利用基因工程技术构建ILK siRNA,PCR鉴定阳性重组子后,测序验证。2.大鼠肾小管上皮细胞株(NRK-52E)分设正常组及CsA诱导组,后者分别采用CsA不同浓度和时间处理,观察细胞增殖抑制情况。3.将NRK52E细胞培养分为5组:空白对照组(A组):仅加入含10%胎牛血清的H-DMEM培养基;CsA处理组(B组):细胞培养液加CsA(lmg/L);干预1组(C组):加TGF-pi阻断剂(SB…
研究背景:甘露聚糖结合凝集素(mannan-binding lectin,MBL)系肝细胞分泌的血浆蛋白,是天然免疫系统中的关键分子。本实验室曾报道MBL影响树突状细胞的分化成熟,并以浓度依赖方式调节 Raji细胞增殖,提示MBL不仅发挥天然免疫作用,而且具有一定的免疫调节功能。但目前尚未见MBL影响单核细胞(monocyte,Mo)增殖的报道。本实验以人Mo为研究对象,探索MBL对其增殖的影响及其作用机制。目的:观察MBL对人Mo增殖、凋亡及细胞周期的影响,并初步探讨其分子机制。方法:分离人外周血单个核细胞(peripheral

blood mononuclear cell,PBMC),磁式…
目的:探讨脐带间充质干细胞(UC-MSCs)上调系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血调节性T细胞(Treg)的作用机制。方法:20例SLE患者及正常人外周血单个核细胞(PBMC)分别与UC-MSCs以1:1,10:1及50:1比例共培养72 以及 h,流式细胞术检测PBMC中CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞比例。分别以SLE患者及正常人PBMC及血清刺激UC-MSCs,实时荧光定量聚合酶链反应(real-time PCR)检测UC-MSCs TGF-β1 mRNA表达水平,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测共培养上清TGF-β1表达水平。并构建
目的:研究生长因子TGF-β1、Activin A及TGF-β/Activin信号通路特异性受体抑制剂SB431542单独以及联合应用对牙髓细胞表达Nanog的影响,探讨TGF-β/Activin信号通路对Nanog的调控作用。方法:采用不同浓度的TGF-β1、Activin A和SB431542刺激第3~5代人牙髓细胞,检测刺激因子浓度对Nanog表达的影响;将TGF-β1、Activin A刺激细胞0、3、6、12、24、48、72h,检测不同时间Nanog表达的变化量;选取合适浓度的TGF-β1、Activin A和SB431542分别及联合处理牙髓细胞,再以SB431542处理过表达N…
【目的】通过调控骨形态发生蛋白-7(BMP-7)表达观察其对石英致矽肺纤维化的作用及机制;探讨外源性小分子通路抑制剂对石英致矽肺纤维化进程的影响。【材料和方法】使用不同浓度石英染小鼠巨噬细胞上清液刺激大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(RLE-6TN),建立剂量梯度模型,倒置相差显微镜观察细胞形态学变化及迁移能力的改变。应用慢病毒转染技术建立BMP-7过表达及沉默稳转的RLE-6TN细胞系观察其对石英致矽肺纤维化的影响。抑制剂研究分别给予TGF-β抑制剂SB-431542或BMP抑制剂LDN-193189进行预处理。通过检测羟脯氨酸(Hyp)含量反应纤维化程度,应用实时荧光定量PCR及Western

selleck screening library Blo…
【目的】研究邻苯二甲酸二丁酯(di-n-butyl phthalate,DBP)对离体大鼠睾丸支持细胞vimentin骨架系统的破坏作用并探索对PPARα(peroxisome proliferation-activated receptorα)及下游MAPK、Smad2/3信号途径在DBP导致vimentin骨架系统损伤中的作用机制。【材料和方法】体外原代培养大鼠睾丸支持细胞,用100μM DBP处理细胞。用免疫组化和激光共聚焦显微镜观察vimentin骨架系统在支持细胞中的表达和分布情况,用Western blotting检测PPARα、vimentin、磷酸化vimentin、MAPK、…
目的:研究转化生长因子-β1(transformed growth factor-β1,TGF-β1)对人成熟树突状细胞(mature dendritic cells,m DCs)细胞骨架、运动能力和免疫功能的影响及潜在分子机制,为深入了解肿瘤免疫逃逸机制和提高DCs抗肿瘤疫苗疗效提供理论依据。方法 :利用免疫磁珠从新鲜人外周血中分选出CD14~+单核细胞,在体外经肿瘤坏死因子-α、重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子、白细胞介素-4诱导培养7天后分化为m

DCs,用5 ng/ml浓度的TGF-β1分别处理m DCs 15,30,60,120,360,720,1440 min,观察F-actin,…
目的:树突状细胞(dendritic cells,DCs)是目前发现的人体内功能最强大的抗原递呈细胞,肿瘤微环境中的抑制性细胞因子能够影响DCs的免疫功能和微观流变学特性,转化生长因子-β_1(transformed growth factor-β_1,TGF-β_1)是肿瘤微环境中重要的抑制性细胞因子。研究TGF-β_1对人成熟树突状细胞(mature 这个 dendritic cells,mDCs)骨架蛋白的影响及潜在的分子机制,为深入研究肿瘤的免疫逃逸机制和提高基于DCs的抗肿瘤免疫治疗
目的采用海人酸致痫SD大鼠模型,通过腹腔注射ALK5抑制剂(SB431542)干扰ALK5受体,观察癫痫大鼠海马组织中ALK1及其下游分子p-Smad1的mRNA及其蛋白的表达,研究癫痫大鼠ALK5对ALK1受体的作用,探讨可能的干预癫痫发作的新靶点。方法红藻氨酸(kainic acid,KA)侧脑室注入SD大鼠
背景和目的脑卒中后神经干细胞移植治疗能够有效的促进神经功能的恢复,但是如果高效均一性神经干细胞仍不明确。随着成纤维细胞成功诱导为多潜能干细胞,白体移植得以实现并且避免了许多伦理问题。诱导型多潜能干细胞在形态、功能和诱导过程上都与胚胎干细胞非常类似,而在诱导效率和诱导可控性上要比胚胎干细胞差。既往研究发现,骨发生蛋白(BMP)加LlF能够
目的脑卒中后形成的胶质瘢痕是阻碍轴突再生的主要因素之一,本课题拟研究RGMa在大脑中动脉阻塞/再灌注模型(MCAO/再灌注)大鼠胶质瘢痕形成过程中发挥的作用及机制。材料与方法 1、成年雄性SD大鼠随机分成假手术2d、7d、14d组,MCAO/再灌注模型2d、7d、14d组、MCAO/再灌注+RGMa特异性拮抗多肽6FNⅢ7d、14d组、
Introduction:Smoke-inhalation injury causes a destruction ofthe ciliated epithelium that lines the tracheobronchial tree.

在信号转导通路水平探讨罗格列酮对丝裂原活化蛋白激酶(Mitogen-activated protein kinases, MAPKs)三条信号通路(p38MAPK、 JNK和ERK)激活的影响,用Western的方法检测LPS和罗格列酮作用前后三条通路的磷酸化情况,分析罗格列酮发挥抑制作用可能的途径。 结果： 1.LPS激活BV-2细胞后, TNF-a和iNOS的基因表达显著上调,炎症反应的标志性蛋白iNOS表达增多；应用罗格列酮后,TNF-a和iNOS的基因表达明显下降,TNF-a和iNOS蛋白表达受到抑制,以上结果表明罗格列酮可以在转录水平和蛋白水平抑制炎症介质的产生。

