4、5、6mg/L) Hoechst33342孵育1×106个/mlSKOV3细胞90min,流式细胞仪检测SP细胞比例及活细胞比例；选取不同细胞密度的(6×105,7×105,8×105,9×105,1×106个/ml) SKOV3细胞悬液,3mg/L的Hoechst33342孵育90min,流式细胞仪检测SP细胞比例及活细胞比例。 结果：通过Hoechst33342蓝光和红光双参数图,SP细胞位于左下角两种荧光均很弱的区域。Hoechst33342浓度不变时,SP细胞比例随细胞密度的增加而升高；SKOV3细胞密度不变时,SP细胞比例及细胞活性随hoechst33342浓度升高而降低。卵巢癌SKOV3细胞株在细胞密度为8×105个/m1,加入终浓度为3mg/L的Hoechst33342,37℃水浴90min,为最佳染色条件,此时SP细胞比例为(1.12±0.104)%,且细胞保持良好的活性。 结论：建立了分选人卵巢癌细胞株SKOV3中存在SP细胞的最佳实验条件,为分选其他肿瘤组织或细胞株中的SP细胞建立了参照标准。

第三章卵巢癌SKOV3细胞中SP细胞中卵巢癌干细胞相关表面标志物表达 目的：检测卵巢癌SKOV3细胞系中SP和NSP细胞中卵巢癌干细胞相关标志物和基因表达差异。 方法：荧光染料Hoechst33342和荧光标记抗体共染染SKOV3细胞,流式细胞仪检测SP和NSP细胞中ALDH2, Idelalisib CD90, CD133, CD117, ABCG2, CD44表达；荧光定量PCR检测SP和NSP细胞中NANOG, ALDH2,, CD133, ABCG2, SOX2, CD117基因在表达差异。 结果：流式细胞仪检测SP和NSP细胞中CD90、CD133、CD117、CD44阳性表达差异无统计学意义。SP和NSP细胞中ALDH2和ABCG2的阳性表达分别为87.3±5.76%、29.48±4.43%、5.32±0.47%、3.01±1.69%,差异有统计学意义P<0.05)。接种SP和NSP细胞数目为800,400,200个时,集落形成率分别为8.9±1.1%、10±2.3%、12±1.5%和1.7±0.2%、1.75±0.5%、3.0±0.8%,相同接种细胞密度下SP细胞的集落形成能力大于NSP细胞(P<0.05)。SP细胞较NSP细胞有更强的侵袭和迁移能力,其中侵袭细胞数目分别为60±5和34±4,迁移细胞数目分别为91±6和74±4,差异有统计学意义(P<0.05。荧光定量PCR结果显示,BCL-2基因在SP细胞中表达较NSP和SKOV3低,差异有统计学意义。ABCB1基因在SP细胞中相对表达量为2.340±0.306,高于NSP和SKOV3细胞,差异有统计学意义。ABCG2基因在SP中表达较NSP细胞高,但差异没有统计学意义。ABCG2基因在SKOV3细胞中相对低表达,较SP和NSP细胞中表达差异有统计学意义(P
研究背景与目的随着社会的进步和经济的快速发展，城市化进程的加速和化境的污染，人们生活方式及饮食结构的发生了明显改变，同时疾病谱也发生了变化。尽管医学的进步，恶性肿瘤的死亡率呈现逐年下降趋势,但各类恶性肿瘤的发病率不断上升，特别是消化系统恶性肿瘤，占有较大比例，如胃癌、肝癌、胰腺癌等。是威胁人类生命的重要因素之一。据统计,每四个死亡病例中就有一个是死于恶性肿瘤[1]。对于肿瘤的研究，发病机制是医学研究的一个热点。MNNG是由人工合成的亚硝基类化合物,替代自然界中的亚硝酰胺类化合物,用来研究在肿瘤形成中的作用。它与胃液中亚硝基物的诱变机制相似。GES-1细胞来源于人,虽然具有永生性,但仍保留了部分正常胃粘膜的特性,如正常的骨架系统、粘蛋白分泌功能、停泊依赖性和裸鼠中非致瘤性等。在MNNG作用下GES-1发生了一些表型改变,如染色体畸变增多、骨架微丝异常、克隆形成率增加,并获得软琼脂集落生成能力[2]。研究已经证实，经MNNG诱导后大部分细胞会逐渐死亡，一周左右时间,GES-1细胞将发生如染色体数目、结构异常,基因重排，幼鼠接种后可致瘤[3]。流行病学证据表明，经常暴露于亚硝胺类饮食的环境中的人们，与胃癌的发生发展密切相关。亚硝胺类物质对人体的致癌性已成为一个全球性健康问题[4、5]。1，25-二羟维生素D3是维生素(Vit)

BGB324 D3经肝、肾代谢后的主要活性形式,有着重要的生物活性,其生物效应是由VitD受体(VDR)介导的。近年来随着国内外学者对1，25-二羟维生素D3的研究不断深入,发现除了维持体内钙环境相对稳定外,还具有调节免疫、抑制肿瘤细胞增殖等十分广泛的作用，1，25-二羟维生素D3具有一定的防癌及抗癌活性,对乳腺癌、肺癌等具有较好的治疗作用[6-7]。 http://www.selleckchem.cn/products/dabrafenib-gsk2118436.html 本实验是通过将体外培养的人胃粘膜上皮细胞系（GES-1），经化学致癌剂N-甲基-N-硝基-N-亚硝基胍（MNNG)诱导使细胞恶性转化，研究1，25-二羟维生素D3(骨化三醇)在经MNNG恶性转化的过程中对细胞生长、凋亡及Shh、Gli1基因表达的产生的影响，以便为癌变的机制和预防提供理论依据。 方法 1.分为实验组、对照组和GES-1组。MNNG诱导的GES-1细胞（对照组），诱导后给予不同浓度（10-6、10-7、10-8、10-9mmol/L）1，25-二羟维生素D3进行干预（实验组）。 2.采取四甲基固氮唑盐（MTT）检测实验组和对照组细胞增殖并确定实验组最佳药物浓度。 3.流式细胞仪（flow cytometry）检测各组细胞的凋亡率。 4.RT-PCR检测各组细胞Shh、Gli1mRNA基因的表达。 结果 MTT法显示，对照组细胞出现大量死亡，实验组给予10-6、10-7、10-8、10-9mol/L的1，25-二羟维生素D3干预后存活细胞较对照组增多（P＜0.05）。取最佳药物作用浓度10-6mol/L为实验组、对照组及GES-1细胞组，FCM测各组细胞7d的凋亡率。分别为实验组(44.73±2.04)%、对照组(85.23±2.08)%、GES-1细胞组(4.9±0.91)%，与对照组相比实验组细胞凋亡明显减少（P＜0.05）。RT-PCR显示ShhmRNA实验组（0.6747±0.0116）、对照组(0.6616±0.0095)均表达（P>0.05），Gli1mRNA实验组（0.3382±0.0150）表达低于对照组（0.5328±0.

