2%MPTP溶液,剂量为20mg/(kg·d),连续注射5d,建立PD模型,并进行相应治疗。动物存活期为28d。 主要实验结果如下： 1.针刺舞蹈震颤控制区对PD模型小鼠行为学的影响 腹腔注射MPTP后,小鼠出现不同程度的肢体震颤,竖毛竖尾急性反应。造模5天后小鼠出现体重减轻、毛色暗淡、行动迟缓等表现,爬杆时间延长。对爬杆时间进行评分,与正常组相比,模型组计分比正常组明显减少(P<0.05),三个治疗组较模型组均有明显增加(P<0.05),但针刺组和针美组的数量较模型组和美多巴组增加,其中针美组的数量较美多巴组显著增加(P<0.05)；而针美组表达比模型组明显增加(P<0.05)；针刺组、针美组表达比模型组明显升高(P<0.05)；针刺组表达比美多巴组表达明显升高(P<0.05)；针美组表达比针刺组明显降低(P<0.05),针刺组CA1-CA4区比正常组、模型组和美多巴组的表达有明显升高(P<0.05)；针美组的CA1和CA2区的表达较模型组明显升高(P<0.05),其中美多巴组的表达最低,但针刺组的表达与正常组无明显差别；针刺组及针美组与美多巴组比较,表达量明显上升(P<0.05)；针美组在CA1、CA3和CA4区的表达比模型组和美多巴组明显升高(P<0.05)；针美组在CA1和CA4的表达比针刺组有明显上升(P
目的：癫痫是神经系统中一种常见的综合征，可发生于各个年龄阶段的人群，流行病学调查显示：全世界大约有5000万癫痫患者，我国的癫痫患病率为3.5‰-4.8‰。癫痫具有反复发作的特点，其病理生理基础是脑部神经元高度同步化异常放电导致正常的生理功能紊乱。短暂的反复发作或者一次持续发作均可导致严重的神经元凋亡,尤其是海马等边缘系统的神经元凋亡更为明显。研究表明，神经元凋亡和神经胶质细胞增多能够促使海马硬化，海马硬化导致癫痫频繁发作甚至形成难治性癫痫。因此，深入研究癫痫发作后神经元凋亡的分子机制，探索新型有效的抗神经元凋亡的药物具有深远的意义。

寻找更多 本实验以杏仁核电点燃的慢性癫痫大鼠模型作为研究对象，以α-硫辛酸（α-lipoic acid,α-LA）作为干预剂。分别检测大鼠点燃前后的后发放阈值（ADT)，达到每个发作等级所需的累积刺激数及累积后发放持续时间(ADD)，应用Western Blot方法检测p38MAPK及p-p38MAPK在海马组织中的表达情况，应用流式细胞分析碘化丙啶(Propidium Iodide,PI)染色技术检测海马神经元凋亡率。从而研究α-LA对杏仁核电点燃癫痫大鼠的行为及海马p38MAPK表达的影响，并初步探讨α-LA对杏仁核电点燃致痫大鼠的脑保护作用及分子机制。 selleck化学药品液面控制 方法：选用雄性健康清洁的Wistar大鼠36只，体重在250-300g之间。随机分为正常对照组:不予以任何处理；α-LA组：每天给予α-LA（40mg/kg）腹腔注射一次；假手术组：杏仁核植入电极后不予以任何处理；电刺激模型组：植入电极后每天给予120%的点燃前ADT刺激一次；电刺激+α-LA低剂量组：植入电极后每天给予α-LA （20mg/kg）腹腔注射30min后以120%的点燃前ADT刺激一次；电刺激+α-LA高剂量组：植入电极后每天给予α-LA Cell Cycle抑制剂 （40mg/kg）腹腔注射30min后以120%的点燃前ADT刺激一次，连续刺激15天，每组6只大鼠。依据Racine六级评价标准观察大鼠的行为学表现，记录大鼠每天的发作等级及ADD。造模结束后对大鼠采用断头取脑并快速分离海马组织，用Western

Blot方法检测p38MAPK及p-p38MAPK的表达水平，并用流式细胞术PI染色技术检测海马神经元凋亡率。 结果： 1.行为学观察①达到第一次Ⅴ级发作所需的累积电刺激数：与模型组（10.17±0.31）相比，电刺激+α-LA高剂量组（11.50±0.43）明显增多（P0.05)。②达到第一次Ⅴ级发作所需的累积ADD：与模型组（235.83±5.00）相比，电刺激+α-LA低剂量组（191.17±5.82）和电刺激+α-LA高剂量组（184.83±7.60）明显缩短（P0.05）。③点燃前后的ADT：模型组点燃后的ADT（133.33±12.29）较点燃前（273.33±24.59）明显降低（P<0.05）；电刺激+α-LA高剂量组点燃后的ADT（200.00±17.13）较点燃前（286.67±22.31）明显降低（P<0.05）；电刺激+α-LA低剂量组点燃后ADT（153.33±19.78）较点燃前（280.00±30.55）明显降低（P<0.05）。④点燃后ADT：与模型组相比，电刺激+α-LA高剂量组明显增高（P0.05）。假手术组、正常对照组、α-LA组大鼠均无癫痫发作。 2.Western Blot检测结果假手术组、正常对照组、α-LA组的海马组织内p-p38MAPK表达水平分别为0.55±0.06、0.62±0.05、0.64±0.05，差异无统计学意义（P>0.05）。与电刺激+α-LA低剂量组(2.20±0.04)和电刺激+α-LA高剂量组(1.26±0.93)相比，模型组海马p-p38MAPK表达水平(3.39±0.

0001)。与对照组相比，在GIST-T1中转染miR-218mimic48h后，细胞中miR-218的表达显著上升(p<0.01)。MTT结果显示：在GIST-T1细胞中过表达miR-218后，细胞活力显著下降(p<0.01)。流式细胞仪分析结果显示：过表达miR-218后，细胞的增殖指数明显下降(p<0.01)；细胞的凋亡显著增加(p<0.01)。transwell侵袭小室检测结果显示：增强miR-218的表达后，穿过transwell小室的细胞数显著降低(p<0.01)。与对照组相比，在GIST430细胞中转染miR-218mimic48h后，细胞中miR-218的表达显著上升(p<0.01)，转染miR-218inhibitor后，miR-218的表达明显下降(p<0.01)。与对照组相比，在GIST882细胞中转染miR-218mimic48h后，细胞中miR-218的表达显著上升(p<0.01)，转染miR-218inhibitor后，miR-218的表达明显下降(p<0.01)。MTT和流式细胞仪检测结果显示：在甲磺酸伊马替尼作用下的GIST882细胞中抑制miR-218表达后，细胞活力明显上升(p<0.01)，细胞凋亡数明显减少(p<0.05)；而在甲磺酸伊马替尼作用下的GIST430细胞中miR-218过表达后，细胞活力明显下降(p<0.01)，细胞凋亡数明显增加(p<0.01)；促进细胞凋亡(p
第一部分PI3K/AKT/mTOR信号转导通路在弥漫大B细胞淋巴瘤中的活化及临床意义

