05),AQP4的表达上调(P<0.05),缺血侧半球脑含水量升高(P<0.05),AQP4的表达下调(P<0.05),缺血侧半球脑含水量降低(P
目的探讨西罗莫司诱导K562细胞γ珠蛋白基因表达的作用机制。方法终浓度10

nmol·L-1西罗莫司处理K562细胞3 d,同时设立阳性药物(丁酸钠)对照、二甲基亚砜对照和空白对照。采用Western blot方法检测p38MAPK。采用基于Real time PCR的染色质免疫共沉淀方法分析γ珠蛋白基因启动子乙酰化组蛋白H3水平。结果经西罗莫司处理的K562细胞的磷酸化p38MAPK相对水平及γ珠蛋白基因启动子乙酰化组蛋白H3水平分别比空白对照细胞升高2.8和9.8倍、分别比二甲基亚砜处理组升高2.9和9.1倍,而与丁酸钠处理的细胞无显著性差别。SB203580预处理K562细胞可中止西罗莫司升高磷酸化p38MAPK及γ珠蛋白基因启动子乙酰化组蛋白H3的作用。结论西罗莫司诱导K562细胞γ珠蛋白基因表达的机制与其激活p38MAPK信号和上调启动子乙酰化组蛋白H3有关。
目的探讨拟胚体(EBs)培养密度对小鼠胚胎干细胞(ESCs)心肌细胞分化的影响。方法小鼠ESCs经过悬滴培养后形成EBs后,以高、低密度(120、60个EBs/60mm组织培养皿)贴壁培养,免疫荧光检测心肌特异性蛋白肌钙蛋白T(TnT)的表达。在不同时间点计算不同密度组搏动EBs百分比;RT-PCR检测Nkx2.5、GATA4、β-MHC及ANF基因表达水平;Western-blot检测TnT及p38表达水平。结果通过悬滴培养法形成的EBs能够出现自发性搏动并且有TnT表达。高密度培养组与低密度培养组相比具有更高的搏动EBs百分比,Nkx2.5、GATA4、β-MHC和ANF基因高表达水平,以及TnT蛋白高表达水平(P
p38通路是真核细胞转导细胞外信号到细胞内引起细胞反应的一类重要信号通路,它能够调控多种细胞内分子事件。p38是p38通路发挥生物学作用的末端激酶,它能够通过调控MyoD、Myf-5活性或表达、组蛋白修饰、染色体重塑、某些细胞分化相关mRNA的更替等方式影响肌肉分化进程。运动能够激活p38,p38可能通过NF-κB/IL-6/成肌调节因子(myogenic

查找更多 Palbociclib体内 regulatory factor,MRF)及肌细胞专一增强因子2(muscle-specific enhancement factor2,MEF2)、过氧化物增殖物活化受体γ辅激活因子1α(peroxisome proliferator activated receptor γ coactivator-1α,PGC-1α)、葡萄糖转运蛋白4(glucose transporter 4,GLUT4)在运动介导的肌肉发生、线粒体发生、血糖摄取能力提高等几方面发挥作用。
目的研究表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对结肠癌细胞HT-29RECK基因甲基化及p38信号通路的影响。方法用50μMEGCG以及p38特异性抑制剂SB203580与培养的HT-29细胞孵育36h,甲基化特异性PCR(MSP)检测RECK甲基化情况,并用Western

blot检测p38的磷酸化改变。结果MSP结果显示EGCG、SB203580处理后,HT-29细胞内甲基化RECK基因有所减少,而非甲基化基因明显增多,同时EGCG能抑制HT-29细胞中p38的磷酸化水平。结论EGCG可能通过抑制p38磷酸化而逆转肿瘤细胞RECK甲基化。
目的探讨血管紧张素Ⅱ对内皮细胞肌动蛋白骨架的影响及其作用机制。方法血管紧张素Ⅱ(10-6mol/L)处理人脐静脉内皮细胞不同时间(0、5、15、30及60 此网站 min)。激光共聚焦显微镜下观察细胞纤维状肌动蛋白骨架的形态学变化。Western blotting检测丝裂原活化蛋白激酶磷酸化水平。结果正常组内皮细胞的纤维状肌动蛋白主要富集于细胞膜周边,分布均匀。血管紧张素Ⅱ处理组细胞膜周边的纤维状肌动蛋白消失,胞浆中出现密集的应力纤维,细胞间隙形成,且呈明显的时间依赖性。血管紧张素Ⅱ上调p38丝裂原活化蛋白激酶、c-Jun氨基末端激酶和热休克蛋白27的磷酸化水平,但对细胞外信号调节激酶无明显影响。p38丝裂原活化蛋白激酶特异性抑制剂SB203580阻断血管紧张素Ⅱ引起的纤维状肌动蛋白重排和细胞间隙形成。c-Jun氨基末端激酶特异性抑制剂SP600125则无明显作用。结论血管紧张素Ⅱ通过激活p38丝裂原活化蛋白激酶/热休克蛋白27信号通路引起内皮细胞的纤维状肌动蛋白重排,导致细胞骨架损伤。
目的:研究高浓度葡萄糖对体外培养的视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞增生以及活性氧(reactive oxygen species,ROS)生成的影响。方法:体外培养人RPE(ARPE-19),随机分成4组,即正常对照组用含5.