05);经H_2O_2或SPER/NO或HU处理后的SMMC-7721和HepG2细胞较未经处理的SMMC-7721和HepG2细胞增殖明显加快(p0.05)。

结论:1.在正常条件下,人正常肝细胞株中不表达miR-155,而人肝癌细胞株中有少量表达。2.在慢性炎症应激因素作用下人正常肝细胞株中miR-155有微量表达。3.在慢性炎症应激因素作用下肝癌细胞株中miR-155表达量升高、肝癌细胞增殖加快及细胞周期发生改变。4.三种慢性炎症应激因素作用下的两种肝癌细胞株,上述变化无明显区别。
目的研究p38MAPK抑制剂CBS3830在糖尿病大鼠自体移植静脉中抗内膜增生的作用,从而探讨p38MAPK信号通路在静脉桥狭窄中的作用,为糖尿病患者桥血管再狭窄的预防及治疗提供新的途径。 方法将30只SPF级SD雄性大鼠(6～8周龄,体重200～250g,),随机分为假手术组(sham 很少 group, S)、对照组(control group,C )、药物组(drug group,D),每组10只。假手术组仅模拟手术过程,不进行血管移植和药物干预;另外两组首先采用腹腔注射链脲佐菌素法建立糖尿病动物模型,然后再采用改良cuff法建立自体静脉移植模型,造模前1 h药物组经胃管灌入0.3 mg/ml的CBS3830 10ml/kg,对照组同法给予等体积的CBS3830溶媒1%甲基纤维素。分别于术前及术后1、3、7 d,采用ELSIA法检测大鼠血清中的TNF-α、IL-1β和AGEs;免疫组织化学染色检测各组大鼠血管标本中核转录因子kappa B(NF-κB)的表达;于第7天处死动物并获取移植静脉标本,HE染色法观察大鼠移植静脉内膜病理变化。蛋白印迹技术(western blotting)测定p38、P-p38、β-actin的表达。 结果药物组TNF-α在0-3d呈上升趋势,第3d时水平达到最高,与对照组相比无明显差别,此后表达水平逐渐下降,至第7d时降到最低,明显低于对照组,有显著性差异(p<0.05)。药物组IL-1β水平在1d时最高,此后表达水平逐渐下降,至第7d时明显低于对照组(p<0.01)。药物组、对照组的AGEs含量均较假手术组明显增加,两组间无明显差异。HE示药物组内膜增生明显低于对照组,差异具有统计学意义(p
目的:动脉粥样硬化(AS)是威胁人类健康的主要疾病之一,对于AS发病机制一直是心血管疾病研究的热点。其中血管平滑肌细胞(VSMC)由中膜层向内膜下间隙迁移并导致异常增生是动脉粥样硬化等心血管疾病发生发展的一个重要环节。PDGF作为一种强有力的体外趋化剂,可以诱导VSMC增殖和迁移。ROCK是Rho下游靶效应分子,分ROCKⅠ和ROCKⅡ两种亚型,参与细胞迁移、细胞增殖、细胞粘附、细胞骨架重组等多种细胞行为,而这些功能又参与许多心血管疾病的发生、发展,而ROCK参与细胞迁移的分子机制尚不十分清楚。有文献报道,MAPK家族成员参与细胞的增殖和迁移,如p38

很少 MAPK,ERK(胞外信号调节激酶)。此外在细胞迁移过程中,基质金属蛋白酶(MMPs)可以广泛降解ECM,为VSMC的迁移扫清道路,促进VSMC的迁移。本实验研究目的在于通过PDGF介导血管平滑肌细胞迁移的模型,阐述ROCKⅠ亚型调控血管平滑肌细胞研究的分子机制,为阐明动脉粥样硬化发生机理提供理论依据。 方法:(1)利用瞬时转染和稳定转染方法过表达ROCKⅠ,通过RNA和蛋白水平检测ROCKⅠ的表达情况;(2)利用Boyden chamber和划痕方法,检测ROCKⅠ过表达后,细胞的迁移情况;(3)利用Western blot方法,在10ng/ml PDGF刺激下,检测p-ERK和p-p38在不同时间的表达情况;(4)利用Western blot方法,在不同浓度U0126(ERK抑制剂)和SB203580(p38抑制剂)处理下,检测p-ERK和p-p38表达情况;(5)利用Boyden chamber法,在不同浓度U0126和SB203580处理下,检测对细胞迁移的影响;(6)利用Western blot和明胶酶谱法,检测U0126和SB203580对MMP2蛋白表达和活性的影响;(7)利用免疫荧光方法,在不同浓度U0126和SB203580处理下,检测抑制剂对细胞伪足形成的影响。 更多 结果:(1)瞬时转染ROCKⅠ过表达后,细胞迁移明显增加;(2) PDGF (10ng/ml)刺激下,p-ERK和p-p38表达水平分别出现峰值;(3)不同浓度U0126和SB203580处理下,p-ERK和p-p38表达随浓度依赖性下降;(4)在不同浓度U0126和SB203580处理下,细胞迁移能力随浓度依赖性下降;(5)U0126和SB203580均降低MMP2的蛋白表达和活性;

(6)U0126和SB203580减少细胞伪足的形成。 结论:(1)进一步证实ROCKⅠ与血管平滑机细胞的迁移密切相关; (2) PDGF介导的细胞迁移,可能是通过Rho/ROCK/MAPK通路实现的,并通过降解细胞外基质,为细胞迁移提供条件。
目的探讨胡黄连苷Ⅱ在大鼠脑缺血再灌注损伤中的抗氧化作用,为胡黄连苷Ⅱ在脑缺血损伤的临床应用提供理论依据。方法成年健康Wistar大鼠100只.应用线栓法建立MCAO/R模型,随机分为假手术组,阴性对照组,阳性对照组,药物治疗组。假手术组不做处理,阴性对照组经尾静脉注射生理盐水,阳性对照组注射丹参素钠10mg/kg,药物治疗组注射胡黄连苷Ⅱ10mg/kg。Bederson法进行神经功能评分,氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法测定脑梗塞体积,免疫组化检测神经细胞诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和超氧化物歧化酶(SOD)的表达变化,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测脑组织匀浆中iNOS和SOD的含量,TUNEL法检测细胞凋亡。结果假手术组神经行为功能正常,无脑梗死。假手术组免疫组化示大鼠脑组织iNOS和SOD弱表达,TUNEL阳性细胞数量较少,散在分布。阴性对照组神经行为功能评分、脑梗死体积较假手术组有明显差异(P<0.05),免疫组化示大鼠脑组织iNOS表达增强,SOD表达明显减弱,脑组织匀浆iNOS增高,SOD降低,TUNEL阳性细胞数量增多,较假手术组有明显差异(P<0.05)。阳性对照组和胡黄连苷Ⅱ组神经行为功能、脑梗死体积低于阴性对照组(P<0.05)。阳性对照组和胡黄连苷Ⅱ组免疫组化示大鼠脑组织iNOS表达及脑组织匀浆iNOS和TUNEL阳性细胞数量均低于阴性对照组(P<0.05),而大鼠脑组织SOD表达及脑组织匀浆SOD均高于阴性对照组(P0.