2. NF-κB是机体调控免疫炎症反应的重要转录因子。Western检测发现：LPS激活BV-2细胞后,IKBα表达降低,罗格列酮可以部分恢复IKBα的表达：LPS可以诱导磷酸化NF-κB p65的水平显著升高,罗格列酮作用后可以抑制其升高。另外,NF-κB激活后其p65亚基需进入细胞核与相应DNA特定序列结合而启动炎症介质的表达,免疫荧光染色显示提示罗格列酮可抑制NF-κB的核移位,以上实验结果提示罗格列酮减少炎症介质的释放与抑制NF-κB通路的激活关系密切。 这个 3. MAPKs是与炎症反应密切相关的信号通路,LPS激活BV-2细胞后,p38MAPK、 JNK和ERK通路均发生激活,罗格列酮抑制了p38MAPK和JNK通路的激活,而对ERK的激活无显著影响,说明在信号转导水平,罗格列酮可能通过抑制p38MAPK和JNK通路而发挥抗炎作用。 结论： 罗格列酮可以抑制活化BV-2细胞炎症介质的基因转录,并抑制炎症反应蛋白的表达；在转录因子水平罗格列酮可通过抑制NF-κB活化与核移位而发挥作用；在信号转导水平罗格列酮可通过抑制p38MAPK和JNK的激活而发挥抑制BV-2细胞活化的作用。 总结 本研究利用体外PD炎症模型,系统研究了PPARγ激动剂罗格列酮对小胶质细胞活化的抑制作用及对多巴胺能神经元的保护作用,首次阐明罗格列酮通过抑制NF-κB、

Romidepsin订单 p38MAPK和JNK通路的激活而发挥抗炎作用。另外,本研究首次利用小胶质细胞系BV-2细胞的条件培养液在MN9D细胞上模拟了炎症损伤,直观显示了炎症介质对多巴胺能神经元造成的氧化应激和线粒体功能障碍,两者是导致多巴胺能神经元退变凋亡的主要机制,并证实罗格列酮抑制炎性介质释放与保护多巴胺能神经元的高度相关。本研究深化了罗格列酮抑制小胶质细胞活化药理机制的认识,为TZDs类药物治疗PD提供了新的实验依据。
研究背景： 神经系统疾病是全球首位致残疾病和第3位主要致死因素。如脑中风会引起大脑损伤区域神经元和神经元连接广泛缺失,导致长期的神经功能障碍。目前药物干预主要局限在急性期的脑损伤保护,如重组组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)仅适合于急性期恢复脑供血等。尚不能对中风引起的长期神经功能障碍起到有效的治疗和恢复作用。因此,寻找能有效恢复损伤后亚急性其和慢性期神经功能的治疗方法,药物或保健食品意义都非常重大 在我国,海参一向被视为药食两用的海产佳品,其中尤以剌参为佳。刺参广泛应用于年老体弱者,记忆力减退着,中风患者术后以及神经退行性疾病患者的保健和恢复。可见刺参对预防神经衰退,增强和恢复神经组织功能发挥积极作用,且食用刺参没有副作用。所以,深入研究刺参活性成分的药理作用对发挥刺参在维护人民身体健康方面具有重要的意义,同时也为刺参产业的发展起积极的作用。本研究从刺参体壁中分离获得具有药理活性的刺参多糖,探讨其对神经细胞的作用方式及其作用机制。 实验方法： 1.刺参多糖的分离纯化、活性筛选和理化性质鉴定 实验采用为蛋白酶/胰蛋白酶双酶解法,乙醇沉淀获得粗多糖,大孔吸附树脂脱色,用DEAE-sepharose阴离子交换柱分离,获得A、B、C、D四个多糖组分,用Sephacryl S-200凝胶进一步春华并脱盐。将分离获得的组分分别用神经干细胞球迁移实验(HS-3活性最好)和星形胶质细胞活化进行活性筛选(HS-4活性最好)。选取有活性的单一糖组分进行理化性质鉴定，采用HPLC法做纯度检查，自动旋光仪检测比旋光度，苯酚硫酸法检测总糖含量，硫酸咔唑法检测糖醛酸含量,明胶BaCl2法检测硫酸根含量, 很少 Bradford法检测蛋白质含量,凝胶色谱法检测多糖分子量。 2、HS-3促进神经干细胞球迁移作用研究。 本实验从孕14.5天胎鼠大脑皮层分离神经干细胞,培养在含EGF、FGF-2的培养基中。相差显微镜测量HS-3在基础培养基中(无EGF/FGF-2)促进神经干细胞球迁移的距离,用Hoechst/PI双染法检测细胞存活情况,用BrdU labeling法检测细胞的增殖状态,免疫荧光法观察神经干细胞在含HS-3的培养基中的分化状态,用信号通路抑制剂(P13K抑制剂LY294002,

ERK抑制剂PD98059,BMP抑制剂noggin)、Western blotting和RT-PCR技术检测HS-3诱导细胞粘附和迁移可能的作用机制。 3、HS-4与FGF-2协同诱导星形胶质细胞活化作用研究 星形胶质细胞活化主要包括三个方面：1)细胞形态变化；2)细胞由静息期进入细胞分裂期,细胞增殖；3)细胞发生迁移。本实验从新生大鼠大脑中经胰酶消化分离,机械振荡法纯化获得星形胶质细胞。首先通过MTT法检测HS-4对细胞的毒性作用以确定后续试验的使用浓度和作用时间。用伊红染色和免疫荧光染色法观察HS/FGF-2诱导细胞的形态变化,western blotting检测星形胶质细胞特征蛋白GFAP的表达情况。BrdU插入法检测细胞增叭,流式细胞术检测细胞周期变化情况,Western blotting检测细胞周期调控蛋白ICyc D1农达水平Transwell法检测HS-4/FGF-2促进细胞迁移作用。用细胞通路各抑制剂(Rho通路抑制剂Y27632, PI3K抑制剂LY294002, ERK抑制剂PD98059,P38抑制剂SB203580, JNK抑制剂SP600125)、免疫荧光和Western blotting技术检测HS-4/FGF-2诱导细胞形态变化可能的作用机制。 实验结果： l、刺参多糖的分离纯化与理化性质鉴定 本实验通过离子交换色谱分离获得四个多糖组分,经细胞活性检测确定HS-3具有促进神经干细胞球迁移和分化作用：HS-4对诱导星形胶质细胞活化的作用效果最为显著经鉴定,HS-3的理化性质为：HPLC检测确定其为均一物质,分子量约为1.79×102Da,旋光度为[α]D20-48.62°(c0.1, H2O),总糖含量为57.18%,酸性多糖含量为12.39%,SO42-含量为29.75%。HS-4的理化性质为：分子量为4.23×105Da,总糖含量为38.12%,酸性多糖含量为16.52%,硫酸根含量为32.64%,单糖组分主要以岩藻糖为主,还含有小部分半乳糖,不含蛋白质和核酸。 2、HS-3促进神经干细胞球迁移作用研究。 从胎龄为E14.

LPS可以诱导BMSCs分泌表达炎性因子TNF-α、IL-1β和IL-6，雌激素可以显著抑制炎性因子的高表达，并且呈浓度依赖性，表明雌激素具有明显的抗炎作用。 3.LPS和雌激素共同刺激下的BMSCs炎性因子表达量6h时处于上升期，12h和24h处于高峰，48h和72h时表达下降，表现为明显的时间依赖性。 4.MAPK信号通路可能是雌激素调控BMSCs炎性因子表达的途径之一。 5.雌激素可以明显促进BMSCs中OPG的表达，LPS可以明显促进BMSCs中RANKL的表达，雌激素可以通过调控OPG/RANKL的比值提高LPS作用后BMSCs的骨向分化能力，促进炎症微环境下BMSCs的骨向分化。

6.经LPS与E2作用后，大鼠BMSCs的OPG表达在6h开始上升，12h到24小时到达高峰，随后下降，而RANKL的表达在6h上升，12h以后一直保持较高水平。 哪里 7.雌激素可以通过调控炎性因子TNF-α、IL-1β和IL-6表达的途径对LPS诱导的BMSCs表达OPG/RANKL进行调控，雌激素调控炎性因子的表达是其发挥生物学功能的途径之一。
肺纤维化是严重危害健康的呼吸系统常见并发症,是各种不同病因的肺间质疾病的最后共同结局。由于大部分肺部疾病的最终转归都伴有不同程度的肺纤维化,因此肺纤维化不仅是肺部疾病转归的结果,还是导致原有疾病进一步恶化的主要原因。目前肺纤维化的临床治疗以给予皮质类固醇类和其他免疫抑制剂药物为主,但是研究发现其只对部分肺纤维化患者有效,对特发性肺纤维化患者疗效较差。肺纤维化的发病率和死亡率近年呈逐渐上升态势,对人类健康危害极大。因此,寻找新的治疗策略迫在眉睫。

