我们推断分子间的疏水作用最有可能是BIRB796与ABCB1药物结合位点1的原因。结论：1、BIRB796能够特异性的逆转ABCB1所介导MDR,方式是通过增加ABCB1的底物(罗丹明123和阿霉素)在细胞中的浓度。2、BIRB796对ABCG2和ABCC1无逆转作用.3.BIRB796′恢复KBV200裸鼠移植瘤模型对紫杉醇的敏感性,但并不增加紫杉醇临床试验在裸鼠体内的毒性。4、BIRB796不影响ABCB1的蛋白和mRNA水平的影响。5.BIRB796双向调节ABCB1ATPase活性,来实现抑制ABCB1外排功能。6、p38信号通路对BIRB796逆转ABCB1介导的MDR无协同作用。7、Docking分析模拟出BIRB796与ABCB1位点1之间可能存在的分子间相互作用,疏ABT-263研究购买水作用最有可能是二者之间结合的主要原因。
第一部分miR-29b在前列腺癌组织中的表达及临床意义 目的：探讨miR-29b在前列腺癌组织中的表达及其临床意义。 方法：用实时定量PCR技术检测10例前列腺癌(PCa)及癌旁非肿瘤组织中miR-29b的表达情况,研究其与PCa病理分期、分级之间的关系。 结果：10例前列腺癌组织(和prostate cancer, PCa)与配对的癌旁非肿瘤组织相比,miR-29b在PCa中的表达明显下调,有统计学差异(p0.05)；根据Gleason评分进行病理分级,其中G1-G2患者4例,G3-G4患者6例,两组miR-29b表达相比无统计学差异(p>0.05)。 结论：(1)miR-29b在前列腺癌组织中的表达明显低于癌旁组织。(2) miR-29b的表达与PCa病理分期及病理分级没有明显相关性。

我们观察临床上和已经上市的含有肉桂酰胺基团的HDACIs,发现肉桂酰胺苯环上的取代基团处于不同的位置,比如LBH589是对位取代,而PXD1o1则是间位取代。因此我们设计了一系列间位取代肉桂酰胺类HDACIs,共计18个化合物,化学结构经过1HNMR、13CNMR和HRMS确证,均未见其他文献或专利报道。我Bioactive Compound Library价格们也以Hela细胞核提取物为酶源测定化合物的体外抑酶活性,结果显示化合物都具一定的HDACs抑制活性,其中化合物29m、29q和29r活性明显高于阳性对照药SAHA。HDACs亚型选择性测定实验结果表明代表性化合物29k为广谱的HDACIs。另外,化合物29k表现出良好的体外抗肿瘤AZD6738细胞增殖活性和促凋亡活性。裸鼠体内抗肿瘤细胞增殖活性结果表明,化合物29k是一个口服有效的HDACI。值得一提的是,间位取代肉桂酰胺类异羟肟酸HDACIs的抑酶活性和选择性均弱于对位取代的抑制剂。四、N-羟基苯甲酰胺类HDACIs的设计、合成及初步活性研究在我们之前的研究中,以N-寻找更多羟基苯甲酰胺为linker和ZBG结构的HDACIs表现出良好的HDACs抑制活性,这说明N-羟基苯甲酰胺基团可以作为活性片段应用在HDACIs设计中。因此在本系列化合物中,我们引入了N-羟基苯甲酰胺基团,并且沿用了第二章和第三章化合物cap中的吲哚结构,共设计合成了27个HDACIs,化学结构经过1HNMR、13CNMR和HRMS确证,均未见其他文献或专利报道。