2 TGF-β1诱导VSMC分化标志基因SM22α和SMα-actin表达 SM22α和SMα-actin表达是VSMC处于分化状态的重要分子标志, PCNA表达是VSMC处于增殖状态的重要标志。采用Western blot方法,检查TGF-β1对各种标志基因表达的影响。结果显示,在TGF-β1处理的VSMC中,分化标志基因SM22α和SMα-actin表达明显升高,而增殖标志物PCNA表达显著降低,这些基因的表达变化依赖于TGF-β1作用的时间和浓度。其中,浓度为2 此网站 ng/ml和作用时间为48 h时变化最为显著。 1.3敲减TβRI表达对VSMC分化和去分化标志基因表达的影响 将靶向TβRI的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)导入VSMC,阻断内源性TβRI表达后,研究TβRI在TGF-β1诱导VSMC分化中的作用。Western blot结果显示,转染TβRI-siRNA可使TβRI mRNA和蛋白表达水平降低约75~80%,表明该基因的表达被有效敲低。在TGF-β1刺激下,转染TβRI-siRNA的VSMC中SM22α和SMα-actin的表达明显降低,相反,增殖标志物PCNA的表达显著增加。 1.4 KLF4在TGF-β1诱导TβRI表达及VSMC分化中的作用 虽然已经发现KLF4是参与细胞生长、分化和凋亡的调控,但KLF4是否通过TβRI介导TGF-β1的作用目前尚不清楚。 RT-PCR和Western

blot结果表明,TGF-β1显著诱导KLF4和TβRI基因的转录和蛋白表达,并具有明显的时-效(6、12、24、48 h)关系。2 ng/ml TGF-β1作用于VSMC 6 h后,KLF4和TβRI的mRNA和蛋白表达水平均显著升高,两者的表达变化呈正相关关系。 为了阐明KLF4与TβRI表达之间的关系,将KLF4-siRNA导入VSMC,阻断内源性KLF4表达后,明确KLF4在TGF-β1诱导TβRI及VSMC分化标志基因表达中的作用。RT-PCR和Western Fasudil临床试验 blot分析结果显示,转染KLF4-siRNA可敲减KLF4表达60%以上。在敲低KLF4表达的VSMC中,TGF-β1诱导TβRI表达的作用被取消,分化标志基因SM22α和SMα-actin的表达也明显下降,表明KLF4介导TGF-β1对TβRI表达的诱导作用。 另外,将KLF4腺病毒表达载体Ad-KLF4感染VSMC,观察强制表达KLF4对TβRI和VSMC分化标志基因表达的影响。RT-PCR和Western blot分析证实,在KLF4过表达的VSMC中,TβRI表达明显高于空载体对照组,与此同时,分化标志基因SM22α和SMα-actin的表达也显著升高。 2. TGF-β1通过激活Smad和p38 MAPK信号通路诱导KLF4磷酸化和KLF4与Smad2/3相互作用 TGF-β1通过与VSMC上的相应受体相互作用而触发细胞信号的跨膜转导,进而活化Smad信号通路而激活相关基因表达。丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)级联反应是胞内信号进行交互作用的重要信号转导通路。在上述阐明KLF4通过TβRI介导TGF-β诱导VSMC分化的基础上,本部分实验探讨TGF-β1对Smad和MAPK信号途径的影响,以期阐明TGF-β1诱导KLF4活化和促进细胞分化的信号转导机制。

2.1 TGF-β1通过激活Smad和p38 MAPK信号途径诱导KLF4磷酸化 VSMC经TGF-β1(2 ng/ml)刺激5、10、20、40 min,用磷酸化丝氨酸抗体对细胞裂解液进行免疫沉淀后检测磷酸化KLF4的水平。结果显示,随着TGF-β1刺激时间的延长,磷酸化型KLF4水平逐渐升高,在TGF-β1刺激20~40 min内,其磷酸化水平增加2倍;同时,TGF-β1刺激后,磷酸化型Smad2(p-Smad2)、Smad3(p-Smad3)和p38 MAPK(p-p38)水平也显著升高。 分别以TβRI特异性抑制剂SB431542、p38特异性抑制剂SB203580和ERK特异性抑制剂PD98059处理VSMC,特异性阻断Smad、p38或ERK信号通路的活化后,再以2 因为 ng/ml的TGF-β1刺激细胞40 min。Western blot结果显示,SB431542或SB203580预处理细胞可显著抑制KLF4磷酸化,而PD98059对KLF4磷酸化无明显影响。用靶向Smad2、Smad3或p38 MAPK的siRNA敲低内源性Smad2、Smad3或p38 MAPK表达后,TGF-β1对KLF4磷酸化不再产生明显影响。证明TGF-β1诱导的KLF4磷酸化依赖于Smad和p38 MAPK信号途径的激活。 2.2 TGF-β1通过诱导KLF4磷酸化而促进KLF4与Smad2/3相互作用 免疫共沉淀分析结果显示,VSMC被TGF-β1处理后,KLF4与Smad2/3相互作用形成的复合物明显增加。VSMC在TGF-β1(2 ng/ml)刺激5、10、20、40 min后,随着刺激时间的延长,KLF4与Smad2/3的结合明显增加,交互免疫沉淀也得到相似的结果。表明,TGF-β1能显著促进KLF4与Smad2/3的相互作用,并具有明显的时效关系。 为了检查KLF4磷酸化是否影响其与Smad2/3的相互作用,以SB431542、SB203580和PD98059处理VSMC,特异性阻断Smad、p38或ERK信号通路的活化后,再以2 ng/ml TGF-β1刺激细胞40 min。免疫共沉淀分析结果显示,在SB431542和SB203580预孵育的VSMC中,KLF4与Smad2/3的相互作用明显降低,交互免疫沉淀得到相似的结果。用靶向Smad2、Smad3或p38 MAPK的siRNA敲低内源性Smad2、Smad3或p38 MAPK表达后,TGF-β1对KLF4与Smad2/3的相互作用不再产生明显影响。上述结果表明,TGF-β1通过Smad和p38 MAPK信号途径诱导KLF4发生磷酸化修饰,而磷酸化型KLF4与Smad2/3的结合活性明显增加。 KLF4磷酸化位点定点突变实验证明,转染KLF4磷酸化位点(S470A)突变体的细胞再用TGF-β1处理时,KLF4的磷酸化水平明显降低,KLF4与Smad2/3的相互作用较对照组(转染野生型KLF4表达载体)降低。这些结果进一步提示,TGF-β1通过诱导KLF4磷酸化而促进KLF4与Smad2/3之间的相互作用。 2.

JNK通路介导软脂酸对Mcl-1的负向调节。 结论 本研究发现软脂酸诱导肝细胞凋亡过程中Mcl-1的蛋白水平显著下调,并进一步明确软脂酸诱导肝细胞凋亡主要是通过激活JNK通路、促进Mcl-1下调实现的,提示JNK/Mcl-1途径在软脂酸诱导的肝细胞脂性凋亡过程中具有重要作用。本研究为深入理解非酒精性脂肪肝发病机制提供新的线索,并为该病的治疗提供新的潜在靶点和策略。
肝纤维化(

hepatic fibrosis)是机体对慢性肝损伤的一种修复反应,是一种渐进的病理过程,是慢性肝病的共有病理变化,是多种类型细胞、氧化应激、细胞因子和生长因子等一系列复杂作用的结果。肝纤维化的特征改变是肝脏内细胞外基质( extracellu2larmatrix, ECM)的过度增生和异常沉积,如不加以及时治疗,将引起严重的肝纤维化并导致肝硬化,甚至引起肝功能衰竭。肝纤维化已成为一个危害人类生命健康的世界性问题,如果能阻止其发生,肝硬化及其并发症就能得到有效控制。近年来国内外研究认为,肝星状细胞(hepatic BI 6727制造商 stellate cell,HSC)是肝纤维化时过量ECM的主要来源,激活的HSC大量增殖,发生表型改变并分泌更多的ECM沉积于肝脏,是肝纤维化形成的关键。目前从肝纤维化发生发展的不同环节入手研制了许多抗纤维化药物,但仍未有十分确定、特效的药物,因此,寻找理想的抗肝纤维化药物及有关肝纤维化发病机制的阐明,具有重要的理论和临床意义。 苦参素(oxymatrine,OM),又名氧化苦参碱,是苦参碱经氧化合成、纯化、提取而得到的有效单体,是苦参碱的N-氧化物,氧化苦参碱因具有特殊的氧结构,从而使分子极性大增,较苦参碱具有独特的作用机理和疗效。以往的研究证实苦参素具有调节免疫、抗炎和抗肿瘤等多种功效。近年又有研究表明,OM具有抗乙肝及防治肝纤维化的作用,引起关注。本实验采用四氯化碳诱导的大鼠肝纤维化模型,首先从整体水平考察了OM对大鼠肝纤维化的作用;进一步在体外从细胞和分子水平探讨OM抑制HSC增殖的分子机制,观察OM对TGF-β1刺激HSC-T6增殖的影响,探讨MAPK信号转导通路与TGF-β1/smads信号通路在TGF-β1刺激HSC-T6增殖中的作用及相互关系,以企探讨OM的作用机制。