Birinapant小白鼠 Antiflammin-1(AF-1)是与子宫珠蛋白(uteroglobin, UG)第三个alpha螺旋中的保守序列高度同源的一段寡肽,由于最初发现在体内具有较强的抗炎作用而得名。AF-1由九肽组成,对应于UG分子中的第39～47位氨基酸(MQMKKVLDS)。研究证实,AF-1具有抗炎、抑制细胞趋化及粘附等多种与UG相似的生物活性。与大分子天然蛋白UG相比较, AF-1的分子量更小,免疫原性更低,因此具有潜在的应用前景。以往的研究集中在对AF-1的抗炎作用和机制的探索上,鉴于UG在肺纤维化发生发展中的重要作用和本课题组前期关于AF-1抑制转化生长因子betal (transforming growth factor-betal,TGF-β1)诱导的NIH3T3增殖的作用,本课题首先在整体实验部分探索AF-1是否具有抑制博来霉素(bleomycin, 一般 BLM)诱导的小鼠急性肺炎症反应和抗肺纤维化的作用。 我们在前期实验中发现,UG的活性片段AF-1也能够特异性地结合UG受体,并且通过UG受体的介导,AF-1能够特异性的调节小鼠成纤维细胞丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase, MAPK)信号途径。由于UG受体同样表达于肺泡上皮细胞上,那么,既然AF-1能够通过结合成纤维细胞膜上的UG受体而抑制TGF-β1促增殖的作用。那么是否AF-1同样能通过上皮细胞膜上的UG受体而发挥某种生物学功能?本课题进一步在细胞实验部分尝试观察：①AF-11是否能够抑制TGF-β1诱导的上皮细胞间质转化(epithelial-mesenchymal transition,

EMT)的作用?②如果能,是否同样依赖于UG受体的介导? 第一章AF-1抑制博来霉素诱导的急性肺损伤 方法： 将60只实验小鼠随机分为3组,A组为生理盐水组,B组为BLM组,C组为BLM+AF-1组。单次给予小鼠气管内注射BLM(5mg/kg)以造成小鼠急性肺损伤,每日腹腔注射AF-1(2mg/kg),于BLM给药7天后收集样本,检测肺湿干重比值,HE染色法观察小鼠肺组织病理形态学变化,ELISA法检测肺组织匀浆TGF-β1、白介素-1beta(interleukin-1β, IL-1β)及肿瘤坏死因子-alpha (tumor necrosis factor-alpha, TNF-a)的浓度,肺组织匀浆髓过氧化物酶(myeloperoxidase, MPO)活性的检测,肺泡灌洗液中细胞分类计数、蛋白含量及乳酸脱氢酶(lactic dehydrogenase, LDH)活性的检测。 结果：(1)气管内注射BLM(5mg/kg)后第7天,BLM组肺湿干重比值、肺系数及MPO活性较正常对照组显著增加(P<0.05),经AF-1处理后,肺泡灌洗液中LDH活性和蛋白含量较BLM组明显下降(P<0.05)。经AF-1处理后,肺泡灌洗液中细胞总数、中性粒细胞的数量和百分比、淋巴细胞的数量较单独给予BLM组明显下降(P<0.05),经AF-1处理后,小鼠肺组织中TGF-β1、IL-1β、TNF-α的水平的显著下降,与单独给予BLM组相比,差异具有统计学意义(P<0.

Met4和C28在免疫组化染色及荧光免疫组化染色中,对Met的亚细胞定位存在差异。使用Met4检测时Met定位在肿瘤细胞浆和/或细胞膜,细胞核无染色。C28检测时Met定位在肿瘤细胞核。 结论 细胞膜高表达Met的大肠癌病例淋巴转移率明显增高,预示了肿瘤临床分级及不良预后。因此Met可作为反映大肠癌生物学行为的参考指标,有助于大肠癌的预后判断,并提供肿瘤治疗的干预靶点。Met4可以特异性结合福尔马林处理过的Met受体胞外区,用于筛选适宜于靶向阻断Met信号通路治疗的肿瘤患者,具有良好的临床应用前景。
目的:联合应用表皮生长因子酪氨酸激酶抑制剂-吉非替尼(Gefitinib)和放射线作用EGFR不同状态的NSCLC细胞A549、H1975,观察该药对两种细胞放射敏感性、DSB修复情况的影响及其EGFR是否均在X线照射后入核 方法:1)克隆形成实验检测各组细胞α、β和SF2等值;2)免疫荧光显示放疗后不同时间点各组细胞核中磷酸化γ-H2AX的表达,分析DSB修复情况;3)免疫印记检测各组细胞不同时间点细胞核内外EGFR表达水平。

结果:1)加药组A549细胞SF2值为0.355低于对照组0.4443;加药组H1975细胞和对照组SF2值分别为0.3094和0.3207,无明显差异;2) A549细胞加药组比对照组各时间点γ-H2AX表达明显增高(T表示加药组均数±标准差,t表示对照组均数±标准差;T30~(min)=22.33±2.30,t30~(min)=14.18±2.61;T45~(min)=15.95±2.40,t45~(min)=11.40±1.75;T60~(min)=11.47±1.19,t60~(min)=4.40±0.58; 购买Y-27632 P0.05);3)加药组A549细胞比未加药组胞浆EGFR表达明显增加( T0min=18.1±0.306,t0min=12.3±0.557;T15~(min)=18.2±0.306,t15~(min)=11.1±0.379;T30~(min)=16.2±0.551,t30~(min)=7.37±0.451;T60~(min)=15.5±0.265,t60~(min)=4.53±0.379; 或者 P 0.05)。 结论:吉非替尼能增加非小细胞肺癌A549放射敏感性,可能与吉非替尼抑制A549放射线损伤后的DSB修复,阻碍EGFR入核有关;而对H1975细胞没有影响,可能与其放射后EGFR不入核相关。
研究背景 肺癌和慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease, COPD)是严重危害人类健康的两种常见病和多发病,肺癌的发病率和死亡率居恶性肿瘤首位,COPD发病则呈逐年上升趋势,已是全球第4位的致死性疾病。目前肺癌和COPD的具体发病机制未明,但研究表明两者的发病可能存在一定的联系。COPD是气道慢性炎症性疾病,肺癌也是一种和慢性炎症密切相关的疾病,因此,慢性炎症可能是这种联系的一种表现形式。研究发现,73%的男性肺癌患者和53%的女性肺癌患者同时患有COPD,且有前瞻性研究显示COPD患者罹患肺癌的风险高于非COPD者。但肺癌和COPD是性质不同的两种疾病,其慢性炎症并非完全相同,参与慢性炎症的细胞及炎症因子在数量和活性上也有相应的不同。T淋巴细胞(包括CD4+和CD8+T淋巴细胞)是参与慢性炎症的重要细胞,也是细胞免疫的主要效应细胞,可进一步分化为不同的亚群,如CD4+T淋巴细胞可分化为Th1、Th2、Th17等亚群,CD8+T淋巴细胞可分化为Tc1、Tc2等亚群,各亚群在肺癌和COPD的发病中均有重要作用,并表现出不同的数量和活性。Tc17细胞是2006年由He