PF299 弥漫大B细胞淋巴瘤（DLBCL）是最常见的非霍奇金淋巴瘤，占国外新发淋巴瘤病例的30%，占中国新发淋巴瘤病例的40-50%。针对肿瘤信号通路的研究可以更好地理解DLBCL的分子生物学发病机制，并开发新的靶向治疗手段。我们研究了DLBCL病理标本中PI3K/AKT/mTOR通路关键蛋白的表达及其与临床预后的联系。在DLBCL细胞株中评估了利妥昔单独及联合PI3K/AKT/mTOR通路抑制剂雷帕霉素的抗肿瘤效果。共有73例患者的病理学组织标本受检，包括45例男性和28例女性，年龄分布为18-78岁（平均年龄50岁）。P-AKT阳性标本为40例（54.8%），p-p70S6K阳性标本为34例（46.6%），p-4E-BP1阳性标本为33例（45.2%）。p-AKT表达与临床疗效呈负相关。在CHOP治疗组中p-AKT阳性患者PFS和OS较p-AKT阴性患者低；R-CHOP组中无明显统计学差异。DLBCL细胞中存在PI3K/AKT/mTOR信号通路的异常活化，p-AKT和p-mTOR及其下游主要效应蛋白p-p70S6K和p-4E-BP1的高表达。利妥昔联合mTOR抑制剂雷帕霉素能增加对该通路的抑制作用。总之，PI3K/AKT/mTOR信号转导通路在DLBCL中异常活化与疾病的发生发展密切相关，并且是预后的不良因素。PI3K/AKT/mTOR异常活化的患者疾病进展迅速，对治疗反应差，生存期短。利妥昔可下调PI3K/AKT/mTOR通路活性，减少该通路对疾病的不良影响。利妥昔联合PI3K/AKT/mTOR通路抑制剂有望成为DLBCL新的靶向治疗手段。

Estrogen Receptor inhibitor 第二部分利妥昔联合everolimus靶向AKT/mTOR途径治疗弥漫大B细胞淋巴瘤的临床前研究 本研究评估了抗CD20单抗利妥昔联合mTOR特异性抑制剂everolimus的抗肿瘤效果。与利妥昔及everolimus单药相比，两药联合可更有效地抑制细胞增殖，具有明显的协同抗肿瘤效应，能显著下调AKT、mTOR及下游效应分子。联合处理组肿瘤细胞发生明显G0/G1期阻滞，凋亡细胞比例增高。利妥昔可下调p-AKT表达，避免抑制mTOR引起的AKT负反馈性激活，从而进一步下调mTOR通路活性。利妥昔联合everolimus在动物模型上同样具有明显的协同抗肿瘤效应。本研究为临床采用利妥昔-everoliums联合方案治疗DLBCL提供了理论依据。 WH-4-023购买 第三部分PI3K/mTOR双重抑制剂NVP-BEZ235靶向治疗弥漫大B细胞淋巴瘤的体外研究 目的：在体外水平研究新型PI3K/mTOR双重抑制剂NVP-BEZ235对弥漫大B细胞株的靶向作用及机制。方法：采用CCK-8法检测NVP-BEZ235对弥漫大B细胞株SUDHL-4和DB增殖的影响，流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡，蛋白印迹法检测PI3K/AKT/mTOR信号通路靶蛋白、细胞周期/凋亡相关分子的变化。结果：NVP-BEZ235可呈剂量依赖性地抑制弥漫大B细胞株SUDHL-4和DB的增殖；使细胞周期阻滞于G0/G1期，并诱导细胞凋亡；蛋白印迹法显示NVP-BEZ235能抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路中关键分子的活性，下调细胞周期相关蛋白和抗凋亡蛋白，上调促凋亡蛋白。结论：PI3K/mTOR双重抑制剂NVP-BEZ235可在体外水平抑制弥漫大B细胞株SUDHL-4和DB的生长，使细胞周期阻滞在G0/G1期，并诱导细胞凋亡，有望成为的DLBCL新的靶向治疗药物。
20(S)-原人参二醇（Protopanxadiol, PPD）是从西洋参（Panax quinquefoliumL.）茎叶总皂苷中提取、分离、转化而得到的人参二醇组皂苷元，分子式为C30H52O3，相对分子质量为460.

7％ vs 28.3±11.1％p＜0.001)显著降低。与生理盐水组比较，福辛普利组左室舒张末期内径(LVIDd)(8.76±1.73

vs 6.91±0.67mm，p＜0.001)、左室收缩末期内径(LVIDs)(6.44±2.13 vs 4.69±0.90mm，p＜0.01)、左室舒张末期容积(LVEDV)(0.494±0.173 vs 0.364±0.116ml，p＜0.05)和左室收缩末期容积(LVESV)(0.315±0.140 vs 0.194±0.086ml，p＜0.01)
背景：神经病理性疼痛是医学领域的挑战性研究课题，目前发病机制不清，尚缺乏有效的治疗措施；因此寻求新的药物显得非常迫切；而对其发病机理的研究是寻找药物作用靶点的基础。脊髓背角神经元在疼痛的感知和传递中发挥重要作用；脊髓背角神经元接受外周感觉神经的传入，然后将这些信息再传递到大脑，并接受和整和从大脑传来的下行控制信号。许多对疼痛传递有重要作用的分子位于脊髓背角；外周神经损伤引起中枢敏化的原因可能是脊髓背角生物化学特性发生了改变。目前研究显示外周神经损伤引起初级感觉神经原(DRG)的基因表达发生改变，但是对脊髓背角基因调控方面的研究却很少。因此研究外周神经损伤后脊髓背角基因表达的变化对探索神经病理性疼痛的机制非常重要。 www.selleckchem.cn/products/ITF2357(Givinostat).html 目的：研究神经病理性疼痛形成过程中脊髓背角基因表达的改变，从基因的角度探索其发病机理，为进一步的药物治疗提供基础。 方法：二级健康SD大鼠60只，六周龄、雄性、体重160-200克；随机分为四组：组D假手术组(n=30)，仅暴露坐骨神经不结扎：其他三组为CCI模型组：组A组(术后3天组)(n=10)；组B(术后7天组)(n=10)；组C(术后14天组)(n=10)。通过检测热痛敏和机械异常痛敏等指标确认模型建立成功。手术后3天、7天和14天分别取模型和假手术组大鼠脊髓背角(L_(4-6))，立即存入液氮；随后提取mRNA、经纯化、荧光标记、杂交与清洗、芯片扫描、芯片图像的采集与数据分析，检测模型组与假手术组脊髓背角的基因差异表达＞2.0或小于0.5倍，认为有显著性差异；最后经qRT-PCR验证，得到相应上调或下调的
背景 查找更多 高血压的发生、发展与水盐代谢紊乱密切相关，肾小球旁器在肾脏调节水盐代谢过程中占有重要的作用。近年来的研究发现在哺乳动物肾脏，PGE_2在致密斑(macula densa，MD)细胞调节肾素分泌的作用中占有举足轻重的位置。在以往的研究中，不少学者已证实盐摄入的减少和肾脏灌注压的降低都能引起肾脏MD和近皮质的髓袢升枝粗段(conical thick ascending

limb，cTALH)细胞COX-2表达增加。而这两种实验条件都可能导致临近MD的肾小管管腔内NaCl浓度降低，为此有理由认为COX-2可能参与肾血管阻力的调控及MD细胞对肾素分泌的调节。调节COX-2基因转录的信号传导通路、顺式作用元件很多，但是关于这方面的研究多集中在参与炎症反应的细胞和肿瘤细胞，而在MD细胞中的相关研究并不多见。CsA能抑制肾脏COX-2表达，CsA对肾脏的损害是否与这些作用有关值得进一步探讨。本研究目的是探讨低盐刺激对肾脏MD细胞COX-2表达的影响，观察参与COX-2转录调节的MAPK信号传导通路，首次用瞬时转染的方法研究MD细胞AP-1、NFAT、NF-κB的转录活性，以及c-Jun、c-Fos、NFAT蛋白的表达，并探讨CsA对COX-2表达的可能影响机制。 方法 本研究选用SD大鼠和MMDD1细胞株分别进行体内及体外研究。即： 1．SD大鼠随机分为8组，每组8只：1正常盐饮食(NS)；2 NS+CsA(15mg/d／kg)；3 NS+Cele(塞来昔布，40mg/d／kg)；4