以及 本研究内容包括以下两个部分 一. OM对CC14诱导的大鼠肝纤维化的保护作用 建立CC14诱导的大鼠肝纤维化模型,设立正常组、模型组、OM给药组(30mg?kg-1, 60mg?kg-1, 120mg?kg-1)、秋水仙碱阳性对照组(0.2 mg?kg-1)。结果显示,OM对CC14诱导的大鼠肝纤维化具有良好的保护作用。模型组HA,LN, CIV,PCIII等纤维化血清学标志物水平较正常组明显升高,给予OM(60mg?kg-1, 120mg?kg-1)后可使其显著降低。肝纤维化的另一个重要指标肝组织Hyp含量的检测结果显示,OM可显著降低模型组的Hyp值。组织病理学结果表明OM可明显的抑制肝纤维化程度,改善肝组织结构,减少胶原沉积。 模型组大鼠肝匀浆中SOD和GSH-Px酶活性显著下降,而MDA含量显著升高。给予(30mg?kg-1,

selleck合成 60mg?kg-1, 120mg?kg-1)后可显著降低升高的MDA值,并显著升高SOD和GSH-Px活性。提示OM可缓解肝纤维化大鼠肝脏的氧化应激状态。 实验观察了OM对模型大鼠肝组织中α-SMA、TGF-β1、smad2、smad3、smad7mRNA的表达含量的影响,RT-PCR检测结果显示OM治疗后模型大鼠肝组织α-SMA、TGF-β1、smad2、smad3含量明显降低,smad7则有所上升。 在肝纤维化模型大鼠中,p38、JNK、ERK1/2磷酸化程度明显增加,给予OM可以有效降低肝纤维化大鼠p38、JNK、ERK1/2磷酸化的程度。 二探讨OM抗肝纤维化的分子机制 1苦参素对TGF -β1刺激的HSC-T6增殖的抑制作用 建立体外TGF-β1诱导的HSC-T6模型,OM在0.01,0.1,1,10,100mg·L-1浓度可抑制HSC-T6增殖,抑制率与OM浓度呈浓度依赖性。 2.苦参素对TGF -β1刺激的HSC-T6 p38MAPK信号通路的影响 Western blot检测结果显示,TGF -β1刺激HSC-T6可引起p38MAPK的迅速磷酸化,OM可显著抑制TGF -β1刺激的HSC-T6 p38MAPK的激活,明显降低p38磷酸化水平。提示抑制TGF-β1刺激的HSC-T6 p38MAPK磷酸化是OM抗肝纤维化的作用机制之一。 3.苦参素对TGF -β1刺激的HSC-T6 TGF–β1/smads信号通路的影响 Western blot检测结果显示,随TGF-β1刺激HSC-T6时间的递增,TβRI, smad2,Smad3蛋白表达递增,Smad7则有所降低。 OM可显著抑制TGF-β1刺激的HSC-T6 TβRI,smad2, Smad3蛋白的表达,上调Smad7的表达。提示抑制TGF–β1/smad通路是OM抗肝纤维化的作用机制之一。 4.

217(95%Cl:1.077一564，p=0.031)，提示 MMP一3基因启动子区5刀6A+5习SA基因型在汉族人群中与急
背景和目的： 购买Ceritinib 在动脉粥样硬化(AS)的发生、发展过程中，炎症反应具有重要作用，它贯穿于AS病变的各个阶段，同时也将AS病理改变与各种危险因子、临床心血管事件联系在一起。胰岛素抵抗(IR)不仅是AS的等危症，同时也是一种低水平的炎症，高浓度胰岛素(INS)通过激活细胞内信号转导通路，促进细胞增殖或炎性细胞因子表达。诱导型环氧合酶(COX-2)在炎症性疾病中起着重要作用，同时与AS关系密切，可能是防治AS或急性冠脉综合征(ACS)潜在的新靶点。本研究以人的冠脉标本为观察对象，比较了不同类型AS斑块中COX-2的表达，以探讨COX-2与AS病变以及AS斑块稳定性之间的关系；以高浓度INS刺激体外培养的大鼠动脉平滑肌细胞(VSMC)、人内皮细胞(EC)，以COX-2抑制剂(NS-398)进行干预，观察其对INS刺激的影响；在VSMC中，从基因、蛋白、酶活性三个水平观察INS对VSMC表达COX-2的影响．并探讨丝裂酶原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路与INS诱导COX-2的关系；以含人COX-2cDNA的表达载体(pCMV-COX-2)转染内皮细胞(EC)，观察阿司匹林和选择性COX-2抑制剂NS-398对转染后的EC表达细胞间粘附分子(ICMA-1)的影响，从而探讨COX-2抑制剂潜在的抗AS作用。

方法： 1、45个人冠脉标本根据AHA组织学分类定义和HE染色病理特征，以炎细胞含量为标准，分为正常冠脉(无炎细胞)、纤维斑块(轻度炎症、炎细胞<25％)、和复合斑块(炎细胞≧25％)组，复合炎症组中再分为中度炎症组(炎细胞0.05)，但可以抑制INs引起的vsMC增殖。INs刺激Ec可引起

IcAM一1 mRNA表达，而且IcAM一1表达随INS作用时间和浓度而增加(p0.05)。 3、10、100、500、1000mU/L的取S分别刺激VSMC3、6、12、24小时后， 可诱导COX一2的基因和蛋白表达、并刺激VSMC合成PGEZ、均表现出时效和 量效关系(p0.05);pD98059(25林M)、SB203580(20林M)、 以及二者共同作用均使INs诱导的cOX一2蛋白表达明显减少(p
目的:糖尿病肾病(Diabetic nephropathy,DN)是糖尿病严重的并发症之一,细胞外基质(Extracellular matrix,ECM)增多是其重要的病理改变。DN 发病机制错综复杂,目前尚未完全明了。多种因素作用下可引起肾脏细胞信号转导通路发生改变,从而进一步加重肾脏细胞的损害。p38 丝裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen-activated Protein Kinase, 时间 p38 MAPK)的信号转导通路在高血糖状态下被激活,使多种核转录因子活化,影响目的基因的表达,在一定程度上导致和加速了DN 的发生、发展。转化生长因子TGF-β_1(transforming growth factor –β_1,TGF-β_1)及结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)可以促进糖尿病患者和动物模型ECM 的积聚和肾脏纤维化。P38 MAPK 通路的在ECM 沉积和TGF-β_1、CTGF 表达中的作用如何,目前尚无深入研究。他汀类药物(statins)作为3-羟-3 甲基戊二酰辅酶A(HMG-CoA)还原酶抑制剂,临床主要用于脂代谢异常的治疗。但目前更让人们的关注的是statins 的非依赖降脂的肾脏保护作用,包括抑制细胞增殖,促进细胞凋亡,抗纤维化等等。Statins