无 D等首先报道的CD8+T淋巴细胞的一个新亚群,在功能上与之前发现的Th17细胞类似,也以分泌IL-17A为特征,并可通过IL-17A等细胞因子参与慢性炎症反应和肺癌的发生发展,但COPD中Tc17细胞的变化情况尚未有相关报道。 目的 本研究旨在比较肺腺癌和COPD患者外周血Tc17细胞比例变化的差异。 方法 2009年10月至2010年12月于山东大学齐鲁医院呼吸科门诊就诊的患者中选取28例肺腺癌和21例COPD患者,选取本院健康医护人员和健康查体者42例作为健康对照组,收集他们的外周血标本。采用流式细胞术检测所有外周血标本Tc17细胞比例,采用实时定量PCR(real time-PCR)技术检测外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC)RORct mRNA表达的水平,酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测外周血中IL-17A.TGF-β.IL-10.IL-6等细胞因子的水平。分析外周血Tcl7细胞比例和RORct mRNA的相关性。 结果 1.流式细胞术检测显示：肺腺癌组和COPD组患者外周血Tc17细胞比例分别为0.76±0.83%和0.38±0.37%，二者均显著高于健康对照组0.23±0.17%(分别为P0.05)；肺腺癌组和COPD组患者外周血TGF-β水平均显著高于健康对照组(分别为P=0.007；P=0.001),且COPD组显著高于肺肺腺癌组(P=0.032)；COPD患者外周血IL-10水平显著高于肺腺癌患者(P=0.042)，两病例组均高于健康对照组(分别为P=0.003；P
目的通过检测HGF及CD34在食管鳞状细胞癌及癌旁正常组织中的表达,探讨HGF在食管鳞状细胞癌发生、发展及肿瘤血管生成中发挥的作用,为食管鳞状细胞癌分子靶向治疗提供参考依据。

方法免疫组化方法检测64例食管鳞状细胞癌组织及20例癌旁正常组织中HGF及CD34的表达情况,分析HGF与食管鳞状细胞癌临床病理因素及肿瘤血管生成之间的关系。 结果1食管鳞癌及正常组织中HGF的表达：HGF在食管鳞癌中表达阳性率为76.6%,在癌旁正常组织中表达阳性率为15.0%,HGF在癌组织中的表达明显高于癌旁正常组织(P5cm组HGF表达的阳性率为93.1%,二者差异具有统计学意义(P<0.05)：高中分化组HGF表达阳性率为63.6%,低分化组HGF表达阳性率为90.3%,二者差异具有统计学意义(P<0.05)；无淋巴结转移组HGF表达阳性率为66.7%,有淋巴结转移组HGF表达阳性率为92.0%,二者差异具有统计学意义(P<0.05)；T2期标本HGF表达阳性率为60.0%,T。期标本HGF表达阳性率为84.1%,二者差异具有统计学意义(P0.05)。 3食管鳞癌中CD34的表达：食管鳞癌组织的MVD值为(38.87±17.55)/耐,癌旁正常组织的MVD值为(15.10±3.76)/mm2,食管鳞癌组织的MVD值明显高于癌旁正常组织的MVD值(P5cm组MVD平均值为(48.10±16.61)/mm2,二者差异具有统计学意义(P0.05)。 5 MVD表达与HGF的关系：食管鳞癌中HGF阳性表达组MVD值为(42.25±16.

IBS大鼠结肠扩张刺激组(n=5)、C.IBS大鼠鞘内注射0.9%生理盐水后结肠扩张刺激组(n=5)、D.IBS大鼠鞘内注射A438079后结肠扩张刺组(n=5)。另外以5只正常大鼠作正常大鼠结肠扩张刺激组(n=5)、。采用免疫荧光组织化学方法观察大鼠DCN中P2X7、OX42、IL-1β、P38及脊髓后角中CGRP表达变化。结果与B组IBS扩张刺激组相比较,D组鞘内注射拮抗剂A438079后在结肠扩张刺激时IBS大鼠DCN核团中P2X7、OX42、IL-1β、P38及骶髓后角中CGRP的表达量均明显下降(P
一氧化碳(CO)是一种十分重要的细胞信使分子,具有传递细胞间信息、调节细胞功能等作用,并在体内的多个系统发挥极其重要的生理功能。新型CO供体CORMs(carbon

已经 monoxide releasing molecules)能够模拟内源性CO在体内产生的病理生理过程,可不经机体代谢而直接作用于靶点组织释放CO发挥生理作用。CORMs具有广泛的生物活性,并在体内的多个系统包括心血管系统、神经系统及血液系统等发挥重要的生理功能。该文主要就CORMs及其生物活性的研究进展进行了综述。
隐丹参酮(Cryptotanshinone,CPT)对肿瘤细胞有细胞毒的作用,不仅能阻碍肿瘤细胞增殖,而且可以诱导肿瘤细胞进行分化和促进肿瘤细胞程序性死亡,从而在一定的程度上阻碍肿瘤细胞侵袭和防止其向远处转移。本文主要对CPT抗肿瘤细胞作用的研究进展做一综述。
中药在成骨领域中的研究与应用不断地发展与突破,但其作用机理还有待进一步的深入研究。本研究就中药对骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化、成骨细胞分化和增殖、成骨细胞功能表达、成骨细胞信号通路调控的影响进行了综述,为成骨中药临床应用提供新的思路与依据。
目的观察骨成型蛋白(BMP)-2和p38丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)在小鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)向成骨细胞分化中的作用。方法体外分离和扩增小鼠BMSC,分为对照组、BMP-2组及阻断剂组,其中BMP-2组加入BMP-2,阻断剂组加入SB203580(p38MAPK通路阻断剂)和BMP-2。测定碱性磷酸酶(ALP)活性、钙沉积量、p38MAPK表达。结果与对照组相比,BMP-2组BMSC中ALP活性和钙沉积量增加(P
Alcoholism and acquired immune deficiency syndrome are associated with severe muscle wasting.This impairment in nitrogen balance

arises from increased protein degradation and a decreased rate of protein synthesis.The regulation of protein synthesis is a complex process involving alterations in the phosphorylation state and protein-protein Rapamycin 价格 interaction of various components of the

translation machinery and mammalian target of rapamycin(mTOR) complexes.This review describes mechanisms that regulate protein synthesis in cultured C2C12 myocytes following exposure to either alcohol or human immunodeficiency virus antiretroviral drugs.Particular attention is given to the upstream regulators of mTOR complexes Dabrafenib制造商 and the downstream targets which play an important role in translation.Gaining a better understanding of these molecular mechanisms could have important implications for preventing changes in lean body mass in patients with catabolic conditions or illnesses.
脂联素是脂肪细胞所分泌的若干细胞因子中含量最高,而且是迄今为止所发现的惟一与肥胖呈负相关的细胞因子,它以内分泌方式循环于血液中,参与调节能量稳态、葡萄糖代谢和脂肪代谢及抵抗炎症反应等生理过程.文章就脂联素及其受体的基因结构、生物学功能、脂联素对脂肪代谢的分子调控、脂联素及其受体在畜禽上的研究进展作了论述.
目的:研究三七皂苷单体Rg1对低氧高二氧化碳肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)p38MAPK表达的影响。方法:分离、纯化SD大鼠PASMCs,实验用2至5代细胞,实验分六组:常氧组(N组),低氧高二氧化碳组(H组),DM-SO对照组(HD组),Rg1干预组(RgL、RgM、RgH组)。采用Western blot检测磷酸化p38MAPK蛋白表达,RT-PCR检测p38MAPK mRNA的表达。结果:Westernblot、RT-PCR结果显示,HD组p-p38MAPK蛋白和p38MAPK mRNA表达明显高于N组(P<0.