NS+CsA+Cele；5低盐饮食(0.03％NaCl，LS)；6 LS+CsA；7 LS+Cele；8 LS+CsA+Cele。7天后手术取动物标本，用RT-PCR方法检测肾脏皮质COX-2、肾素mRNA表达，用免疫印迹方法分析各组皮质COX-2蛋白表达，对组织切片进行COX-2免疫组化染色。 2．低盐(loW salt，LS)培养MMDD1细胞，在有／无CsA作用下，用RT-PCR和免疫印迹方法分析其COX-2的表达。用ELISA方法分析正常盐(normal salt，NS)与LS培养对MMDD1细胞PGE_2分泌的影响。用免疫印迹检测MMDD1细胞p-p38、pErk和pJNK的变化。 3．MMDD1细胞经脂质体转染含NF-κ3、AP-1、NFAT的荧光素酶报告质粒，采用瞬时表达方法检测LS／LS+CsA培养对NF-κB、AP-1、NFAT转录活性的影响，免疫印迹方法检测其对c-Jun、c-Fos、NFAT 或者 c1蛋白表达的影响。 4．各组数据用(?)±SD表示，用SPSS11.5软件进行单因素方差分析，方差具
肝再生增强因子(Augmenter of Liver Regeneration ALR)是一种能保护肝脏和特异性促进肝脏细胞增殖的细胞因子，极具潜质成为治疗肝病的基因工程药物。已有的研究表明，ALR与Na~+，K~+-ATPase在体内、体外都能直接结合。但在肝脏细胞中，ALR促进细胞增殖与Na~+，K~+-ATPase的关系未见有相关报道，本文就此问题展开研究，得到以下结果。 在细胞水平，采用MTT、[~3H]-TdR掺入和流式细胞仪等方法测定重组人ALR蛋白对细胞增殖的影响。ALR能以浓度依赖效应加速来源于肝脏细胞的DNA合成，改变细胞周期，促进细胞增殖，其起效浓度是50μg／L，最佳的作用浓度范围是100μg／L～200μg／L。抗ALR单克隆抗体能有效阻断ALR的上述作用。对本研究中采用的其他来源的细胞，ALR无促进其增殖的作用。对于HepG2细胞，ALR促进其增殖与Na~+，K~+-ATPase的酶活密切相关，部分抑制Na~+，K~+-ATPase活性，能够减弱ALR促细胞增殖作用；若完全抑制Na~+，K~+-ATPase活性，ALR对细胞增殖不产生影响。 酶活力测定和蛋白免疫印迹证实：ALR能以浓度—时间效应的方式提高细胞Na~+，K~+-ATPase的酶活。半最大刺激浓度为42±11μg／L，ALR对HepG2细胞Na~+，K~+-ATPase的影响表现为短时间大量激活，在5min刺激时，细胞Na~+，K~+-ATPase的酶活达到最大。在ALR的刺激下，HepG2细胞Na~+，K~+-ATPase的V_(max)由0.84±0.11μmol.mg~(-1).min~(-1)上升到1.68±0.07μmol.mg~(-1).min~(-1)(p＜0.01)，而K_m则由23.54±0.12mmol／L减小到20.86±0.13mmol／L(p＞0.

01),减少细胞内ROS生成(P<0.01)。结论:原花青素可减轻H2O2引起PC12细胞的内质网应激损伤。
目的探讨湿热应激诱导心肌细胞凋亡的作用机制。方法构建湿热应激小鼠模型,分为湿热应激组(42℃,RH

65%)(H组)和对照组(C组);TUNEL法原位标记凋亡的心肌细胞,EIISA检测AngⅡ的表达水平;体外培养小鼠心肌细胞,分别加入caspase-3抑制剂Z-DEVD-FMK和P38 MAPK抑制剂SB203580共培养24 h,随后加入AngⅡ共培养24 h;Annexin V-FITC凋亡试剂盒检测细胞凋亡率;Western blot检测P38 MAPK及caspase-3的表达水平。结果湿热应激条件导致小鼠心肌细胞凋亡率明显高于常规组,且伴随有大量AngⅡ的生成(P
目的:探讨p38MAPK特异性抑制剂SB203580(SB)对缺血再灌注损伤心肌细胞的保护作用及对凋亡信号通路的影响。方法:选择45只250~300g雄性SD大鼠,通过阻断其左冠状动脉(冠脉)前降支(LAD)30min再灌注180min制备I/R损伤模型,随机分为3组(每组15只):溶剂对照组(Vehicle组)、低剂量SB预处理组(SB-L组)和高剂量SB预处理组(SB-H组)。同时选取15只同周龄SD大鼠仅穿线但不结扎(Sham组)。SB-L组和SB-H组分别于LAD结扎前30min注射50、100μg/kg SB,其余两组注射等体积的0.9%氯化钠溶液。分别在术前(T0)、缺血30min后(T1)、再灌注60min(T2)、120min(T3)及180min后(T4)检测各组血浆肿瘤坏死因子(TNF)-a水平,处死大鼠并通过TTC染色分析缺血程度和梗死程度,将心脏组织包埋并采用免疫组织化学技术切片染色方法检测心肌组织中细胞外信号调节激酶(extracellular http://www.selleckchem.cn/products/Fedratinib-SAR302503-TG101348.html signal-regulated kinase ERK)和C-Jun氨基末端激酶(C-Jun WP1130购买 N-terminal kinase JNK)及凋亡细胞的表达。结果:与Sham组相比,Vehicle组除T0外的I/R其余时间点的TNF-a水平均升高(均P<0.05);SB处理后可减轻TNF-a的升高且改善心肌缺血及梗死程度,ERK表达较Vehicle组增强,JNK表达较Vehicle组减弱(均P<0.05),SB-H组的改善效果优于SB-L组(P
目的探讨MAPK信号通路对交通相关PM2.5引起JurkatT细胞细胞因子变化的调控作用。方法应用Western-blot方法测定了交通相关PM2.5刺激JurkatT细胞不同时间的磷酸化JNK、P38MAPK和激活蛋白-1(AP-1)蛋白表达,ELISA方法测定了细胞上清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白介素-1β(IL-1β)含量。结果

320μg/ml PM2.5刺激Jurkat T细胞24 h后,p-JNK/β-actin灰度比值显著高于生理盐水组,差异有统计学意义,P
目的 2型糖尿病治疗药物二甲双胍、胰岛素及类似物、噻唑烷二酮类及磺脲类等可通过调节丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)和(或)磷脂酰肌醇-3激酶(phosphatidylinositol-3 kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase

B,AKT)信号通路影响肿瘤细胞生长。利拉鲁肽作为一种新型降糖制剂,其安全性也备受关注。文中探讨胰高血糖素样肽-1(glucagon-like 还有 peptide-1,GLP-1)类似物利拉鲁肽(Liraglutide)对人乳腺癌细胞系(michigan cancer foundation-7,MCF-7)细胞增殖的影响及其与p38MAPK信号通路的关系。方法利拉鲁肽以1、10、100、1000 nmol/L作用于MCF-7细胞24、48、72、96h,MTT法测细胞增殖情况,不同浓度利拉鲁肽及联合p38MAPK抑制剂作用于MCF-7细胞96h,流式细胞术测细胞周期,蛋白免疫印迹(Western blot)测定p38MAPK磷酸化程度。结果①与对照组相比,不同浓度利拉鲁肽作用24 h、72 h、96 h及1 nmol/L、10 nmol/L作用48 h均表现为显著抑制作用(P<0.05),其中组间两两比较,差异均具有统计学意义(P0.05)。④Western blot法测定MCF-7细胞通过1 nmol/L利拉鲁肽作用96h后,与对照组比较,利拉鲁肽组p38MAPK磷酸化程度增加。结论利拉鲁肽对乳腺癌MCF-7细胞增殖具有抑制作用,呈时间依赖性;可能涉及p38MAPK信号通路。
目的探讨柚皮素(naringenin,NAR)能否通过调控p38丝裂原激活蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)通路保护心肌细胞H9c2对抗阿霉素(doxorubicin,DOX)引起的毒性反应。方法应用5μmol/L DOX处理心肌细胞H9c2建立DOX心肌毒性损伤模型;CCK-8比色法检测细胞H9c2存活率;Western blot法测定p38MAPK蛋白表达水平;双氯荧光素染色荧光显微镜照相检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平。结果在5μmol/L1 DOX处理H9c2心肌细胞前,应用40μmol/L NAR预处理24 h或应用5μmol/L SB203580预处理60 min均能明显抑制DOX引起的心肌细胞毒性,使细胞H9c2存活率升高,细胞内ROS水平明显降低,并能抑制5μmol/L DOX对磷酸化(p)p38MAPK表达的上调作用。结论柚皮素通过抑制p38MAPK通路保护H9c2心肌细胞对抗DOX引起的细胞毒性。
【目的】探讨雌激素对原代培养的心肌细胞内脑钠肽(BNP)的表达是否有影响以及雌激素影响BNP表达的机制。【方法】视实验目的给予无血清饥饿状态下的心肌细胞不同浓度的雌激素以及相应通路抑制剂处理,以RT-PCR测定细胞内BNP的mRNA水平,以Western-Blotting测定细胞内BNP的蛋白表达量以及相关通路的磷酸化水平,以免疫荧光技术观察雌激素刺激下心肌BNP的亚细胞定位。【结果】雌激素刺激能够显著上调心肌细胞内的BNP mRNA以及蛋白水平(P<0.05)。雌激素处理能够上调心肌Akt以及p38蛋白磷酸化水平(P
目的:探讨电压依赖性钾离子通道Kv1.

选择明显上调的基质金属蛋白酶-12(matrix metalloproteinase-12,MMP-12)和组织蛋白酶(Cathepsin)E基因进行验证分析。经RT-PCR验证,实验组大鼠肺组织30d、60d、90d时,MMP-12 mRNA表达的吸光度值分别为对照组的4.306、5.338、6.713倍,Cathepsin E分别为1.434、2.974、3.889倍;经免疫组织化学验证,实验组大鼠肺组织30d、60d、90d时,MMP-12蛋白表达的平均光密度(OD)值分别为对照组的1.435、1.746、2.069倍,Cathepsin E分别为1.372、1.663、2.103倍;经Western Danusertib Blot验证,实验组大鼠肺组织30d、60d、90d时,MMP-12蛋白表达的OD值分别为对照组的1.214、1.531、1.959倍,Cathepsin E分别为1.262、1.828、1.907倍。与对照组相比,实验组大鼠肺组织MMP-12和Cathepsin E mRNA和蛋白表达量明显上调,且上调的趋势与基因芯片的结果一致,差异有显著性(p
目的:支气管哮喘(简称哮喘)是由多种细胞因子参与的慢性气道炎症性疾病,气道重构和气道炎症是哮喘的特征性病理改变。气道重构是哮喘发病的重要环节,但其发病机制至今尚未完全明确。支气管上皮作为气道内的物理屏障,当其受到各种损伤因素作用后,不仅其屏障及保护作用减退,还会释放TNF-a、RANTES、IL-8等多种细胞因子,诱导气道平滑肌细胞(Airway

smooth muscle cells,ASMCs)跨膜迁移,在哮喘气道重构中发挥重要作用。Toll样受体(Toll-like receptors,TLRs)和磷脂酰肌醇3激酶(Phosphoinositide 3-Kinases,PI3K)参与多种疾病过程,与哮喘密切相关。 我们拟观察气道上皮细胞在基础状态及干预状态下的分泌功能,检测其对哮喘ASMCs跨膜迁移功能的影响,进而更科学、全面的评价哮喘状态下ASMCs的功能变化,通过使用抗TLR4抗体、渥曼青霉素和二硫代氨基吡咯烷(PDTC)干预,以探讨TLR4/PI3K相关信号分子在气道上皮细胞诱导的ASMCs迁移功能中的作用。同时,通过建立哮喘大鼠模型,我们尝试探讨传统中药合剂小青龙汤对哮喘TLR4、p-Akt表达及ASMCs迁移的影响,以寻找哮喘治疗的新药物。 方法:我们将建立大鼠哮喘模型,分离哮喘气道平滑肌细胞进行原代培养,并取肺组织,用图象分析软件测量气道壁厚度,使用免疫组织化学、ELISA、改良Boyden小室等方法,用TNF-α、抗TLR4抗体、渥漫青霉素、PDTC和小青龙汤等作为工具药,探讨哮喘状态下TLR4/PI3K信号相关分子在哮喘气道上皮诱导的气道平滑肌细胞迁移中的作用及其机制。

结果: ⑴与正常对照组相比,各浓度TNF-a组IL-8和RANTES的分泌水平显著增加(P<0.01),平滑肌距基底膜的距离显著减小(P
目的探讨SHR和2K1C两型高血压模型血管重构形式是否相同。检测MAPK家族成员ERK1/2、上游调解激酶MEK1/2以及下游底物CPLA2在两型高血压模型中主动脉和肾脏血管平滑肌细胞中的表达特点,对比研究ERK1/2信号通路在两型高血压模型血管平滑肌细胞增殖/凋亡中的作用及调节途径,进一步明确高血压血管平滑肌细胞变化的分子机制。 方法5周龄的雄性Wistar kyoto大鼠(WKY)36只,随机分为两肾一夹型高血压组(简称2K1C组,18只)和假手术正常血压对照组(简称SHAM组,12只)以及空白对照组(简称CON组,6只)。2K1C组大鼠用直径0.25mm的银夹部分夹闭左肾动脉,关闭切口。SHAM组仅分离出左肾动脉,不做其它处理,作为假手术对照组;空白对照组不做任何处理。术后各组大鼠分别观察至8周龄、16周龄和24周龄。SHR大鼠不做特殊处理,分别于8周龄(简称SHR8组,6只),16周龄(简称SHR16组,6只)和24周龄(简称SHR24组,6只)处死,迅速提取肾脏和胸主动脉,一半置于4%中性多聚甲醛溶液固定,行HE和免疫组化染色。另一半置于-80℃冰箱中冻存用于Western-blotting检测。目镜测微尺测量两型高血压大鼠各周龄主动脉和肾脏细小动脉血管中膜厚度/血管内径比值,免疫组织化学和Western 那个 blot方法对比研究两型高血压大鼠主动脉、肾脏细小动脉平滑肌细胞中p-ERK1/2、p-MEK1/2及CPLA2的表达。 结果1、血压变化:2K1C组大鼠造模一周后血压明显升高(P<0.01),随后稳定保持在较高水平(192.58±12.92mmHg)。SHR从8周龄组开始血压升高,随着周龄增加SHR组血压逐渐升高,18周龄后,SHR组血压明显高于2K1C组(P<0.01或P<0.01),SHR各周龄组肾小球损伤率均明显高于同周龄2K1C组(P<0.05或P<0.05)。5、CPLA2检测情况:SHR和2K1C主动脉、肾脏细小动脉平滑肌细胞CPLA2表达均明显高于同周龄假手术组(P<0.05或P<0.01)。相同周龄SHR和2K1C比较,2K1C8和16周龄组叶间动脉CPLA2表达明显高于相应SHR组(P<0.05),SHR8、16、24周龄组小叶间动脉CPLA2表达明显高于相应2K1C组(P<0.05或P
目的：通过构建动物模型,研究信号分子p38MAPK在心肌缺血再灌注损伤中的作用,同时探讨p38MAPK抑制剂及蒙诺对心肌缺血再灌注损伤的作用及其与p38MAPK信号传导途径的关系。