可以减少糖尿病大鼠肾脏组织细胞外基质的沉积。statins是否通过p38 MAPK 通路,降低TGF-β_1和CTGF 的表达,介导其肾脏保护作用,目前尚无报道。本研究应用大鼠糖尿病模型和体外培养的肾小球系膜细胞,采用多种实验技术,从整体、细胞、分子等不同水平检测p38 蛋白激酶、其上游MAPK 激酶3/6(mitogen activated protein kinase kinasse3/6,MKK3/6)、下游核转录因子cAMP 反应元件结合蛋白1(cAMP response element-bingding protein,CREB1)以及丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶-1(Mitogen-activated 也许 Protein Kinase Phosphatase-1,MKP-1)的动态表达及活性变化,以阐明p38 MAPK 信号转导途径在糖尿病肾病发病中的作用和HMG-CoA 还原酶抑制剂洛伐他汀的肾脏保护机制。1.大鼠糖尿病模型的制备和p38 MAPK 信号通道蛋白的检测 方法:健康雄性Wistar 大鼠60 只,戊巴比妥钠腹腔麻醉(40mg/kg)
环氧合酶(COX)是重要的生理活性物质前列腺素(PGs)合成的限速酶,有两种亚型:COX-1和COX-2,COX-2主要在细胞因子的作用下合成PGs,因而在炎症、肿瘤过程中起重要作用。IL-1 β是诱导COX-2表达的前炎症因子之一。IL-1 β诱导气道COX-2表达的信号传导途径及调节机制尚不完全清楚。本研究目的在于探讨IL-1 β诱导COX-2表达的信号传导途径及核转录因子激活蛋白2 α(AP-2)在COX-2表达中的作用。 第一章 白介素1-β诱导A549细胞COX-2表达及信号传导途径 目的 蛋白激酶C(PKC)和有丝分裂原激活的蛋白激酶(MAPK)信号途径是参与细胞因子调节的重要信号途径,可被IL-1 β激活。本部分主要研究IL-1 β是否通过PKC和MAPK途径诱导COX-2表达。 方法 (1) IL-1 β 5ng/ml干预A549细胞0、3、6、9、12、24小时观察IL-1 β诱导A549细胞COX-2表达的时间过程。分别予以IL-1 β 0、0.

IPO实验IPO干预细胞后Oh、12h、24h分别利用AO-EB法测定细胞平均坏死率,分别观察RSV单独和联合IPO时减轻心肌细胞I/R损伤的作用。 2. RSV联合IPO对p38 MAPK/PPARy/AP-1通路影响IPO后12h,利用Western blotting技术检测p38

MAPK蛋白表达、磷酸化情况,PPARγ、AP-1蛋白表达情况。采用半定量RT-PCR技术检测p38 MAPK、cyclinA2 mRNA表达情况。观察RSV干预后再进行IPO时MAPK信号转导途径的变化。 3. p38 MAPK抑制剂对保护作用及上述通路的影响在以上五组基础上增加RSV+SB+IPO组。RSV+SB+IPO组：给予p38 MAPK抑制剂SB203580 20min, RSV20min,给予IPO。IPO后12h,利用AO-EB法测定细胞平均坏死率,Western blotting技术检测PPARγ、AP-1蛋白表达情况。采用半定量RT-PCR技术检测cyclinA2 mRNA表达情况。观察抑制p38 MAPK对RSV联合IPO的保护作用的影响,以及下游分子PPARγ、AP-1蛋白表达变化。 结果： 1. RSV单独和联合IPO时均可减轻心肌细胞I/R损伤用IPO干预H9c2(2-1)细胞0h、12h、24h后,各时间点IPO组细胞平均坏死率均低于I/R组,差异有显著统计学意义(P<0.05)。PPARy蛋白水平：SB+RSV+IPO组低于RSV+IPO组,差异有显著统计学意义(P<0.05)。AP-1蛋白水平：SB+RSV+IPO组高于RSV+IPO组,差异有显著统计学意义(P
免疫抑制剂具有重要的临床应用价值,广泛应用于器官移植抗排斥反应和自身免疫性疾病的治疗,常见的免疫抑制剂有糖皮质激素、维生素D3、环孢素A、雷帕霉素、它克莫司等。这些免疫抑制剂在临床应用的过程中,在产生治疗效应的同时,也具有一定的副作用,因此,研发新的具有治疗作用的免疫抑制剂意义重大。作为我国传统医学中的瑰宝,中草药对疾病的预防和治疗作用,尤其是对炎症、感染、肿瘤、自身免疫、移植排斥等疾病的预防和治疗作用,主要是通过免疫系统实现的。中药中很可能存在具有免疫抑制作用的成分,发现这些成分并研究其功能具有理论和应用价值。由于树突状细胞(Dendritic

Kinase 抑制剂 Library cells, DCs)是机体免疫应答中的关键细胞,该类细胞也很可能是免疫抑制剂的主要的靶细胞,因此,以DCs作为靶细胞很可能筛选到具有抑制作用的中药成分。鉴于此,我们课题组与第二军医大学药学院张卫东教授课题组合作,利用基于DCs分化发育和功能成熟的药物筛选平台,从496种中药单体化合物中成功筛选出18类31个有效单体成分。并选择对DCs分化发育抑制率较高,而本身的细胞毒性较小,且能有效促进DCs分泌IL-10的免疫抑制性的丝毛瑞香的提取物Lariciresinol(分子式C20H2106)作为研究对象,深入研究该成分对DCs的调控及其机制；并使用过敏性自身免疫反应性脑脊髓膜炎(EAE)模型研究了其在体内应用的有效性。 因为 (一)中药单体化合物Lariciresinol对DCs功能的影响 以本身的细胞毒性较小,且能有效促进DCs分泌IL-10的Lariciresinol成分为研究对象,研究了Lariciresinol对DCs的凋亡诱导作用、对DCs吞噬功能、成熟表型、细胞因子分泌、激发同种异体免疫反应和抗原提呈能力的影响。

我们以GM-CSF和IL-4诱导小鼠骨髓细胞生成DCs,并使用药物处理第五天的未成熟DCs24小时,再用终浓度为100ng／ml的LPS刺激24小时,检测相应指标。使用FACS检测annexinV和PI的方法确定了16nmol／ml为Lariciresinol对未成熟DCs的无毒性浓度范围。后期的研究发现,Lariciresinol不能影响DCs的吞噬和分泌IL-12P70、TNF-α和TGF-β的能力,却能明显促进抑制性细胞因子IL-10的分泌,并能抑制DCs激发同种异体免疫反应(MLR)和特异性抗原提呈能力。 (二)中药单体化合物Lariciresinol促进DCs分泌IL-10的机制 研究 IL-10是一种重要的具有免疫负调节作用的细胞因子。Lariciresinol是如何促进IL-10分泌的呢?进一步实验发现,Lariciresinol对DCs分泌IL-10的促进具有Lariciresinol浓度梯度依赖性和LPS的浓度梯度依赖性。那么,促进的信号通路如何呢?我们采用Western Blot技术,Lariciresinol处理第五天的未成熟DCs 24小时,再加入终浓度为100ng／ml的LPS,并在第0、15、30和60分钟,裂解细胞,收集蛋白检测ERK1／2、p38和JNK的磷酸化情况,发现Lariciresinol能够明显增强ERK1／2的磷酸化；ERK1／2信号通路抑制剂PD98059能够抑制Lariciresinol对DCs的IL-10分泌促进作用,另外,p38信号通路抑制剂SB203580,亦能抑制Lariciresinol促进的IL-10分泌作用。由此,证明了Lariciresinol通过ERK1／2信号通路促进DCsIL-10的分泌,而对P38信号可能具有基础性的活化作用。 Apoptosis抑制剂 (三)中药单体化合物Lariciresinol处理的DCs过继转移和Lariciresinol体内注射均能抑制自身免疫病的发生 既然,Lariciresinol可以明显促进DCs分泌IL-10的能力,并能部分抑制DCs的成熟和抗原提呈能力,那么,Lariciresinol:处理的DCs能否通过诱导免疫耐受而抑制自身免疫病的发生呢?Lariciresinol直接体内注射,又如何呢?本部分研究中,我们通过小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)模型,对其抑制作用进行了研究。 以MOG35-55多肽作为抗原,辅以腹腔注射百日咳毒素,成功地建立C57BL／6小鼠的EAE模型。其中抗原肽诱导建立的EAE组小鼠发病率达到95%,平均临床打分为3.16±0.