上皮性卵巢癌患者血清HGF各临床分期之间分别比较,P<0.05,差异有显著性。2.上皮性卵巢癌患者血清HGF各病理分级之间分别比较,P<0.05,差异有显著性。3.HGF和CA125对卵巢癌诊断敏感率分别为90%和60%,而二者联合检测敏感率可达95%,与单独检测相比较,P<0.05,差异有显著性。6.上皮性卵巢癌组织细胞胞浆中HGF各病理分期之间分别比较,P
食管癌是一种高侵袭性的肿瘤，世界范围内，食管癌患者死亡率占肿瘤患者死亡率的第六位，我国是食管癌的高发国家，河南省是高发省份。随着治疗手段的发展，食管癌的预后有所改善，但是其五年生存率仍然不容乐观。浸润转移是引起食管癌患者死亡的主要原因，因此，对食管癌浸润转移机制的探讨已成为研究热点之一。

近来研究发现，在多细胞生物胚胎发育过程中的胚层和组织重建中存在一种现象：上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition，EMT)。最近研究认为它不仅存在于多细胞生物的胚胎发生过程中，同时也存在于多种慢性疾病以及肿瘤的进展过程中。Thiery这样描述上皮性肿瘤发生发展过程中的EMT：正常上皮细胞沿基底膜生长，通过表型遗传学的改变或基因突变，细胞发生转化生成原位癌(此时基底膜仍然保持完整)；继续发展，癌细胞通过EMT形式局部扩散，基底膜变脆，细胞侵入淋巴管和血管，发生转移；在种植部位，癌细胞还可通过间质-上皮转化形成转移瘤。上皮细胞发生EMT，以间质特性获得、上皮细胞极性丧失及运动能力增强为主要特征。这些特点与肿瘤细胞的原位侵袭和远处转移密切相关。目前关于食管鳞癌中是否存在EMT及EMT在食管鳞癌浸润转移中的作用尚未见报道。 点击此处 EMT是一个极其复杂的过程，包括：(1)细胞间连接(黏附连接、紧密连接、桥粒连接)解体，细胞分散；(2)细胞骨架重排，形成细胞-基质黏附，细胞运动能力增强。(3)细胞基因型的改变：在EMT过程中表达上调的因子主要包括间叶细胞标志物如纤维连接蛋白(fibronectin)、波形蛋白(Vimentin)、神经钙黏素(N-cadherin)等，以及诱导EMT的细胞因子和转录调节因子，如snail、slug，转化生长因子-β(transforming

growth factor-β，TGF-β)，成纤维细胞生长因子(fibroblast growth factor，FGF)；还有对诱导EMT有辅助作用的基质金属蛋白酶-2(MMP-2)，基质金属蛋白酶-9(MMP-9)等。在EMT过程中表达下调的因子主要包括上皮细胞的标志物如上皮钙黏素(E-cadherin)，β-连环素(β-catenin)，γ-连环素(γ-catenin)，细胞角蛋白18(cytokeratin18)等。已有研究发现TGF-β在诱发EMT中起关键作用。 ZD6474分子量 有关食管鳞癌中是否存在EMT以及食管鳞癌中TGF-β1引发的EMT是否与食管癌的浸润转移有关，目前尚未见报道。本研究探讨了食管癌组织及食管鳞癌细胞系EC9706中TGF-β1的表达及其与E-cadherin及Vimentin的关系；采用针对TGF-β1的反义寡核苷酸干扰技术，抑制食管鳞癌细胞EC9706中TGF-β1的转录活性，探讨抑制TGF-β1对E-cadherin及Vimentin表达的影响，观察转染反义寡核苷酸对细胞形态学的影响及对细胞运动能力的影响，从而探讨食管鳞癌细胞中TGF-β1诱导的EMT；并探讨TGF-β1对食管鳞癌细胞EC9706增殖及凋亡的影响。探讨食管鳞癌浸润转移的分子机制，为食管癌浸润转移的阻断治疗提供理论基础。

材料和方法 1．采用免疫组织化学技术检测了100例手术切除的食管鳞癌组织及其癌旁“正常”粘膜中TGF-β1、E-cadherin和Vimentin蛋白的表达情况。 Doxorubicin 价格 2．采用RT-PCR、免疫细胞化学、流式细胞术对食管鳞癌细胞系EC9706中的TGF-β1、E-cadherin和Vimentin蛋白及mRNA表达进行了检测。 3．针对TGF-β1第一启动子的核苷酸片段设计合成反义寡核苷酸(ASODN)，采用阳离子聚合物瞬时转染培养的人食管鳞癌EC9706细胞。 ①观察TGFβ1-ASODN转染后细胞形态学的变化。 ②采用RT-PCR、免疫细胞化学方法、流式细胞术方法观察TGFβ1-ASODN转染后细胞中TGF-β1mRNA及蛋白表达的变化。 ③采用RT-PCR、免疫细胞化学、流式细胞术方法观察TGFβ1-ASODN转染后细胞中E-cadherine与Vimentin mRNA及蛋白表达的变化。 ④采用细胞划痕试验检测TGFβ1-ASODN转染后细胞迁移能力的变化。 4．采用流式细胞术、MTT观察转染TGFβ1-ASODN后，对细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响。 5．统计学处理：所有数据均经SPSS13.0软件进行统计分析。计数数据采用阳性率表示，阳性率之间的比较采用χ~2检验(Chi-square)，阳性率间相关性采用Kendall相关进行比较；计量数据采用(?)±S表示，两组均数的比较用t检验(t-test)，两组以上均数的比较用方差分析(ANVOA)。显著性水平α=0.05。 结果 1．TGF-β1蛋白在食管鳞癌中的表达(85.0％)明显高于其在癌旁“正常”粘膜中的表达(27.0％)(P＜0.01)，其在深层浸润组中的表达(90.6％)高于其在浅层浸润组中的表达(75.0％)(P＜0.05)。 2．E-cadherin蛋白在食管鳞癌中的表达(43％)明显低于其在癌旁“正常”粘膜中的表达(85％)(P＜0.01)；Vimentin蛋白在食管鳞癌中的表达(23％)高于其在癌旁“正常”粘膜中的表达(0％)(P＜0.05)。 3．在食管鳞癌组织中，TGF-β1的表达与E-cadherin的表达呈负相关关系(T_b=-0.257，P＜0.05)；TGF-β1的表达与Vimentin的表达呈正相关关系(T_b=0.163，P＜0.05)；Vimentin的表达与E-cadherin的表达呈负相关关系(T_b=-0.379，P＜0.

48±0.04，其下游的P38和JNK磷酸化水平也都明显提高。 (2)运用特异性抑制剂使P38和JNK的磷酸化表达降低，达到对照组磷酸化水平，但细胞仍表现为G2／M阻滞，阻滞程度较非抑制剂组明显减弱。 结论：在HepG2细胞中高表达Gadd45γ蛋白可以激活Gadd45γ-P38和Gadd45γ-JNK信号转导通路；Gadd45γ-P38和Gadd45γ-JNK通路参与了Gadd45γ诱导的肝癌细胞G2／M期阻滞。
本课题通过研究一次性有氧运动对KK-AyⅡ型糖尿病小鼠血糖和骨骼肌p38及其相关因素的影响，从p38MAPK信号转导通路的角度探讨运动降低糖尿病血糖水平的可能机制，为运动治疗糖尿病提供科学依据和参考。

以雄性6月龄KK-Ay和C57BL/6J小鼠为研究对象，小鼠按血糖配对后随机分为：糖尿病运动组(KE组)和糖尿病对照组(KC组)；正常运动组(CE组)和正常对照组(CC组)。运动方案如下：跑台坡度为0°，速度为12m·min~(-1)，时间30min。实验后即刻在腹腔麻醉后取血和双侧股四头肌。分别用葡萄糖氧化酶法测定血糖浓度：免疫印迹法检测p38蛋白表达和磷酸化；改良比色法测定血清游离脂肪酸；放射免疫法测定血清胰岛素和肿瘤坏死因子α(TNF-α)。 www.selleck.cn/Bcl-2.html 研究结果表明KK-Ay小鼠体重大于C57BL/6J小鼠，血糖高于C57BL/6J小鼠。一次性有氧运动后正常运动组和糖尿病运动组血糖较自身实验前下降。运动后CE组血清胰岛素浓度比CC组低55％，KE组则较KC组低43％。KC组骨骼肌p38磷酸化水平高于CC组，CE组骨骼肌p38磷酸化水平高于CC组，KE组骨骼肌p38磷酸化水平高于KC组。KC组的血清TNF—α浓度明显高于CC组，KE组血清TNF—α浓度明显低于KC组。KC组血清FFA浓度明显高于CC组，KE组血清FFA浓度明显低于KC组；而CE组血清FFA浓度虽低于CC组，但差异无统计学意义。 结论：KK-AyⅡ型糖尿病小鼠骨骼肌p38磷酸化增加，血清TNF-α和FFA水平上升，p38、TNF-α和FFA交互作用，共同在Ⅱ型糖尿病的发生发展过程中起着非常重要的作用。一次性有氧运动可以有效降低KK-Ay小鼠的血糖及血清胰岛素水平。一次性有氧运动直接激活KK-Ay小鼠骨骼肌p38磷酸化，降低血清TNF-α和FFA水平，并通过p38间接作用于TNF-α、FFA，最终达到降低血糖的效果，这可能是运动降血糖的部分分子机制。
研究背景和目的:

近年来随着经济的发展及人均寿命的延长,我国糖尿病的患病率剧增,糖尿病肾病(DN)引起的终末肾功能衰竭(ESRD)已成为威胁糖尿病患者生命的主要原因之一。早期有效地评估肾功能是及时治疗、延缓肾病进展的基础。 24小时内生肌酐清除率(Ccr)是较早使用在临床的肾功能评估法。此法操作繁琐,患者依从性差,结果重复性欠理想。而核素(~(99m)Tc—DTPA)肾脏动态显像由于经济等原因,无法用于临床筛查。于是产生了基于血肌酐(Scr)的肾小球滤过率的公式计算方程。 公式计算肾小球滤过率(eGFR)在慢性肾功能衰竭患者中逐步得到肯定,但在2型糖尿病(T2DM)人群中的应用证据不多。本研究以~(99m)Tc—DTPA肾动态显像测定肾小球滤过率(GFR)为金标准,评估体表面积标准化Cockcroft—Gault方程(CG公式)、简化MDRD方程(MDRD公式)、MDRD-7公式、Ccr在T2DM及非糖尿病肾病患者(NDM)中的应用价值,为临床简易而准确评估糖尿病患者肾功能提供依据。

研究对象及方法: 1.研究对象 什么 选择浙江大学医学院附属邵逸夫医院2007年3月—2008年2月内分泌科住院的T2DM Venetoclax 花费 94例,均符合1999年WHO糖尿病诊断及分型标准,临床上初步排除合并DN以外的其他类型肾病,其中男性55例,女性39例,平均年龄56±13岁,平均糖尿病病程6.5±5.9年,41例合并高血压(根据WHO建议高血压诊断标准),占43.6%,48例合并代谢综合征(根据IDF的代谢综合征的全球统一诊断标准),占51.1%。选择同期肾内科住院的非糖尿病慢性肾脏病患者55例作为NDM组(根据美国NKF-K/DOQI关于慢性肾脏病定义),其中男性29例,女性26例,平均年龄50±13岁,23例合并高血压,占41.8%,31例行肾脏穿刺活检,占56.4%。 根据有无合并高血压分别将T2DM及NDM分为高血压组和正常血压组。根据有无合并代谢综合征、低蛋白血症、Scr升高将T2DM分为相应的正常组与异常组。根据尿白蛋白排泄率(UAE)将T2DM按分为正常白蛋白尿组(NAU,UAE＜30mg/24h)、微量白蛋白尿组(MAU,30mg/24h≤UAE＜300mg/24h)和临床蛋白尿组(CAU,UAE≥300mg/24h)。两组患者GFR按美国的NKF-K/DOQI指南分成4期:1期GFR≥90ml/min/1.73m~2;2期60≤GFR＜90ml/min/1.73m~2;3期30≤GFR＜60ml/min/1.73m~2;4期GFR＜30ml/min/1.73m~2。 2.研究方法 2.1一般临床资料采集 记录性别、年龄、病程、吸烟史、饮酒史,测量身高、体重、血压、腹围(NDM未测量腹围),并计算体重指数(BMI)。T2DM入院时指测随机血糖(采用强生稳豪型血糖仪及强生稳豪血糖仪试条)。 2.2实验室化验检查 素食,避免茶、咖啡等有色饮料,避免剧烈运动3天后开始清洁留尿,晨8点排空膀胱后开始留置24h尿,至次日晨8点的尿液均收集于广口瓶中。第一次收集尿液后即滴入甲苯5ml,防止细菌污染,记24小时尿量,收集完毕时采空腹静脉血同步送检,以测Scr、血清白蛋白(ALB)、甘油三脂(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、尿素氮(BUN)、尿肌酐、空腹血糖(FBS)、糖化血红蛋白(HbAlc%)、尿白蛋白(NDM未测后两项)。 2.3 ~(99m)Tc—DTPA肾脏动态显像测定GFR及计算eGFR、Ccr所有患者均接受~(99m)Tc—DTPA肾脏动态显像测定GFR,采用CG公式、MDRD公式、MDRD-7公式计算eGFR,并计算T2DM的Ccr。 3.统计 所有数据用SPSS13.

氯化锂可抑制奥曲肽对结肠癌SW480细胞Wnt/β-Catenin信号通路的作用,提示奥曲肽对Wnt/β-Catenin信号通路的抑制作用与其增强GSK-3β的活性有关。
研究背景： IWR 1 特发性肺纤维化(IPF)是一种以肺内成纤维细胞不明原因的异常增殖形成瘢痕组织为主要特征的进行性肺部纤维化疾病,其病理机制目前还不清楚。有研究表明Wnt/β-catenin信号通路在成纤维细胞激活、增殖过程中具有重要调节作用,同时在IPF病人的肺组织中也发现了Wnt/β-catenin信号通路的异常激活。另外,由于骨髓间充质干细胞(BM-MSCs)具有分化为包括上皮细胞谱系在内的多向分化潜能,有研究试图利用BM-MSCs分化为肺泡上皮细胞来修复肺纤维化,但因BM-MSCs具有向上皮细胞或成纤维细胞分化的双向分化可能,具体修复效果目前尚无定论。有研究证实Wnt/β-catenin信号通路参与了BM-MSCs向上皮细胞的分化。 考虑到Wnt/β-catenin信号通路在以上过程中的重要作用,本实验以该信号通路为靶点,采用小鼠腹腔注射Wnt/p-catenin言号通路抑制剂XAV939以观察其对博来霉素诱导的肺纤维化的作用；同时运用Trans-well细胞共培养技术构建小鼠骨髓间充质干细胞(BM-MSCs)与肺泡Ⅱ型上皮细胞(ATⅡ细胞)共培养诱导分化体系,以观察在共培养条件下XAV939对BM-MSCs向肺泡上皮细胞分化过程的影响。这将为通过抑制Wnt/p-catenin信号通路治疗肺纤维化这一新思路提供重要的实验基础。

研究目的： 1、确认XAV939能够抑制博来霉素诱导的小鼠肺纤维化的发展；2、构建BM-MSCs与ATⅡ细胞共培养诱导分化体系,证明在共培养条件下XAV939能够促进BM-MSCs向肺泡上皮细胞分化。 研究方法： 1、采用SPF级雄性十周龄C57BL/6小鼠腹腔麻醉后鼻腔滴注博来霉素。分别于给药后第7天、14天和21天处死小鼠,采用组织切片染色、羟脯氨酸含量测定、RT-PCR和Western blot等技术检测肺纤维化的发生、发展以及Wnt/β-catenin信号通路中相关因子的表达情况。 2、在小鼠肺纤维化模型建立的基础上,于博来霉素鼻腔滴注后第10天开始腹腔注射XAV939,连续注射7天。在第17天处死小鼠,采用组织切片染色、羟脯氨酸含量测定、]RT-PCR和Western blot等技术检测肺纤维化的发生、发展以及Wnt/β-catenin信号通路中相关因子的表达情况。 3、小鼠鼻腔滴注高剂量博来霉素(17天大部分死亡的剂量),在第10天开始腹腔注射XAV939,连续注射7天。每天观察并记录小鼠死亡情况。