GDC-0449半抑制浓度 方法：雄性SD大鼠随机分为5组(N组：假手术组；A组：单纯缺血组；B组：缺血再灌注组；C组：蒙诺干预+缺血再灌注组；D组：p38MAPK抑制剂干预+缺血再灌注组)。术前及术中监测心电图变化,C组用蒙诺进行干预,D组用抑制剂进行干预,余用生理盐水干预。造模完成后抽血进行心肌酶谱分析,并处死大鼠取心肌组织用PCR及免疫组化方法检测磷酸化p38MAPK (p-p38MAPK)的基因和蛋白表达。 结果：1.B组、C组及D组的血清CK、CKMB含量值较对照组(N组)均升高,D组和C组的含量值较B组降低,差异均极显著(P<0.01)。2.B组p38MAPK基因的含量较N组升高,D组的含量较B组降低,差异均极显著(P<0.01)。3.A组、B组、C组及D组的p-p38MAPK含量均高于N组,A组和D组含量低于B组,差异均极显著(P
目的：探索异戊烯基黄酮异补骨脂甲素(Isobavachin, IBA)是否具有促小鼠胚胎干(embryonic stem, ES)细胞定向分化为神经细胞的作用,并探索其相应的分化机制。 方法：采用悬滴培养4-/4+法模拟体内胚胎发育状态,形成拟胚体,继而进行贴壁培养。IBA以终浓度为10-7mol/L诱导小鼠ES细胞定向分化为神经细胞,10-7mol/L全反式维甲酸(Retinoic acid, RA)为阳性对照,0.

研究所用标本选取郑州大学第一附属医院、郑州大学第二附属医院及郑州大学附属肿瘤医院病理科2005年1月-2012年6月期间103例手术切除标本存档蜡块。其中胆囊癌42例,选自2005年1月-2007年1月期间。采用免疫组织化学SP方法分别检测42列胆囊癌组织、18列胆囊上皮中重度不典型增生组织、13例胆囊织、15例胆囊腺瘤组织及15例慢性胆囊炎组织中CD147和MMP-9的表达。

2.数据应用SPSS17.0软件进行统计学处理。计数资料的比较采用x2检验,CD147和MMP-9之间的相关性用Spearman等级相关性检验,患者术后的预后情况用Kaplan-Meier法进行生存分析,并用log-rank检验。P0.05)。 2.CD147和MMP-9的阳性表达与胆囊癌的分化程度,临床分期,淋巴结转移明显相关(P
目的 1.以壳聚糖为载体,将BMP-2、α-氰基丙烯酸酯正丁酯、β-甘油磷酸钠等复合成生物胶,研究观察其稳定性。制作Wistar大鼠下颌骨骨缺损动物模型,将复合生物胶植入大鼠下颌骨缺损动物模型中观察修复缺损的效果。 2.研究探讨BMP-2/氰基丙烯酸酯复合生物胶对大鼠下颌骨骨缺损的止血、黏结固定、诱导成骨修复颌骨缺损的可行性,为临床应用提供实验依据。 方法 1.BMP-2/氰基丙烯酸复合生物胶的制备 2.壳聚糖温敏性水凝胶的制备。 3.大鼠下颌骨矩形骨缺损动物模型的制备。 4.将大鼠随机分为实验组、对照组、空白组。实验组植入BMP-2/氰基丙烯酸复合生物胶,对照组植入壳聚糖温敏性水凝胶,空白组不植入任何材料。创口分层缝合。术中观察BMP-2/氰基丙烯酸复合生物胶止血、黏结固定等。 因为 5.下颌骨标本处理及检测：术后3、6、9周每组各处死6只动物。标本大体观察,各组下颌骨标本拍摄软X线片,观察其缺损骨修复情况。组织学观察：不同时间的标本固定后,用EDTA液脱钙4周,HE染色、石蜡包埋做连续切片,厚度为4μm,光学显微镜观察。

6.统计学分析：测量软x线片,配合使用Image Pro Plus6.0软件计算各组大鼠骨缺损面积(A),进行数据分析。用SPSS17.0软件对各组间数据进行处理,采用单因素方差分析(One selleck化学药品液面控制 Way ANOVE)进行统计学分析。 结果 1.以壳聚糖为载体,将BMP-2、α-氰基丙烯酸酯正丁酯、甘油磷酸钠等复合成生物胶为半固态状胶冻状、流动性差、具有弹性的凝胶。 2.壳聚糖温敏性水凝胶为淡黄色清亮液体,流动性差可,在37℃水浴,时长约1min可凝固,呈胶冻状。 3.术中实验组植入的BMP-2/氰基丙烯酸复合生物胶表面形成膜状结构覆盖创伤及周围部位,止血及固定效果良好。 4.试验过程中各组大鼠均未出现排异反应,成骨活跃,术后3、6、9周软X线大体观察可见实验组下颌骨骨缺损处密度大于其他两组,其缺损区域缩小。6、9周后实验组下颌骨骨缺损区域小于对照组。统计学分析植入后3、6、9周时,实验组骨缺损面积均低于对照组及空白对照组(P
肝纤维化是各种肝损害因素长期不能解除，致肌成纤维细胞激活，胶原代谢失衡，肝脏组织发生重构的一种病理过程，是各种慢性肝病进展为肝硬化的必经阶段。多种原因引发的慢性肝病严重威胁着我国人民的健康，寻求有效的抗肝纤维化药物是当前的研究热点。如今，许多研究将肝星状细胞作为抗肝纤维化的中心环节，但尚无特异的治疗方法。中医药抗肝纤维化凭借简、便、廉、验的特点为国内外学者广泛关注。李佃贵教授经多年的临床及实验发现，在肝纤维化形成中“浊毒”起着关键作用，运用化浊解毒法组方进行治疗取得了较好的疗效，但是化浊解毒方的作用机制仍不明确。