This concept was designed to describe a material combining diagnosis,treatment and follow up of a disease.It evolved and included molecular targeting and nanotechnologies that incorporate both diagnosis and therapeutics.In this editorial,we are presenting briefly the concept and evolution of theranostics,highlighting

many applications of theranostics in daily practice and discussing future perspectives and aspects of this model in gastrointestincal cancers.
目的探讨表皮生长因子受体(EGFR)、HER-2/neu蛋白在胃癌中的表达及其与预后的关系。方法回顾性分析2006年11月至2013年11月我院收治的90例胃癌患者(观察组)的临床资料,另选取正常胃组织50例作为对照组。观察2组EGFR、HER-2/neu蛋白的表达情况,分析胃癌组织中EGFR、HER-2/neu蛋白表达和临床病理特征的关系。结果观察组EGFR、HER-2/neu蛋白表达阳性率高于对照组,差异均有统计学意义(P0.05),而与胃癌分化程度、临床分期、浸润深度、淋巴结转移、远处转移密切相关,差异均有统计学意义(P
目的探讨2011年4月至2015年4月基础和临床研究关于棘皮动物微管相关类蛋白4与间变性淋巴瘤激酶(EML4-ALK)融合基因在肺腺癌中的表达特点及临床意义。方法通过万方医学网和贵州省数字图书馆数据库文献法查询,对5年来发表在国内的有关EML4-ALK的文献进行收集整理和分析。结果共收集符合纳入标准文献21篇,研究病例2

JQ1 时间 550例,总结发现在肺腺癌中,EML4-ALK的检出率为9.61%,不同检测方法检出结果存在一定差异。结论 EML4-ALK在肺腺癌中呈低表达趋势,与肺腺癌的发生、发展有关,可作为新的治疗靶点,但检测方法仍需进一步研究和优化。
以3,4,6-三氯哒嗪和4-碘吡唑为起始原料,分别与芳胺、碘甲烷、N-Boc哌啶-4-甲磺酸酯和2-(2-溴乙氧基)四氢-2H-吡喃通过取代、氧化和Suzuki等反应,合成了16个新型的1-H-[1,2,3]三氮唑并[4,5-c]哒嗪类化合物,其结构经1H NMR和ESI-MS表征。
本文针对转化医学发展现状和本科药理学教学现状,分析探讨了将转化医学思想应用到药理学教学过程中的目的、具体实施方法和思路以及推广过程中可能存在的困难及不足,为基础医学应用型教学模式的改革提供参考。
目的探讨心理干预措施对非小细胞肺癌化疗患者负性心理反应的作用及其对生活质量的影响。方法选择2012年10月至2014年12月间收治的98例肺癌患者,采用随机数字表法随机分为研究组(51例)和对照组(47例)。研究组患者在常规化疗方案的基础上进行心理干预,对照组患者行常规化疗方案。采用抑郁自评量表(SAS)、焦虑自评量表(SDS)和中国癌症化疗患者生活质量调查问卷(QLQ-CCC)评价并比较两组患者的干预效果。结果护理干预前后,两组患者症状自评量表(SCL-90)各因子评分比较显示,干预前两组间各因子的差异均无统计学意义(P>0.05),干预后研究组患者各因子评分均明显降低(P0.05),且研究组患者的各因子评分均低于对照组(P0.05)。干预第8周时,研究组患者评分显著低于首次测评(P0.05),且研究组患者显著低于对照组(P0.05)。护理干预第8和16周时,研究组患者各方面评分均低于对照组(P<0.05)。结论心理干预可以明显改善非小细胞肺癌患者的心理障碍,提高患者的生活质量。
Gastric

cancer is one of 获悉更多 the most common malignancies worldwide.The overall prognosis remains poor over the last decades even though improvements in surgical outcomes have been achieved.A better understanding of the molecular biology of gastric cancer and detection of eligible molecular targets might be of central interest to further improve clinical outcome.With this intention,first steps have been made in the research of growth factor signaling.

5 d的小鼠上颌突间充质细胞进行成骨诱导培养1周,实验组加入SB203580(p38磷酸化抑制剂)。通过免疫荧光检测磷酸化p38的表达,通过Brdu标记和免疫荧光检测细胞的增殖能力,通过ALP染色和定量PCR检测成骨标志物的表达。采用SPSS18.0软件包对数据进行统计学分析。结果

:成骨诱导可促进上颌突间充质细胞中p38的磷酸化(p-p38)。抑制p38的磷酸化,可抑制上颌突间充质细胞增殖,降低成骨标志物ALP、Runx2、OCN和OPN的表达,使ALP染色减弱。结论:p38信号通路参与调控体外培养的上颌突间充质细胞的成骨分化。
目的探讨牛蒡子苷对于人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞增殖的调节作用及相关的分子机制。方法将Tca8113细胞分为对照组(Control组)、牛蒡苷干预组(ATG干预组)及牛蒡苷+p38 MAPK抑制剂SB203580组(ATG+SB组)3组。使用MTT法对不同时间点(0h,24h和72h)各组Tca8113细胞活性进行检测;使用western blot法对干预24小时后Tca8113细胞的p38 MAPK的活化水平及caspase-3的活化水平进行分析。结果与对照组相比,给予牛蒡苷干预的Tca8113细胞活性呈时间依赖性下降,差异均有统计学意义(P均<0.05),且各时间点ATG组较ATG+SB组细胞活性下降程度更加明显,差异均有统计学意义(P均<0.05)。干预24小时后,给予牛蒡苷干预的Tca8113细胞p38MAPK及caspase-3的活化水平均有显著的上升,差异有统计学意义(P均
为研究脂多糖(LPS)对绵羊输卵管上皮细胞β-防御素-1(SBD-1)表达的影响及其分子机制,本研究通过荧光定量PCR检测不同浓度LPS作用不同时间对绵羊输卵管上皮细胞SBD-1