4、采用CCK-8法体外检测XAV939对NIH-3T3成纤维细胞增殖能力的影响。 5、运用Trans-well方法建立BM-MSCs与ATII细胞的共培养体系。将两种细胞以8：1的比例分别接种到六孔板和小室内,并在培养基中加入XAV939。连续共培养至14天,用免疫荧光、RT-PCR和Western 也许 blot等技术检测诱导分化的BM-MSCs中肺泡上皮细胞标记角蛋白18(Keratin18, Krt18)、角蛋白19(Keratin19, Krt19)、闭合蛋白(Occludin, Ocln)以及表面活性蛋白C (Surfactant protein C, Sftpc)的表达情况。 研究结果： 1、博来霉素可以诱导小鼠肺纤维化,在此过程中伴有Wnt/β-catenin信号通路的激活。鼻腔滴注博来霉素引起肺泡间出现炎症细胞弥漫浸润,纤维组织增生,肺泡间隔显著增宽,肺间质中胶原纤维沉积量加大,纤维化相关分子表达量上升；同时伴有Wnt/β-catenin信号通路相关因子表达上调,组织内β-catenin含量上升。 2、XAV939能够抑制Wnt/p-catenin信号通路的激活并修复肺组织、抑制肺纤维化的发展。在腹腔注射XAV939后,Wnt/β-catenin信号通路和纤维化相关因子表达下调,组织内β-catenin含量下降,纤维组织增生面积显著减少,胶原纤维沉积量降低。 3、XAV939提高了鼻腔滴注高浓度博来霉素后小鼠的生存率。 4、XAV939能够抑制NIH-3T3成纤维细胞的增殖活力。 5、运用Trans-well技术成功建立了BM-MSCs与ATⅡ细胞共培养诱导体系。在共培养体系中,XAV939能够促进BM-MSCs呈现上皮样形态,表达上皮细胞特异性标记Krt18, Krt19, Ocln以及Sftp。 结论： 在体内实验中,我们证实XAV939可以抑制Wnt/β-catenin信号通路的激活并促进纤维化肺组织的修复,提高高浓度博来霉素损伤后小鼠的生存率；在体外实验中,XAV939可以抑制NIH-3T3成纤维细胞增殖,促进共培养体系中BM-MSCs向肺泡上皮细胞分化。这为进一步研究Wnt/β-catenin信号通路与肺纤维化的发生、发展得关系提供了一定的实验基础,对肺纤维化的治疗具有临床指导意义。
研究背景 整联蛋白连接激酶(integrin-linked kinase, ILK)第一次被发现于1996年,是一种定位于细胞粘着斑部位的丝氨酸／苏氨酸的蛋白激酶。现已探明,ILK在多种细胞通路和功能中起到至关重要的作用,包括细胞的生长、发育、分裂、增殖、分化、迁移和血管发生等。很多研究表明,在病变的癌细胞中,ILK的表达较之正常细胞明显升高,说明其对癌症的发生和治疗密切相关。目前的研究表明,ILK在神经系统的各个脑区都有很高的表达量,说明它可能在神经系统中也发挥着巨大作用。通过基因敲除ILK的方法检测发现,与正常小鼠相比,基因敲除ILK的小鼠神经系统发育出现了缺陷,其皮层结构完全紊乱,小脑脑叶数目减少,脑叶融合,海马齿状回部位出现了锯齿状的颗粒层结构等等。进一步的研究发现,神经生长因子(nerve

ATR抑制剂 growth factor, NGF)刺激下引起的突起生长或是树突生长依赖于ILK的作用,当抑制ILK之后,突起生长明显受到抑制,这些结果,都说明ILK在神经系统的正常生长发育过程具有重大意义。然而,目前关于ILK在成年动物高级功能如学习记忆中的作用以及机制尚不清楚。本论文使用多种研究方法从分子到整体水平阐明了ILK在丰富环境增强记忆中的作用及机制,并初步探究了其在改善APP/PS1转基因小鼠记忆缺陷中的作用,为今后临床治疗阿尔兹海默病提供了实验依据。 研究目的 1.ILK是否参与丰富环境增强记忆的过程。 2.ILK通过何种机制参与丰富环境增强记忆的过程。 3.调节ILK的功能能否改善APP/PS1转基因小鼠记忆能力的缺陷。 研究方法 1.丰富环境训练以及ILK蛋白、mRNA检测 1.1丰富环境训练 将小鼠置于放置有滚轮、梯子、隧道、滚球等玩具的环境中,观察随着时间推移ILK蛋白量的变化。 1.2ILK蛋白、mRNA检测 采用western blotting和RT-PCR的方法,检测ILK蛋白和mRNA水平的变化。 2.病毒干预对神经再生和学习记忆的影响 2.

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目的探讨TGF-β1诱导皮肤成纤维细胞向肌成纤维细胞转分化的可能途径和调控机制。方法将小鼠皮肤成纤维细胞(野生型和Smad 3 Knockout型)分为9组:野生型FB组、野生型FB+TGF-β1组、野生型FB+SB 431542组、野生型FB+SB 431542+TGF-β1组、Smad 3 KO FB组、Smad 3 KO FB+TGF-β1组、野生型FB+SB 203580+TGF-β1组、野生型FB+PD 98059+TGF-β1组和野生型FB+SP600 125+TGF-β1组。各组细胞经同步化处理后,直接以TGF-β1刺激或经上述各激酶抑制剂预处理后再以TGF-β1刺激。收集细胞,…
目的:探讨木鳖子醇提物(ethanol extract of cochinchina momordica seed,CMSEE)诱导黑素瘤B16细胞分化的作用机理。方法:CMSEE处理B16细胞后,经瑞氏染色,倒置相差显微镜下观察B16细胞的形态学变化;比色法检测B16细胞黑素含量。Western blotting检测经CMSEE和p38、ERK通路抑制剂SB203580和SD98059处理后p-p38、p-ERK表达的变化。结果:经10μg/ml～40μg/ml CMSEE处理后,B16细胞呈现典型的细胞分化形态,黑色素量含量明显升高(P
目的研究吡格列酮(Pio)对脂多糖(LPS)诱导星形胶质细胞(AC)诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的抑制作用及其作用机制。方法

AC分别加入Pio 0.1,1.0和10.0μmol·L~(-1),c-Jun氨基端激酶(JNK)抑制剂SP600125 20.0μmol·L~(-1),p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)抑制剂SB20358020.0μmol·L~(-1)或过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)抑制剂GW9662 10.0μmol·L~(-1),1 MAPK抑制剂 h以后加入LPS 10.0 mg·L~(-1),继续作用24 h。Griess法测定培养AC上清液中一氧化氮(NO)含量。免…
Objective To further understand the mechanisms of signal transduction pathways for the formation of F-actin (polymerization of actin) and the activation of NADPH oxidase in phagocytic cells, the effects of 可能 various inhibitors on them were studied. Methods Differentiated HL60 cells were studied to

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目的:观察 P38激酶特异性抑制剂 SB203580及反义 P38激酶 cDNA 对胆红素诱导人神经母细胞瘤 SH-SY5Y 细胞凋亡的影响,探讨 P38激酶信号转导通路在胆红素诱导 SH-SY5Y 细胞凋亡中的作用及高胆红素血症损伤中枢神经细胞的分子机制及在听神经病发病中的作用。方法:分别经 SB203580和二甲基亚砜预处理的 SH-SY5Y 细胞在胆红素作用3h 和5h 后, 在倒置光显微镜下观察细胞形态的变化及存活情况;流式细胞仪检测凋亡细胞百分率。采用脂质体法将含人反义 http://www.selleckchem.cn/products/Verteporfin(Visudyne).html P38cDNA 的真核表达载体 pcDNA3.0-antiP38导入 SH-SY5Y 细胞,建立稳定低表达 P38…
儿童肾病综合征治疗以糖皮质激素为主,多数患儿可以迅速缓解,但部分患儿出现原发或继发糖皮质激素抵抗,导致临床症状不能缓解,出现进行性肾脏损害,糖皮质激素抵抗发生机制至今不清。糖皮质激素是脂溶性类固醇激素,与细胞浆中的糖皮质激素受体(GR)结合211位丝氨酸磷酸化后转位入核发挥作用。糖皮质激素抵抗的机制目前尚不清楚,临床观察表明感染与激素抵抗密切相关,我们认为有感染或多途径所导致的细胞外信号调节激酶(ERK)的持续活化可能是儿童肾病综合征发生糖皮质激素抵抗的关键。本研究首先观察儿童肾病综合征糖皮质激素抵抗病人外周血淋巴细胞ERK活化及糖皮质激素受体GRα核转位受阻情况,以及ERK抑制剂对体外培养的…
【目的】甲基苯丙胺(Methamphetamine,Meth)是否可通过丝裂原活化蛋白激酶(Mitogen-activated protein kinase,MAPK)途径,调节Kv2.1蛋白,进而影响海马神经元凋亡。【材料和方法】用300μM的Meth对原代培养的海马神经元处理24小时,利用western