目的：本实验采用血清药理学方法，在细胞水平上观察了α-SMAmRNA、p38MAPK及JNK蛋白的表达，进而探讨化浊解毒方治疗大鼠肝纤维化的体外作用机制，为化浊解毒方可能存在的治疗靶点及途径提供了分子生物学基础，从以方测证的角度对慢性肝病浊毒证的发病机制提供现代药理学依据。 www.selleckchem.cn/products/iwr-1-endo.html 方法：健康成年SD大鼠,制备含药血清，随机分为四组：正常对照组、阳性对照组即复方鳖甲软肝片组、化浊解毒方组即等效剂量和二倍剂量。体外培养原代的肝星状细胞分为：正常对照组（A组）、TGF-β1组（B组）、阳性对照组（C组）、化浊解毒方含药血清等效剂量组(D1组)和二倍剂量组（D2组），除正常对照外各组均加TGF-β1干预，各组加入相应血清，培养24、48、72h后，运用MTT法检测肝星状细胞的增殖；培养48h后，运用RT-PCR法检测肝星状细胞中α-SMA mRNA的表达，Western-blot法检测p-p38、p-JNK蛋白的表达。 结果： 1MTT法检测结果显示：外源性刺激TGF-β1干预的HSC在各组药物血清处理24小时后，与A组比较，B组TGF-β1可明显刺激HSC的增殖，差异有统计学意义（P<0.05）；与B组比较，C、D1、D2组均可明显抑制HSC的增殖，差异有统计学意义（P<0.05）；与C组比较，D2组可明显抑制HSC的增殖，差异有统计学意义（P0.05）；D2组较D1组可显著抑制HSC的增殖，差异有统计学意义（P<0.05）。48小时与72小时后，与A组比较，B组可明显刺激HSC的增殖，差异有统计学意义（均P<0.05）；与B组比较，C、D1、D2组可明显抑制HSC的增殖，差异有统计学意义（均P<0.05）；与C组相比，D1、D2组可抑制HSC的增殖，差异有统计学意义（均P<0.05），D2组较D1组可显著抑制HSC的增殖，差异有统计学意义（P<0.05）；与C组相比，D2组可显著抑制α-SMAmRNA的表达，差异有统计学意义（P0.05）；D2组较D1组可明显抑制α-SMA mRNA的表达，差异有统计学意义（P<0.05）；与B组比较，C、D1、D2组p-p38蛋白表达显著降低，差异有统计学意义（P0.05），D2组p-p38蛋白表达降低，差异有统计学意义（P<0.05）；与D1组比较，D2组p-p38蛋白表达降低，差异有统计学意义（P<0.05）；与B组比较，C、D1、D2组p-JNK蛋白的表达显著降低，差异有统计学意义（P<0.05）。与C组比较，D1、D2组p-JNK蛋白的表达量均降低，差异有统计学意义（均P<0.

1中TIP30免疫组织化学法检测。2.3TIP30和EGFR蛋白表达与HER-2过表达晚期乳腺癌患者临床病理特征及预后之间的关系 收集53例HER-2过表达晚期乳腺癌病人的临床资料,按照患者的年龄(≥50、
蛋白酪氨酸激酶(Protein tyrosine kinases, PTK)是细胞信号转导过程中极为重要的物质,具有多种细胞功能。蛋白酪氨酸激酶的过度表达激活其下游信号通路,从而导致细胞转化、增殖、对抗细胞凋亡、促进细胞生存,最终导致肿瘤的形成。以酪氨酸激酶ABL为靶点的分子设计已经促使了Imatinib、Dasatinib等药物的成功上市,但临床耐药性一直存在。研究表明,PI3K/AKT/mTOR信号通路的补偿作用是导致Imatinib耐药的机制之一。因此,以ABL和P13K为双靶点的分子设计已成为当今药物研发的热点。 本论文以SVM (Support Vector Machine)筛选模型,以ABL和P13K为双靶点,对PubChem和MDDR化合物分子库进行了虚拟筛选,初步筛选出来的苗头化合物再经过“Lipinski’s

rule of mTOR抑制剂 5″、分子对接和合成可行性等一系列评价,最终设计合成了26个包含(S)-3-氨基吡咯烷母核的、具有潜在抗肿瘤活性的化合物。 采用MTT方法,以人肝癌细胞HepG-2、乳腺癌细胞MCF-7和白血病细胞K562为测试细胞株,对所合成的化合物进行了体外抗肿瘤活性测试。结果表明,该系列化合物对三组细胞株均有不同程度的抑制作用,其中对K562细胞有一定程度的选择性(5k-5m的IC50值分别是3.6μM,3.3μM和4.3μM)。激酶筛选实验结果表明,化合物5k-5m对ABL、PI3K(alpha)显示出一定的抑制作用,而且能够阻滞PI3K/AKT信号通路；细胞凋亡实验表明,该系列化合物较好的细胞活性的确是源于抑制了ABL和P13K蛋白激酶。

LY3009104化学结构 虽然本文设计的化合物针对单一靶点的抑制活性都较低,但协同作用使得它们表现出良好的细胞活性,而且以(S)-3-氨基吡咯烷为母核的ABL和P13K双重抑制剂尚未见报到。以此为先导化合物,有望设计出结构更加新颖、活性更好、选择性更强的的ABL和P13K双重抑制,克服Imatinib临床耐药性。
目的 探讨LY294002增强胃癌对5-氟尿嘧啶(5-FU)敏感性的可能机制。 方法 (1)不同浓度5-FU(0、1、5、10μM)联合25μM LY294002对胃癌细胞BGC823、MGC803进行处理,分别应用流式细胞术、体外细胞侵袭实验、划痕实验检测细胞凋亡、侵袭、迁移能力的变化。 (2)不同浓度LY294002(0、1、10、20μM)联合10μM 5-FU对BGC823、MGC803细胞进行处理,分别应用流式细胞术、体外细胞侵袭实验、划痕实验检测细胞凋亡、侵袭、迁移能力的变化。

(3)两种胃癌细胞分别在无任何处理、25μM LY294002、10μM 5-FU、25μMLY294002联合10μM 5-FU条件下培养24小时。采用免疫印迹法检测AKT(Ser473)磷酸化(p-AKT-Ser473)、FKHR 时间 (Ser24)及FKHRL1 (Thr253)磷酸化(p-FKHR-Ser24、p-FKHRL1-Thr253)、Fas配体(FasL)、caspase-8/FLICE抑制蛋白(c-FLIP)的表达,caspase-8及caspase-3的活化,Bid的分裂(t-Bid的形成)情况,以及基质金属蛋白酶2(MMP-2)、MM-P9、基质金属蛋白酶抑制剂1(TIMP-1)、TIMP-2、膜型基质金属蛋白酶-1(MT1-MMP)、MT2-MMP表达情况；采用电泳迁移位移试验(EMSA)法检测核转录因子κB(NFKB)/DNA结合活性；用免疫沉淀法检测Fas相关死亡结构域蛋白(FADD)的募集；采用凝胶酶谱法检测MMP-2、MMP-9的活性。 (4)使用了FasL小分子干扰RNA(siRNA)抑制FasL蛋白表达。免疫印迹法检测FasL siRNA对FasL蛋白表达的抑制情况。流式细胞仪检测使用FasL siRNA后对5-FU、LY294002、5-FU联合LY294002诱导细胞凋亡的影响。 (5)采用培养细胞皮下接种法建立裸鼠异位移植瘤模型,观察无任何处理、25mg/kg LY294002、40mg/kg 5-FU、25mg/kg LY294002联合40mg/kg 5-FU对肿瘤生长的抑制。TUNEL法检测不同处理下肿瘤细胞的凋亡情况。用免疫组化法检测p-AKT-Ser473、p-FKHR-Ser24、p-FKHRL1-Thr253、FasL活化的caspase-8(active-caspase-8)、短链c-FLIP(c-FLIPs)、t-Bid、active-caspase-3表达。 (6)建立裸鼠胃癌原位移植模型,观察无任何处理、25mg/kg LY294002、40mg/kg 5-FU.