7%(121/206)， ADAM17的阳性率为75.7%（156/206）。二者共表达率为50.48%（104/206）。FoxM1高表达与浸润深度、淋巴结转移明显相关(P<0.05)，与TNM分期以及肿瘤组织分化程度显著相关(P<0.001)。ADAM17高表达与年龄相关(P<0.05)，与淋巴结转移以及TNM分期显著相关(P<0.001）。荷瘤鼠成瘤实验显示，采用二甲双胍处理的治疗组，种植瘤生长过程中瘤体直径明显低于对照组，二者比较有显著差异(P
研究背景 胃癌是一种常见的恶性肿瘤,在美国,其发病率及死亡率位列第14位,每年新增胃癌确诊病例数约为21000人,死亡数约为10000人。胃癌患者中,男性所占比例较大,约占60%左右。胃癌是一种老年性疾病,70岁左右的人群发病率最高。在美国社会的各个种族中,非洲裔、亚洲裔以及西班牙裔美国人的胃癌发病率要高于白种人的胃癌发病率。在世界范围内,胃癌是第四大恶性肿瘤,其死亡率位居第二位。胃癌在东亚和南美洲发病率较高,但是近些年来,其发病率在发达国家呈逐年上升趋势,约占世界范围内胃癌新增病例数和死亡数的三分之二。而在美国,胃癌的发病率却在逐渐下降。在发达国家阵营中,日本和韩国的胃癌发病率则最高。胃癌在日本是最常见的恶性肿瘤。正因为如此,日本政府于上世纪七十年代启动了胃癌筛选计划,得益于该计划的实施,胃癌在日本的发病率下降了50%。尽管胃癌在日本的发病率在下降,但是其大部分都是末端胃癌。胃癌发病的危险因素主要是环境因素和基因遗传因素。1994年,国际癌症研究机构明确提出幽门螺杆菌是一种致癌物。大量的科学研究也证实胃癌发病与幽门螺杆菌感染有关。目前认为,幽门螺杆菌感染导致胃癌形成的主要机制是感染导致胃粘膜产生慢性炎症,长期的感染导致胃炎,主要集中在胃体,并伴有胃粘膜的萎缩。在一些患者中,这一病变还可导致胃肠道粘膜发生化生、异型增生,直至最后发生肠型腺癌。研究表明,在胃肠道粘膜发生化生的过程中,大量的基因存在异常表达,最终可能导致胃肠道粘膜发生癌变,例如,环氧酶2、细胞周期素蛋白D2、p53在胃粘膜化生过程中过表达,微卫星不稳定性,p27的表达降低以及CDX1、CDX2等转录因子在胃粘膜化生过程中的异常表达。这些均表明胃肠道粘膜化生是胃癌发病过程中的一个重要的危险因素。但是并不是每一个发生肠化生的患者都会发展成胃癌。研究表明,宿主炎症反应在这一过程中发挥重要作用。有文献报道,白介素1表达升高的患者发生胃癌的风险较大。此外,高盐食物,特别是一些含有大量的硝酸盐的腌制或者熏制的食物,再加上水果、蔬菜的摄入量较低,经常有这一饮食习惯的人群的发生胃癌的几率将会大大增加。这一作用机制,目前主要是认为食物中含有的硝酸盐成分在细菌的作用下转换成亚硝基化合物,而水果及蔬菜中则富含抗坏血酸,抗坏血酸能有效清除亚硝酸基化合物及氧自由基。目前,胃癌的主要治疗方式是手术切除,然后辅以放化疗,尽管这一治疗方式仍然行之有效,但是对胃癌转移患者却疗效不佳。因此,寻找胃癌新型早期诊断和预后评估因子仍然是一项迫在眉睫的任务。

无 细胞外信号分子,如致癌基因或抑癌基因,是许多学者的研究热点。作为分子标记物,p53,钙黏蛋白E (E-cadherin)和HER-2往往提示胃癌患者预后差。值得我们注意的是,各种各样的蛋白酶类,包括基质金属蛋白酶类(MMPS)和丝氨酸蛋白酶类,因其是细胞外基质物质的降解产物,往往也在胃癌发生-发展过程中发挥重要作用。