blot方法,观察Meth对于MAPK信号通路中ERK、JNK、p38通路及其磷酸化水平的影响。对海马神经元预敷ERK1/2、JNK和p38 MAPK通路抑制剂PD98059(10μM)、SP600125(10μM)和SB203580(10μM)1 h,随后加入300μM/L Meth作用…
目的探讨N-乙酰半胱氨酸(NAC)在高氧性肺损伤的保护作用,并研究p38MAPK信号途径在NAC干预高氧性肺损伤中表达的变化。方法 40只3周龄普通级Wistar大鼠随机等分为5组:空气组(A组)、高氧损伤组(B组)、高氧+NAC组(C组)、高氧+SB203580组(D组)、高氧+NAC+SB203580组(E组)。
The purpose is to establish a model of acute ischemic kidney injury,as well as to examine the role of ADMA in ALl induced by AKI.Forty-five male Wistar rats were randomly divided into three groups(control,AKI and AKI+SB203580).Plasma ADMA levels and permeability index(PI)in the AKI group were sig…

01)。丹酚酸B治疗组大鼠胰腺的腺泡萎缩和纤维化评分明显低于模型对照组(p＜0.05),而炎症细胞浸润评分没有差别(p＞0.05)。

(2)丹酚酸B抑制大鼠慢性胰腺炎模型的胰腺星状细胞活化:模型对照组大鼠胰腺中有明显的alpha-SMA阳性细胞。与模型对照组和丹酚酸B治疗组比较,非模型对照组和假手术组大鼠胰腺仅有少数alpha-SMA阳性细胞。丹酚酸B治疗组大鼠胰腺的alpha-SMA阳性细胞明显少于模型对照组。 (3)丹酚酸B抑制慢性胰腺炎模型胰腺组织Ⅰ胶原蛋白mRNA表达:与模型对照组比较,丹酚酸B可以明显抑制胰腺组织Ⅰ胶原蛋白mRNA表达(p＜0.01)。与非模型对照组和假手术组大鼠相比,模型对照组大鼠的胰腺组织Ⅰ胶原蛋白mRNA水平明显升高(p＜0.01),而丹酚酸B治疗组大鼠的胰腺组织Ⅰ胶原蛋白mRNA升高水平没有统计学差异(p＞0.05)。 GSK2118436 3)胰腺星状细胞增殖抑制试验 根据MTT结果,丹酚酸B1μmol/L组对PSC细胞没有明显的增殖抑制作用(p＞0.05),而丹酚酸B10μmol/L和100μmol/L组与对照组相比,丹酚酸B对PSC细胞有明显的增殖抑制作用(p＜0.01)。 4)丹酚酸B细胞试验 (1)丹酚酸B抑制胰腺星状细胞alpha平滑肌肌动蛋白和Ⅰ型胶原蛋白mRNA表达:与对照组相比,丹酚酸B组胰腺星状细胞alpha平滑肌肌动蛋白和Ⅰ型胶原蛋白mRNA表达明显下调,而且随着丹酚酸B1μmol/L,10μmol/L和100μmol/L逐步升高,胰腺星状细胞alpha平滑肌肌动蛋白和Ⅰ型胶原蛋白mRNA表达逐步下调。 Selleckchem Alisertib (2)丹酚酸B抑制胰腺星状细胞Ⅰ型胶原蛋白表达:与对照组相比,丹酚酸B1μmol/L组胰腺星状细胞Ⅰ型胶原蛋白表达没有下调,但丹酚酸B10μmol/L和100μmol/L组胰腺星状细胞Ⅰ型胶原蛋白表达明显下调,且随着丹酚酸B浓度升高,胰腺星状细胞Ⅰ型胶原蛋白表达逐步下调。 (3)丹酚酸B抑制胰腺星状细胞细胞外信号调节激酶(ERK1/2)表达:与对照组相比,丹酚酸B组胰腺星状细胞细胞外信号调节激酶(ERK1/2)表达明显下调,而且随着丹酚酸B1μmol/L,10μmol/L和100μmol/L逐步升高,胰腺星状细胞细胞外信号调节激酶(ERK1/2)表达逐步下调。 结论:

1)胆胰管注射法诱导的慢性胰腺炎模型基本符合人类慢性胰腺炎特征,胰腺星状细胞在慢性胰腺炎发生发展中起重要作用; 2)丹酚酸B通过抑制胰腺星状细胞细胞外信号调节激酶活性,降低alpha平滑肌肌动蛋白mRNA表达水平和抑制胰腺星状细胞活化; 3)丹酚酸B通过抑制胰腺星状细胞活化,减少Ⅰ胶原蛋白和改善慢性胰腺炎大鼠模型胰腺组织病理损害。
目的:1.观察衰老心脏老化指标的改变,研究阿托伐他汀干预对心脏老化指标的影响。2.检测老年大鼠心脏炎症因子和PPARs基因表达的变化及阿托伐他汀干预的影响。3.分析阿托伐他汀干预对心脏炎症因子表达的影响与PPARs信号转导途径的关系。 方法:1.20个月龄大鼠,给予不同剂量阿托伐他汀(10 mg/kg/d和1 mg/kg/d)灌胃4个月。2.测量各组大鼠的体重、血压、左室壁厚度、血脂水平、心重指数、心肌细胞直径等指标;检测MDA、脂褐素、β半乳糖苷酶、SOD、NOS、CAT等指标的变化;采用苦味酸-天狼猩红染色观察心脏胶原含量;应用TUNEL法检测心肌细胞凋亡情况。3.以RT-PCR和western 什么 blot技术检测心肌炎症因子MMP-9、IL-1β、TNF-α在mRNA和蛋白水平的表达。4.以RT-PCR和western blot技术检测心肌PPARα、PPARβ/δ、PPARγ在mRNA和蛋白水平的表达。5.分离培养老年大鼠心肌细胞,给予阿托伐他汀(10μmol/L)和PPARs拮抗剂GW6471、GSK0660、GW9662干预(均为5μmol/L),以RT-PCR和western

blot技术检测MMP-9、IL-1β、TNF-α在mRNA和蛋白水平的表达。 结果:1.同青年大鼠相比,老年大鼠的血压、血脂(TG、TC、LDL-C)水平、心重指数、心肌细胞直径、心肌胶原含量、Ⅰ/Ⅲ型胶原比例、心肌细胞凋亡数、脂褐素、β-半乳糖苷酶、MDA含量显著增加(P＜0.01),CAT、NOS、SOD活性显著降低(P＜0.01)。2.与老年对照组相比,他汀组大鼠体重均降低(分别为P＜0.05和P＜0.01),大剂量组更为显著(P＜0.01);与老年对照组相比,他汀组的舒张压均无差异(P＞0.05),大剂量组的收缩压明显降低(P＜0.05),小剂量组无显著差异(P＞0.05);他汀组的心重指数、左室壁厚度和心肌细胞直径、凋亡心肌细胞数均显著低于老年对照组(P＜0.01);他汀组的心肌胶原含量(P＜0.01)及Ⅰ/Ⅲ型胶原比例均低于老年对照组(小剂量组为P＜0.05,大剂量组为P＜0.01),大剂量组的作用更显著(P＜0.05);大剂量组的TG(P＜0.05)、TC(P＜0.