9 nmol/L, and is highly potent against ALK bearing the gatekeeper mutation L1196 M with an IC_(50) of 1.56 nmol/L. In the clinic, alectinib is highly efficacious in treatment of ALK-positive non-small cell lung cancer(NSCLC), and retains potency to combat crizotinib-resistant ALK mutations L1196 M, F1174 L, R1275 Q and C1156 Y.
非小细胞肺癌是危害人类生命最常见的恶性肿瘤之一,棘皮动物微管蛋白样4-间变性淋巴瘤激酶(echinoderm ONX-0914化学结构 microtubule-associated protein like 4-anaplastic lymphoma kinase,EML4-ALK)融合基因是新发现的非小细胞肺癌驱动基因,是非小细胞肺癌治疗的新靶点。EML4-ALK融合基因在非小细胞肺癌患者中的发生率约为4%~5%,并且在不伴有表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)突变或KRas突变的腺癌患者中的表达率约为42.80%。目前临床上用于治疗ALK阳性肺癌的药物为克唑替尼,同其他酪胺酸激酶抑制剂(tyrosine

kinase inhibitors,TKIs)相似,使用一段时间后也出现耐药。本文旨在介绍EML4-ALK融合基因结构特点、检测方法、ALK靶向药物的耐药机制以及逆转耐药的策略。
近年来,肺癌研究进展很大。在中国,有关肺癌的研究论文发表数量逐年增加,已成为仅次于美国的第二大肺癌研究大国。与结直肠癌和乳腺癌等其他肿瘤相比,肺癌的精准医疗开展得相对较早,发展也最快。1肺癌筛查与精准医学目前已有共识,筛查对于”捕捉”肺癌早期患者有效。肺癌的
目的分析腹腔炎性肌纤维母细胞瘤(IMT)的临床病理特点、诊疗方法及预后。方法回顾性分析经手术治疗的13例腹腔炎性肌纤维母细胞瘤患者的临床病理资料。结果本组患者女8例、男5例,中位年龄24岁(15~57岁)。临床表现为腹部肿物、腹部不适隐痛、发热、体重减轻等非特异性症状,影像学检查无明显特异性。SMA、MSA、Vim免疫组织化学检查均为阳性。本组患者均接受手术治疗,术后随访31~76月(中位44月),1例术后13月复发,再次手术后无复发,其余12例无复发和转移。结论腹腔IMT缺乏典型临床及影像学表现,明确诊断依靠病理检查,SMA、MSA、Vim多为阳性,有助于IMT的诊断,手术切除是首选治疗方法,预后良好。
2014年7月,美国癌症基因研究组(The

SP600125分子重量 CancerGenome Atlas,TCGA)在《Nature》上发布了230例可切除肺腺癌的包含DNA、mRNA、micro RNA水平的综合基因谱分析结果。通过对mRNA和DNA高通量测序结果及序列比对分析,发现约4%(10/230)肺腺癌因MET基因DNA水平第14外显子剪接区域(splice-sites)的突变导致MET第14外显子在mRNA水平出
Objective: This study aims to establish a method for highly parallel multiplexed detection of genetic mutations in Chinese lung cancer samples through Agena i PLEX chemistry and matrix-assisted laser desorption ionization time-of-flight analysis on Mass ARRAY mass spectrometry platform.Methods: We reviewed the related literature and data on lung cancer

treatments. We also identified 99 mutation hot spots in 13 target genes closely related to the pathogenesis, drug resistance, and metastasis of lung cancer. A total of 297 primers, composed of99 paired forward and reverse amplification primers and 99 matched extension primers, were designed using Assay Design software. The detection method was established by analyzing eight cell lines and six lung INCB024360 cancer specimens. The proposed method was then validated through comparisons by using a Lung Carta~(TM) kit. The sensitivity and specificity of the proposed method were evaluated by directly sequencing EGFR and KRAS genes in 100 lung cancer cases.Results: The proposed method was able to detect multiplex genetic mutations in lung cancer cell lines. This finding was consistent with the observations on previously reported mutations. The proposed method can also detect such mutations in clinical lung cancer specimens. This result was consistent with the observations with Lung Carta~(TM) kit. However, an FGFR2 mutation was detected only through the proposed method. The measured sensitivity and specificity were 100% and 96.

1±356.0)IU/L和(2 709.9±423.9)IU/L,SB216763干预组与模型组相比,Caspase-3活性降低,TUNEL方法检测肝细胞凋亡减少,并且Cleaved Caspase-3的蛋白表达降低。结论在D-GalN/LPS诱导的小鼠急性肝衰竭中,抑制GSK-3β活性可能通过抑制肝细胞凋亡而改善肝损伤。因此,对信号分子GSK-3β活性进行干预有可能为急性肝衰竭的治疗提供一个新的靶点。
目的探讨丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein

kinase,MAPK)通路在GSK-3β对于巨噬细胞活化过程中可能的作用。方法生长状态良好的RAW264.7细胞分为3组:对照组、脂多糖(LPS)组及GSK-3抑制剂SB216763干预组。在两个时间点(12 h、24 h),采用Western blotting法检测GSK-3β、p-GSK-3βser9、MAPK(c-jun氨基端激酶、细胞外信号调节激酶、p-38)表达情况,Elisa法检测细胞上清中TNF-α的变化,RT-PCR检测细胞中5-LO mRNA变化,电镜下观察RAW264.7细胞形态变化。结果 LPS组与对照组比较,p-GSK-3βser9/GSK-3β比值降低,活性升高;MAPK KU-60019供应商 3条信号通路:磷酸化的c-jun氨基端激酶(JNK)、细胞外信号调节激酶(ERK)、p38表达增多;TNF-α和5-LO mRNA表达增多(P

目的探讨氯胺酮抗抑郁作用的潜在分子机制,以及对抑郁大鼠缰核β钙/钙调素依赖蛋白激酶Ⅱ(βcalcium/calmolulin-dependent protein kinase typeⅡ,βCaMKⅡ)和谷氨酸受体1(glutamic acid receptor 1,GluR1)分子表达的影响。方法成年Wistar大鼠11只(正常组),Wistar-Kyoto(WKY)大鼠22只随机分为抑郁组和氯胺酮(Ket组)。Ket组给予氯胺酮10mg/kg腹腔注射,抑郁组和正常组则腹腔注射等容量的生理盐水,连续3天。第4天行糖水偏好试验,测定大鼠的糖水偏好程度。第5天行开场试验及强迫游泳试验,测定大鼠的行为。行为学试验结束后0.5h取大鼠脑组织,Western 还有 blot检测大鼠缰核βCaMKⅡ和GluR1的表达。结果抑郁组与正常组大鼠相比,糖水百分比降低,站立次数减少,强迫游泳不动时间显著增加,缰核βCaMKⅡ的表达水平升高(P<0.05);Ket组与抑郁组大鼠相比,糖水百分比升高,站立次数增加,强迫游泳不动时间缩短,缰核βCaMKⅡ的表达水平降低(P<0.05),GluR1的表达无变化。结论氯胺酮具有快速的抗抑郁作用,其机制可能与缰核βCaMKⅡ的表达下调有关。
弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)的发病机制虽未完全阐明,但研究显示与信号通路表达异常有关,如经典Wnt通路。在DLBCL发病机制的研究中观察到经典Wnt通路的重要下游因子β-catenin的表达和核内定位。同时证据显示经典Wnt通路不仅与DLBCL发病机制有关,还和DLBCL临床分期密切相关,经典Wnt通路通路有可能成为治疗DLBCL潜在的有用靶点。
Wnt信号通路,是软骨分化中重要而复杂的调节通路,是软骨细胞增殖分化及软骨功能维持的重要调节者之一。在过去的20年中,Wnt信号通路在软骨分化中的作用已被广泛阐明。Wnt蛋白作为Wnt通路的重要组成部分,贯穿软骨分化的各个环节,并与其他通路(NOTCH、Ihh等)有着密切联系,共同参与软骨分化的各个阶段。本综述将简要地介绍Wnt信号通路的机制及其作用,并集中近几年国内外的研究成果,更全面地阐明Wnt信号网络,为相关科研和临床应用提供最新的理论依据。
目的:评价脊髓糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)信号通路在大鼠慢性吗啡耐受形成中的作用。方法:健康雄性SD大鼠,体重200~250