进一步免疫共沉淀实验以及间接免疫荧光实验证实JNK与ATF2的确存在相互作用。且特异性抑制剂、siRNA干扰以及组成性活化JNK的实验均发现ATF2的抑制是JNK的失活所致,且活性氧作用下JNK的失活是CDK4、cyclinD3、cyclinA等细胞周期蛋白下调以及细胞凋亡发生的重要原因。在此基础上,染色质免疫共沉淀实验证明了ATF2可以结合在CDK4、cyclinD3和确认细节cyclinA的启动子区,且硒作用下ATF2与靶序列的结合明显减弱。siRNA干扰以及ATF2的过表达实验同样发现周期蛋白CDK4、cyclinD3、cyclinA的表达以及凋亡标志性蛋白caspase3和PARP的切割受到ATF2的调控,并最终确定ATF2具有促进NB4细胞周期进程以及抑制细胞凋亡的功能。最后,我们采用CDK4特异性抑制剂与亚硒或者酸钠联用,通过流式细胞术及western blots实验证明CDK4的失活可加剧亚硒酸钠诱导的NB4细胞凋亡。至此,我们的实验结果发现硒作用NB4细胞后产生活性氧通过抑制JNK/ATF2通路阻断NB4细胞周期进程并借此引发凋亡。 最后,我们建立了白血病NB4细胞体外裸鼠异体移植瘤模型。TUNEL实验、HE染色结果显示亚硒酸钠在体内有促进肿瘤细胞死什么亡的作用。采用免疫组化的方法间接标记人白血病细胞表面抗原—CD33,并在裸鼠的肝和脾中检测CD33阳性细胞的变化情况,结果显示亚硒酸钠在体内具有抑制肿瘤细胞浸润和转移的功能。之后,我们提取了肿瘤组织的全蛋白样品,Western blot实验结果证实JNK/ATF2通路、CDK4、cyclinD3、cyclinA、phosphoRb、PARP和caspase3在体内变化与细胞水平实验结果一致,免疫组化实验同样证实了上述结论。

2、100、200、300nM克唑替尼处理H2228细胞48h，通过Annexin V流式细胞仪检测凋亡细胞，了解克唑替尼诱导细胞凋亡的作用。 3、采用50、100、200、400、800μm/L浓度的低氧模拟剂氯化钴（CoCl2）作用H2228细胞24h，观察HIF-1α的mRNA表达水平变化。采用200μm/L浓度的氯化钴作用H2I-BET-762半抑制浓度228细胞0、3、6、12、24、48h，通过逆转录PCR(reversetranscription-PCR, RT-PCR)方法观察HIF-1α的mRNA表达水平变化。 4、采用0、60、125、250、500、1000nM的克唑替尼处理H2228细胞24h，采用RT-PCR方法观察HIF-1α的mRNA表A-1210477体内达水平变化。 5、采用500nM克唑替尼分别处理常氧组（未经氯化钴处理）、低氧组（经氯化钴处理）细胞24h，通过RT-PCR方法检测HIF-1α以及其上游调控因子丝氨酸苏氨酸蛋白激酶Akt、下游靶基因血管内皮生长因子（vascularendothelial growth factor，VEGF）的mRNA表达AZD6244体外水平变化。 结果： 1、随着克唑替尼药物浓度升高，细胞增殖抑制率逐渐升高，呈剂量依赖性，半增殖抑制浓度（IC50）为335nM。 2、H2228细胞凋亡率随着克唑替尼浓度增加而升高，呈剂量依赖性。 3、当氯化钴作用时间为6-48h或氯化钴浓度大于100μm/L，随着氯化钴浓度及作用时间的增加，HIF-1α的mRNA表达水平逐渐下降，呈剂量及时间依赖性，于200μm/L浓度时下降最明显。

此外,我们还通过加强采样的自由能计算(ABF)表征了crizotinib从野生型及突变型ALK中的解离路径。研究表明,G1202R和S1206Y会阻碍crizotinib与ALK中结合通道的结合,因而导致crizotinib的结合通路耐药性。对于ROS1体系,我们使用了更为先进的加强采样自由能算法(funnel-based metselleck化学药品adynamics和absolute binding free energy calculation based on umbrella sampling)表征了crizotinib对ROS1激酶结合/解离过程的二维势能面。发现与野生型ROS1激酶相比,G2032R突变体中P-loop区域的开口幅度更大,或其直接导致crizotinib在突变型ROS1结合口袋中的保留时间(residence time)显著下降,因而导致强烈的耐药性。最后,我们分析了遗传病相关的靶标突变对小分子结合的影响,并提出了化学药物治疗遗传病的治疗策略。其原理在于“获得功能性”或“丧失功能性”遗传病的治疗可以通过使用其对应靶点的拮抗剂点击此处(antagonist)或激动剂(agonist)来抑制或激活其功能。然而,这种化学疗法必须满足一个前提,即这些“获得功能性”或“丧失功能性”的靶标突变并不会对化学药物的结合产生不良影响。因此我们利用分子对接和MM/GBSA自由能重打分的方法评测了已知成功药物靶标的遗传病相关突变位点对上市药物结合能力的影响。研究发现,在多数情况下这些疾病相关突变位点并不会对药物的结合产生不良影响。