Idelalisib供应商 m RNA的相对表达量的影响,通过western blot检测经LPS处理后P38 MAPK通路的活化情况,通过荧光定量PCR检测经P38 MAPK通路抑制剂(SB203580和SB202190)处理后LPS对SBD-1 m RNA相对表达量的影响。结果表明,LPS呈浓度和时间依赖方式诱导绵羊输卵管上皮细胞中SBD-1的表达,100 selleck产品s ng/m L的LPS在12 h诱导效果最佳。进一步研究显示,100 ng/m L的LPS可以显著激活P38 MAPK通路,而其抑制剂SB203580和SB202190可以阻断LPS对SBD-1的诱导作用。这些结果表明,LPS可以诱导绵羊输卵管上皮细胞表达SBD-1,并且P38 MAPK参与调控这个过程。本实验结果为进一步研究β-防御素的调控机制,探索输卵管炎发病机理以及合理开发输卵管炎相关药物提供了实验依据。
目的研究磷酸化P38丝裂原活化蛋白激酶(P-P38 mitogen-activated protein kinase,P-P38MAPK)和环氧化酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)在胃癌细胞株中的表达及二者的关系,探讨非甾体类抗炎药(non-steroidalanti-inflammatory drugs,NSAIDs)的抑癌机制。方法体外常规培养胃癌细胞株SGC7901。实验分为空白对照组(CON组)、NS398组(NS组)、SB203580组(SB组)、SB203580和NS398共同作用组(SBNS组)以及溶剂对照组(DMSO组)。用四甲基偶氮唑盐比色法检测药物对SGC7901细胞增殖的抑制作用;应用流式细胞定量检测技术(flow

cytometry,FCM)检测SGC7901细胞凋亡和细胞周期;应用FCM和蛋白免疫印迹(Western blot)检测SGC7901细胞中COX-2、P-P38MAPK蛋白的表达。结果各组药物作用于SGC-7901细胞均可诱导细胞凋亡,细胞凋亡率与空白对照组相比差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);抑制细胞增殖。CO)X-2蛋白表达SB组、NS组和SBNS组明显低于CON组(P<0.01);SBNS组明显低于NS组和SB组(P<0.01或P<0.05)。P-P38MAPK蛋白表达SB组明显低于CON组(P<0.05);而NS组和SBNS组明显高于CON组(P<0.05)。结论胃癌细胞株SGC7901中,P-P38MAPK是COX-2的上游激酶,可上调COX-2的表达,COX-2可能对P-P38MAPK有负反馈调节作用。P-P38MAPK活化后在胃癌细胞株SGC7901中的终效应是促进肿瘤细胞增殖。
目的研究蹄叶橐吾醇化乙酸乙酯萃取物的抗炎作用机制。方法用Western 很少 blot法检测RAW264.7细胞p38 MAPK的磷酸化水平与COX-2的蛋白表达。结果 5μg/ml蹄叶橐吾醇化乙酸乙酯萃取物能抑制脂多糖(LPS)诱导RAW264.

01）。熊果酸干预组的gp91phox、p67phox蛋白的表达高于DPI及LY294002干预组（P0.05）。上述结果表明熊果酸能抑制瘦素诱导的gp91phox、 p22phox、 p67phox、 Rac1蛋白表达。 2．熊果酸对瘦素诱导的HSC-T6细胞PI3K、Akt及P38MAPK信号通路活化的影响 2.1.熊果酸对瘦素诱导的HSC-T6细胞PI3K蛋白表达的影响 瘦素刺激HSC-T6细胞30min后，细胞内PI3K蛋白表达较空白对照组显著升高（P<0.01）；给予熊果酸干预后PI3K蛋白的表达明显低于瘦素组（P<0.01）。DPI及LY294002干预后PI3K的表达均低于瘦素组（均P0.05）。上述结果表明熊果酸可以抑制瘦素诱导的PI3K蛋白表达。 2.2.熊果酸对瘦素诱导的HSC-T6细胞Akt蛋白磷酸化的影响 瘦素刺激HSC-T6细胞30min后，细胞内P-Akt表达较空白对照组显著升高（P<0.01）；给予熊果酸干预后P-Akt表达明显低于瘦素组（P<0.01）。DPI及LY294002干预后P-Akt表达均低于瘦素组（均P<0.01）；熊果酸干预组的P-Akt蛋白的表达低于DPI干预组（P0.05）。上述结果表明熊果酸可以抑制瘦素诱导的Akt蛋白磷酸化。

时间 2.3.熊果酸对瘦素诱导的HSC-T6细胞P38MAPK蛋白磷酸化的影响 瘦素刺激HSC-T6细胞30min后，细胞内p-P38MAPK表达较空白对照组显著升高（P<0.01）；给予熊果酸干预后p-P38MAPK表达明显低于瘦素组（P<0.01）。DPI、SB203580及LY294002干预后p-P38MAPK均低于瘦素组（均P<0.01）；熊果酸干预组的p-P38MAPK的表达低于SB203580及LY294002干预组（P0.05）。上述结果表明熊果酸可以抑制瘦素诱导的P38MAPK蛋白磷酸化。 3．熊果酸对瘦素诱导的HSC-T6细胞TIMP-1、MMP-1蛋白表达的影响 ABT-263溶解度 3.1.熊果酸对瘦素诱导的HSC-T6细胞TIMP-1蛋白表达的影响 瘦素刺激HSC-T6细胞24h后TIMP-1蛋白表达较空白对照组升高（P<0.05）；给予熊果酸干预后TIMP-1蛋白表达明显低于瘦素组（P<0.01）。DPI、SB203580及LY294002干预后TIMP-1蛋白表达均低于瘦素组（均P<0.01）；熊果酸干预组的TIMP-1的表达低于LY294002干预组（P0.05）。上述结果表明熊果酸可以抑制瘦素诱导的TIMP-1蛋白表达。

3.2.熊果酸对瘦素诱导的HSC-T6细胞MMP-1蛋白表达的影响 瘦素刺激HSC-T6细胞24h后MMP-1蛋白表达较空白对照组降低（P<0.05）；熊果酸干预后MMP-1蛋白表达明显高于瘦素组（P<0.01）。分别给予DPI、SB203580及LY294002干预后MMP-1的表达均高于瘦素组（P<0.01或P<0.05）；熊果酸干预组的MMP-1的表达高于SB203580干预组（P0.05）。上述结果表明熊果酸可以阻断瘦素诱导的MMP-1蛋白表达下调。

结论： 1.熊果酸能抑制瘦素诱导的大鼠HSC-T6细胞NOX亚基gp91phox、p22phox、p67phox、Rac1表达及PI3K/Akt、P38MAPK信号通路的活化。 2.熊果酸下调TIMP-1蛋白及上调MMP-1蛋白表达的机制可能与熊果酸抑制NOX调控的PI3K/Akt及P38MAPK信号通路有关。
目的： 研究肝细胞核因子4α(hepatocyte nuclear factor4α,HNF4α)对肝癌细胞凋亡的影响以及与p38MAPK信号转导通路的关系,揭示HNF4a抗肝癌的机制。 方法： 1.收集处于对数生长期的肝癌细胞HepG2,利用阳离子聚合物转染技术用外源基因pCMVHNF4a转染肝癌细胞HepG2,对照组转染pEGFP-N1,转染24h后将培养基更换为新鲜的10%胎牛血清DMEM培养基,继续培养24h荧光显微镜观察对照组绿色荧光蛋白表达,选取三个视野白光下计算视野内细胞数,激发光下计算同视野发绿色荧光的细胞数,计算对照组转染效率,Western 什么 blot检测目的基因在肝细胞HepG2中的蛋白表达。 2.P38MAPK信号通路阻断剂SB203580阻断p38MAPK信号转导通路,AnnexinV-FITC-PI双染细胞后,流式细胞仪检测各组细胞凋亡率,比较转染HNF4α组的肝癌细胞HepG2凋亡率与转染pCMV组以及HNF4α+SB203580组凋亡率。RT-PCR检测凋亡相关基Caspase-3、Fas表达量,比较HNF4α组两种基因表达量与pCMV组以及HNF4α+SB203580组两种基因表达量。 结果： 1.利用阳离子聚合物转染技术用HNF4α转染肝癌细胞HepG2,荧光显微镜下观察对照组绿色荧光蛋白表达,计算48h时对照组转染效率为57%,Western blot检测转染HNF4a蛋白表达,实验组表达量明显高于对照组,与对照组相比HNF4a蛋白表达量有显著差异(P<0.