Roscovitine临床试验 g,经枕骨大孔行鞘内置管。取鞘内置管成功的40只大鼠,采用随机数字表法,将大鼠随机分为5组(n=8):生理盐水组(C组)、慢性吗啡耐受组(M组)、吗啡+GSK-3β抑制剂(SB216763)组(MS组)、GSK-3β抑制剂组(S组)和二甲基亚砜组(D组)。皮下注射吗啡10 mg/kg,每天2次,连续5 d,建立吗啡耐受模型。在第6天皮下注射吗啡前30 min MS组、S组和DMSO组分别鞘内注射SB216763(溶于10μl DMSO中)14 pmol、SB216763(溶于10μl DMSO中)14 pmol和DMSO 10μl。于皮下注射吗啡前1 d(基础值)、皮下注射吗啡后30 min第1、2、3、4和5天,第6天鞘内注射后1 h,测定大鼠甩尾潜伏期,以计算最大抗伤害效应百分比(MPAE)。鞘内注射4 h后取8只大鼠,处死后取脊髓组织,采用Western blot法测定p-GSK-3β的表达水平。结果:与第1天比较,M组和MS组第4、5天MPAE明显降低(P<0.05);与C组比较,M组和MS组MPAE升高,M组脊髓GSK-3β表达没有变化,MS组脊髓p-GSK-3β表达上调(P<0.05),DMSO组和S组上述指标差异无统计学意义;与M组比较,MS组MPAE升高,脊髓p-GSK-3β表达上调(P<0.

05）。 结论： 1、克唑替尼能抑制EML4-ALK阳性肺腺癌细胞株H2228细胞的增殖，同时能诱导H2228细胞的凋亡，呈时间和剂量依赖性。 2、低氧模拟剂氯化钴能下调HIF-1α的mRNA表达，与以往延迟缺氧状态下HIF-1α表达变化一致。 3、克唑替尼能上调H2228细胞HIF-1α、Akt的mRNA表达，下调VEGF的表达。在低氧状态下克唑替尼上调HIF-1αmRNA的作用更明显（P＜0.05）。 4、HIF-1αmRNA的上调在克唑替尼诱导H2228细胞株凋亡过程中发挥重要作用，是关健转录活性分子。
目的：探讨以磷脂酰肌醇3-激酶相关激酶蛋白家族成员雷帕霉素靶蛋白（Mammalian target of rapamycin，mTOR）为中心的信号通路，在克唑替尼（Crizotinib）诱导的EML4-ALK （Echinoderm microtubule-associatedprotein-like4，棘皮动物微管结合蛋白4，Anaplastic lymphoma kinase，间变性淋巴瘤激酶)融合基因阳性的非小细胞肺癌细胞株H2228凋亡中的作用。方法：根据不同的实验目的处理H2228细胞后，采用荧光定量PCR检测基因状态，噻唑蓝(MTT)法检测细胞抑制率；采用流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期；采用Western

blotting检测细胞mTOR信号通路中的关键蛋白表达及活化水平。

结果：crizotinib对H2228细胞有促凋亡作用，且呈时间和剂量依赖性，且能使H2228细胞阻滞在G1期。在使用crizotinib处理的凋亡细胞株中发现mTOR活化水平降低，mTOR的上下游关键蛋白活化水平都呈下降趋势，肺癌细胞株H2228中的特殊表达的融合蛋白EML4-ALK 可能 V3表达量未受影响，但其活化形式p-ALK明显受到抑制。结论：初步证实mTOR信号通路在crizotinib诱导含有EML4-ALK融合基因的肺癌细胞H2228凋亡中有一定关系，为crizotinib的作用机制提供了一个依据。
背景：在世界范围内，肺癌位居所有癌症中发病率和死亡率的首位。其中大多数为非小细胞肺癌（non-small 已经 cell lung cancer，NSCLC）。目前，分子靶向治疗是NSCLC的治疗中最有发展前景的部分。近年来，非小细胞肺癌新的分子生物靶点例如棘皮动物微管相关类蛋白4与间变性淋巴瘤激酶融合基因（echinodermmicrotubule-associated protein-like4，EML4；anaplastic lymphoma kinase，ALK；EML4-ALK fusion gene）越来越受到关注。 目的：本研究的目的是通过文献复习对EML4-ALK融合基因的基本结构、临床病理学特征、检测方法、ALK抑制剂及其在非小细胞肺癌治疗中的意义作一综述。方法：1.应用检索CNKI、万方全文数据库、Pubmed、Springerlink数据库检索系统，以“非小细胞肺癌；EML4-ALK融合基因；分子靶向治疗”为关键词，分别或联合检索2007-01—2012-12的相关文献150篇。2.纳入标准：1)基本结构；2）临床病理学特征；3）检测方法；4)ALK抑制剂；5)分子靶向治疗。根据纳入标准，精选50篇文献，最后纳入分析41篇文献。

www.selleckchem.cn/products/icg-001.html 结果：EML4-ALK融合基因是NSCLC新一类的亚型。EML4-ALK融合基因的形成是由2号染色体短臂插入引起的，它至少有11种亚型。NSCLC中EML4-ALK融合基因阳性更常见年轻男性患者，轻度吸烟∕不吸烟，腺癌，K-ras、EGFR野生型。常用来检测EML4-ALK的方法有IHC、RT-PCR、FISH和RACE-偶联PCR测序，各方法有其优缺点，有一定的互补性。ALK抑制剂PF-02341066(Crizotinib)治疗EML4-ALK阳性的NSCLC能取得较佳的疗效，有望成为晚期NSCLC患者的标准治疗。 结论：EML4-ALK融合基因是非小细胞肺癌中关键而又独立的分子靶点，对其结构、临床病理联系、ALK抑制剂及其耐药机制的的进一步研究，可以为非小细胞肺癌患者提供更多的治疗选择。
目的：了解ALK抑制剂克唑替尼(Crizotinib)及TAE684(NVP-TAE684)对EML4-ALK融合基因阳性人肺癌细胞株H2228增殖和凋亡的影响,为临床用药提供依据。 材料和方法：从广东省人民医院肺癌研究所获得EML4-ALK融合基因阳性人非小细胞肺癌细胞株H2228并按常规培养至对数生长期。查阅文献,了解克唑替尼及TAE684在既往实验中的半抑制浓度(half maximal inhibitory concentration, IC50)值,设置MTT法中药物的浓度梯度,采用MTT法分别分析克唑替尼和TAE684处理72h后H2228细胞的生长增殖情况。采用流式细胞技术分析克唑替尼处理24、48、72h后H2228细胞凋亡的情况。采用SPSS19.0统计软件进行单因素ANOVA分析,计算细胞生长抑制率,p0.05)。TAE684不能抑制H2228细胞的增殖。 结论：克唑替尼对EML4-ALK阳性细胞株H2228有明显抑制作用,且抑制作用随药物浓度增加而增加。克唑替尼对H2228细胞的半抑制浓度IC50为334.