腺癌61例，鳞癌14例，大细胞癌1例，其他类型6例。检测出EML4-ALK基因突变9例。 2、男性患者突变率(6.8%)与女性患者突变率(15.8%)无统计学差异(P=0.291)。年龄≥60岁患者突变率(11.9%)与年龄＜60岁突变率(10.0%)无统计学差异(P=0.782）。在吸烟突变率(0%)与不吸烟突变率(17.0%)存在统计学差异（P=0.023）。其中腺癌突变率(13.1很少%)、鳞癌基因突变率(0%)、大细胞癌基因突变率（0%）、其它类型基因突变率（16.67%），四者比较无统计学差异（P=0.782）。在出现肿瘤转移基因突变率（11.67%）与无肿瘤转移基因突变率（9.1%）无统计学差异（P=0.737）。I期基因突变率（10.0%）、II期基因突变率（0%）、III期基因突变率（13.0%）、IV期基因突变率（11.1%），四selleck chemicals者比较无统计学差异（P=0.846）。EGFR基因突变率（2.6%）与EGFR突变率（18.2%）有统计学差异（P=0.033）。 3、本研究至2014年4月30日截止，共有9例失访，全为EML4-ALK基因突变阴性，其余病例都有完整随访资料，随访时间为6-37个月，其中共有29例死亡，其中EML4-ALK基因突变4例，无基因突变25例。无突变组与突变组的生存中GSK1120212半抑制浓度位时间分别为23个月（95%CI，22个月-24个月）和21个月（95%CI，18个月-24个月），P=0.769，两者无统计学差异。 结论：1、本实验共完成了82例NSCLC患者的EML4-ALK融合基因检测，其中突变数为9例，突变率为10.97%，其中双位点突变3例，具体为E13;A20突变为9例，E6; A20突变1例，E20; A20突变2例。 2、EML4-ALK融合基因突变多倾向于女性、不吸烟、腺癌与EGFR基因无突变的患者。

表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor, EGFR）对于多种细胞具有促进增殖和营养作用。EGFR在多种肿瘤细胞内高表达，说明其与这些肿瘤的发生、发展等变化有关。另外，大量研究表明EGFR信号系统与肿瘤的发生和肿瘤耐药性关系密切，并且EGFR的异常变化也是骨肉瘤的显著特点。蜂毒（Beevenom,和 BV）做为免疫相关疾病治疗制剂已广泛应用，特别是在肿瘤治疗领域其作用十分显著。研究发现，肾癌、肺癌、肝癌、前列腺癌、膀胱癌、乳腺癌以及白血病细胞均可成为BV主要成分蜂毒肽（Melittin）的靶标。Melittin激活PLA2从而发挥细胞毒作用已被公认为BV抗肿瘤的主要作用机制。Melittin通过激活Caspaswww.selleckchem.cn/products/Trichostatin-A.htmle酶和基质金属蛋白酶，诱导多种肿瘤细胞发生凋亡，从而实现其抗肿瘤作用。现已证明，将Melittin与激素受体、特异性抗体等多种具有导向作用的物质融合表达，可以有效治疗多种肿瘤。本研究将Melittin通过柔性肽与抗EGFRscFv连接，并由大肠杆菌进行表达，制备了融合蛋白antiEGFR/MEL。对表达条件进行了优化更多，并进行了复性和初步纯化。利用表达的融合蛋白，针对人骨肉瘤细胞进行了体内、外抑瘤实验研究。研究结果表明，含有EGFR单链抗体的重组蛋白antiEGFR/MEL可与OS732细胞有效结合，并定位于OS732细胞膜表面。antiEGFR/MEL能够有效抑制OS732细胞的生长，但对正常细胞L02无明显作用。另外，antiEGFR/MEL抑制OS732细胞生长的现象，呈现明显的时间效应和剂量效应趋势。

而后通过点突变的方法使STAT3的3′UTR区包含可能与miR-125b结合的一段碱基序列发生突变,构建STAT3突变型(STAT3MUT-luc)荧光素酶报告基因质粒。采取脂质体转染的方法将STAT3WT-luc和STAT3MUT-luc与miR-125b模拟物(miR-125b mimics)和阴性对照(Negative control)ABT-737小白鼠同时转染到MG-63细胞内。转染48小时后收取细胞,本实验采取双荧光素酶报告基因系统,以海肾荧光素酶(Renilla)作为内参,检测萤火虫荧光素酶(Firefly)的活性。最终以二者的比值作为相对表达量数值(Firefly/Renilla)。 3.采用脂质体转染的方法将不同浓度miR-125b模拟物(miR-125b购买SCH772984 mimics)转染到Saos-2细胞内,采用蛋白质印迹(Western blot)检测STAT3蛋白表达水平；CKK8法检测细胞增殖活性。 4.采用脂质体转染的方法将miR-125b模拟物(miR-125b mimics)、化学合成并化学修饰的miR-125b反义核酸(anti—miR-125b)或者阴性对照(NeEPZ6438gative control)转染至MG-63和Saos-2细胞内。收集细胞后提取总蛋白,采用蛋白质印迹法(Western blot)检测STAT3蛋白表达水平。 结果： 1.STAT3为miR-125b的靶基因,miR-125b通过结合3’UTR区抑制靶基因STAT3的表达。 2.miR-125b浓度依赖性的调节细胞增殖,过表达miR-125b能抑制Saos-2细胞增殖,抑制STAT3蛋白表达量。