0058士0.0019V.S.0.0022±0.00059,p<0.01)。沉默WDR62基因表达能显著减少细胞周期蛋白B和CDK1的表达水平,而使具有诱导凋亡作用的caspase-3表达增高。活体内沉默WDR62可抑制胃癌细胞生长,LV-shRNA-WDR62-BGC-823组肿瘤平均大小明显小于LV-shRNA-Control-BGC-823组,差异具有统计学意义(1.62±0.17cm3V.S.3.87±0.36cm3,p
最近的报告发现的CD4+Th细胞亚群,在特定的细胞因子环境下,有能力改变他们的基因表达模式。我们之前发现Thl细胞在受到抗原OVA,IL-2和IL-18刺激下可以产生IL-3,IL-9,IL-13和粒细胞巨噬细胞集落刺激因子GM-CSF,基于其独特的Thl细胞的可塑性特点,我们将这一类活化的Thl细胞命名为“超级Thl细胞”(Super Dinaciclib分子量 Thl cells)。在这篇论文中,我们采用流式细胞分选技术分离提取小鼠原代naive CD4+T细胞,将其分化至成熟的Thl细胞,给予IL-18和TCR再刺激后,利用流式细胞分析技术,酶联免疫吸附实验,RT-PCR等手段观察Thl表型的改变。我们首次发现IL-18和T细胞受体的刺激可以使分化成熟Thl细胞分泌更多的TGF-β,这些TGF-β对于T细胞调控起到了关键作用,因为它们参与了Super

Th1细胞分泌IL-9的过程。此外,将分化成熟的Thl细胞给予CD3抗体刺激后,我们发现Thl细胞会同时分泌少量的IL-4,这些IL-4和TGF-β协同起来促使Thl细胞分泌大量的IL-9。同时,IL-4/STAT6信号通路也是IL-9得以大量表达的必要条件。总之,在本篇论文中,我们首次发现并论证了在Super Thl细胞合成IL-9的过程中,TGF-β发挥着极为关键的作用。Thl细胞在IL-18和TCR的共同刺激条件下改变自己的表型,通过NF-κB调控通路的影响,合成并分泌TGF-β,与IL-4协同一起调控Il9的转录。
研究背景再生障碍性贫血(再障,Aplastic Anemia, AA)发病机理较为复杂,近来逐渐认识到免疫机制紊乱包括T淋巴细胞活化,调节性T细胞抑制在再障发中的作用,目前其已成为再障基础研究方面一个最活跃的领域。而调节性T细胞对再障发病机制的研究尚鲜有报道。 红髓脂肪化是再障特征性病理改变。对于再障骨髓中的骨髓组织减少、脂肪组织增多的原因及作用今年来逐渐成为研究热点之一。由于成骨细胞和脂肪细胞共同来源于骨髓间充质干细胞(Bone 很少 marrow mesenchymal stem cells, BMMSCs), BMMSCs作为骨髓基质细胞的起源细胞,BMMSCs及其分化成的细胞在再障发病过程中的作用逐渐引起人们的重视。 目前国内外均认为骨髓间充质干细胞成骨分化与成脂分化不是彼此孤立的过程,而是存在着相互制约的平衡关系。目前该领域已成为干细胞生物学研究的热点。大量的研究证实这两种分化机制与多种生长因子、及胞内外信号通路紧密相关。成脂分化的诱导因素常常是成骨分化的抑制因素,反之亦然。如过氧化物酶体增殖物激活受体-γ

(Peroxisome proliferation-activated receptor-gamma, PPAR-γ)是成脂分化的主要的诱导因子,同时它可以抑制细胞的成骨分化。 成脂分化与成骨分化是多种信号通路间相互作用的结果,包括BMP、Wnt、 确认细节 Hedgehogs, Delta/jagged蛋白、FGF、IGF、以及转录因子PPAR-γ(?)Runx2等多条信号通路。目前认为在非Wnt途径中,骨形态发生蛋白(bone

morphogenetic proteins,BMPs)途径具有重要地位。BMPs是研究最早和最有潜力的诱导间充质干细胞成骨分化的细胞因子,其属于转化生长因子β (transform growth factor-β, TGF-β)超家族的成员之一,BMP-2是目前研究的较多且作用明显的成骨因子。近来越来越多的研究发现,BMPs可通过MAPKs,PI3K等通路进行信号转导,这些信号转导通路不直接依赖转录因子Smad的激活,其中BMPs-MAPKs通路是通路中重要的一环。 Leptin和Adiponectin是脂肪组织参与免疫调节反应的两个主要的脂肪因子。Leptin对T淋巴细胞、单核细胞、巨噬细胞都具有免疫调节作用。免疫细胞受到免疫刺激后,产生细胞因子(尤其是TNF-a)作用于脂肪细胞,使其分泌Leptin,从而达到使免疫信号扩大化的目的。Adiponectin是脂肪细胞表达最丰的激素。主要在天然免疫效应中发挥作用,能抑制髓单核细胞祖细胞的增殖,抑制巨噬细胞的活性。 那么调节性T细胞是否可以诱导BMMSCs定向分化,分化方向,可能机制及作用。我们对此进行以下研究,以期从一个新的角度探索再生障碍性贫血的发病机制。 目的(1)体外分离、培养、鉴定小鼠BMMSCs,并研究其生物学特点。(2)体外分离、纯化、鉴定小鼠调节性T细胞。(3)调节性T细胞对骨髓间充质干细胞成骨成脂分化的影响及可能机制。(4)建立免疫相关骨髓衰竭小鼠模型,输注调节性T细胞、BMMSCs,观察其对骨髓脂肪化的影响。 方法(1)贴壁筛选法分离纯化BALB/c小鼠BMMSCs,胰酶消化传代,FCM鉴定细胞表型,并在特定诱导剂下诱导向脂肪细胞、成骨细胞及软骨细胞分化。(2)磁珠分选法分离纯化BALB/c小鼠脾脏调节性T细胞,用流式细胞仪鉴定其免疫表型。(3)将磁珠分选法分离纯化的BALB/c小鼠脾脏调节性T细胞与BALB/c小鼠BMMSCs共培养72小时,Real-time PCR, Western Blot检测BMMSCs成骨分化和脂肪分化相关基因和蛋白表达的变化；共培养7天后PNPP法测定碱性磷酸酶活性并进行碱性磷酸酶染色,EL1SA法和免疫组织化学染色进行I型胶原检测；共培养14天进行油红O染色检测脂滴的形成及Von Kossa染色观察钙化结节的形成。(4)应用SiRNA技术沉默BMP-2基因,p38MAPK抑制剂SB203580和ERK1/2抑制剂PD98059, PKA抑制剂H-89, Real-time PCR, Western Blot, Elisa.免疫组化方法检测BMMSCs成骨分化和脂肪分化相关基因和蛋白表达的变化,研究BMP-2, MAPKs, cAMP-PKA通路对调节性T细胞对BMMSCs成骨作用影响。(5)C57BL/6小鼠(父本)和BALB/c小鼠(母本)杂交产生CByB6F1小鼠,将F1小鼠γ射线亚致死量照射(4.