009年美国大概有219440人患有肺癌,而将近159390人死于该疾病,而全球每年约有130万人死于肺部肿瘤。因肺癌大多发病隐匿,大部分患者确诊时已属晚期,失去手术机会。当前,恶性肿瘤的治疗主要采用手术治疗、放化疗等方法。随着分子生物学及药理学的发展,生物治疗、靶向治疗及多学科的综合治疗已成为抗肿瘤研究的热点。而且大量数据证实,抗肿瘤化疗药物毒副作用大,且长期用易产生耐药性等劣势。近年来中医中药抗肿瘤越来越受到国内外医药界的关注。诱导肿瘤细胞的凋亡视为治疗肿瘤疾病的主要目标和手段。扶正消癌合剂是导师多年经验用方,临床研究表明它能改善晚期肺癌患者的临床症状,增强机体免疫功能,提高生存质量等。但是具体作用机制还不明确。本实验采用血清药理学方法,研究扶正消癌合剂对人肺腺癌A549细胞凋亡的影响并探讨可能存在的发生机制,为其临床应用提供可能的理论和实验依据。 方法： 雄性SD大鼠60只随机分为6组(每组10只,组间体重无差别),分别是扶正消癌合剂低剂量、中剂量和高剂量组,DDP组,中药联合DDP组,生理盐水组,中药组按照人与鼠体表面积换算法及血清药理学实验方法,分别给予扶正消癌合剂低、中、高剂量灌胃药液灌胃,DDP组给予腹腔注射0.5mg/ml的DDP,中药联合DDP组予扶正消癌合剂中剂量灌胃药液灌胃及腹腔注射0.5mg/ml的DDP,生理盐水组予0.9%氯化钠溶液灌胃。均连续给药7天,每天2次,每次2m1。末次灌胃后2h后水合氯醛腹腔注射麻醉,无菌条件下腹主动脉采血,分离血清,56℃灭活30min,经0.22μm过滤除菌,-20℃保存备用。制备大鼠含药血清,MTT法检测扶正消癌合剂含药血清对人肺腺癌A549细胞增值的影响。Annexin MLN9708核磁共振 V-FITC/PI双染法流式细胞术观察含药血清对A549细胞凋亡的影响。Western-Blot检测含药血清对P53, Bcl-2及Survivin蛋白表达的影响。 结果： 1.倒置显微镜下观察,正常A549细胞呈贴壁生长,多为梭形或椭圆形,胞浆透亮饱满,细胞增殖速度快。扶正消癌合剂含药血清作用48h后,可见空白对照组细胞状态生长良好。而中剂量组部分细胞的形态变为圆形,细胞间隙些许增大,高剂量组和DDP组,细胞体积变小,细胞间隙较宽,少部分细胞出现脱落。观察到联合组的细胞出现脱落,部分细胞肿胀、破碎,呈坏死状态。并且药物作用72h后细胞数量明显减少,细胞凋亡更加显著。 2.不同浓度的中药含药血清作用于人肺腺癌A549细胞24h、48h、72h,对细胞有明显的抑制功能。随着含药血清药物浓度的增加、时间的延长,抑制作用则增强,呈现时间及剂量相关性,并且高浓度组抑制率仅次于DDP组,联合组抑制率最高,高达38.68%,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05)。作用96h后,抑制率反而下降。可见药物作用最佳时间和药物浓度。 3. Western blot检测结果,与空白对照组比较,随着药物浓度增加,bcl-2蛋白及Survivin蛋白水平逐渐降低(P＜0.05),而P53蛋白的表达水平则呈增加趋势(P＜0.