回顾性分析2000年1月至2010年1月收治的76例年龄≥60岁AML(非APL)患者的临床资料。按治疗方法分为诱导化疗组和最佳支持治疗组。诱导化疗组51例,接受以阿糖胞苷为基础的诱导化疗方案,包括DA、MA、HA、IA及CAG方案;最佳支持治疗组25例,接受羟基脲及输血等最佳支持治疗。对诱导化疗组与最佳支持治疗组患者的临床特点、诊断、治疗方法及预后进行了比这个较分析。结果表明,诱导化疗组和最佳支持治疗组的中位生存时间分别为5(0.2-89)个月和3(0.1-17)个月。两组的中位生存时间比较差异具有统计学意义(P
目的将Shh基因用慢病毒载体转染甲状腺乳头状癌(PTC)原代细胞中,观察Shh对PTC细胞体外生物学性状的影响。方法在建立慢病毒载体pGC-FU-Shh-GFP转染PTC细胞或者,稳定过表达Shh蛋白模型基础上,设立转染实验组和阴性对照组。MTT法检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞周期,Transwell实验检测细胞迁移能力,检测Sonic hedgehog通路相关基因mRNA与蛋白表达变化,与阴性对照组检测结果进行比较。结果高表达Shh细胞生长曲线较陡直,生长速度较阴性对照组显著提高(P<0.05);S时间hh-PTC细胞24h后S期上升至20.88%,Shh-PTC细胞48h后G1期上升至83.78%;实验组穿透滤过膜细胞数量明显增加(P
目的从结构出发介绍Aurora激酶及其抑制剂的研究进展。方法总结Aurora激酶抑制剂骨架特征和结合模式,以及进入临床的Aurora激酶抑制剂的研究进展。结果和结论 Aurora激酶家族是肿瘤治疗的一个新兴靶标。腺嘌呤骨架可能是设计高活性Aurora激酶抑制剂的重要母核。

对所合成的CA-4类似物选用胰腺癌细胞株(BxPC3)、乳腺癌细胞株(MCF-7)、肺癌细胞株(A549)和结肠癌细胞株(HCT116)进行了细胞毒活性评价，发现活性较CA-4的活性下降明显，只有化合物226的细胞毒性保持在纳摩尔级别，但是相比CA-4活性降低了50倍以上。
研究背景和目标 肝癌是世界范围内常见的恶性肿瘤之一,其发selleckchem病率和死亡率呈逐年上升趋势,严重威胁着人类的健康。在中国,由于存在较为严重的乙型肝炎病毒(HBV)感染等致癌风险因素,肝癌的发病率和死亡率态势尤为严峻。肝癌的治疗手段主要包括肝移植、肿瘤切除及非切除性局部疗法如肝动脉化疗栓塞等。由于肝癌特别是肝细胞肝癌(HCC)早期易发生转移以及治疗后易复发,系统化疗是临床HSP抑制剂上亟需的HCC治疗手段。靶向于酪氨酸激酶受体(receptor tyrosine kinase, RTK)的索拉菲尼(Sorafinib)是近年来在美国等多个国家批准应用于临床的第一个对HCC有效的系统化疗药物,是HCC分子靶向治疗研究进程中的一座里程碑。c-Met是RTK家族的典型成员之一,是当前抗肿瘤分EPZ 6438子靶向药物研制的一个重要的靶点。然而,由于c-Met信号通路在HCC病理学状态下有诸多不明之处,以c-Met为靶点的抗HCC药物的研究与开发较为迟缓。我们课题组前期有关脱-Y-羧基凝血酶原(des-y-carboxy prothrombin, DCP)的基础研究发现DCP能够激活c-Met信号传导通路,对HCC细胞增殖和侵袭具有促进作用,可能在人HCC的发病和进展中发挥了重要的作用。