丝氨酸蛋白酶抑制剂2(SERPINE2),别称前列腺微管连接蛋白1(PN-1),是丝氨酸蛋白家族中的一员,主要负责调节凝血酶、尿激酶、血纤维蛋白溶媒和胰蛋白酶的活性。在慢性阻塞性肺疾病和小叶性肺气肿中丝氨酸蛋白酶抑制剂2作为一个敏感因子首次被发现。最近的研究表明,丝氨酸蛋白酶抑制剂2与肿瘤形成密切相关。有文献报道,丝氨酸蛋白酶抑制剂2在乳腺癌、结肠癌、口腔鳞状细胞癌等多种恶性肿瘤中呈现异常表达。此外,丝氨酸蛋白酶抑制剂2在前列腺癌中同时也是一种抑癌基因,有降低肿瘤细胞增殖和血管形成的作用。而恰恰相反,另有文献报道,丝氨酸蛋白酶抑制剂2在睾丸癌的移植物模型中有促进淋巴结转移的作用,提示其可能同时也是一个致癌基因。但是,丝氨酸蛋白酶抑制剂2在胃癌中的表达、其与胃癌患者预后的关系以及其在胃癌细胞中的生物学功能仍然鲜有报道。 VX-770体外 本实验通过应用实时定量免疫荧光聚合酶链式反应(real-time quantitativePCR.)测定SERPINE2mRNA在243例胃癌样本中的表达,研究其表达与胃癌各临床病理参数以及患者预后的关系。此外,我们还通过应用细胞转染、细胞增殖实验、软琼脂克隆集成实验、细胞迁移和浸润实验进一步研究SERPINE2胃癌细胞株SGC7901中的生物学功能。

方法： 1.应用实时荧光定量-聚合酶链反应(Real-time PCR)方法检测SERPPINE2mRNA在胃癌组织及对应正常胃黏膜组织中的表达情况； 2.为验证其生物学功能,对胃癌细胞SGC7901进行siRNA转染,其转染效率用蛋白质免疫印迹方法(western blot)进行验证。应用细胞增殖实验、软琼脂克隆集成实验、细胞迁移和浸润实验,分别测定SERPINE2对胃癌细胞SGC7901增殖、迁移和浸润能力的影响。 3.应用χ2检验或Fisher精确概率法检验SERPINE2mRNA表达与胃癌各临床各病理参数之间的关系；应用Kaplan-Meier法、log-rank分析进行假设检验生存分析,COX比例风险模型用于风险因素的单变量、多变量统计分析方法分析SERPINE2mRNA的表达对胃癌手术患者预后的影响。 5-Fluoracil solubility dmso 结果： 1.Real-time PCR:SERPINE2mRNA在癌旁组织,癌组织以及合并有淋巴结转移的胃癌组织中表达逐步上调。SERPINE2mRNA在胃癌组织、胃癌细胞SGC7901中表达较其在正常组织中的表达分别上调5.09倍、4.18倍,差异具有统计学意义(P=0.0089,0.0015)。与正常组织相比,SERPINE2mRNA在合并有淋巴结转移的胃癌组织中表达上调6.79倍,差异具有统计学意义(P=0.004)。而SERPINE2mRNA在无淋巴结转移的胃癌组织中的表达较其在正常组织中的表达上调2.24倍,差异无统计学意义(P=0.0682)。此外,值得我们注意的是,SERPINE2mRNA在合并有淋巴结转移的胃癌组织中的表达较其在无淋巴结转移的胃癌组织中的表达上调3.02倍,差异具有统计学意义(P=0.023)。 2.SERPINE2mRNA表达水平与胃癌临床参数之间的关系：我们规定SERPINE2mRNA表达上调超过1.25倍认为其在该样本中呈现高表达,反之则为低表达。数据显示,有157例样本呈现高表达(157/243,64.4%),86例样本呈现低表达(86/243,35.6%)。应用Fisher’s精确检验方法分析SERPINE2mRNA表达水平与胃癌各临床病理参数之间的关系,结果显示SERPINE2mRNA高表达与胃癌淋巴结转移(P=0.01)、远处转移(P=0.018)以及UICC分期(P=0.

21±0.39、2.27±0.28、2.21±0.27、1.93±0.30、1.64±0.31、1.85±0.41;人参皂苷Rg1各组p-JNK蛋白含量显著降低,与模型组比较有显著性差异(P＜0.05),其中10 mg/kg组p-JNK蛋白含量最高,40 mg/kg组p-JNK蛋白含量最低;10、40 mg/kg组与阳性药物对照组比较有显著性差异(P＜0.05),而20 mg/kg组与阳性药物对照组比较无统计学差异(P＞0.05)。 (2)假手术组、模型组、人参皂苷Rg1 10、20、40 mg/kg组和阳性药物对照组海马CA1区p-c-jun蛋白表达含量分别为0.51±0.07、2.02±0.17、1.21±0.11、0.87±0.22、0.69±0.07、0.80±0.18;模型组大鼠p-c-jun含量最高,假手术组p-c-jun含量最低;人参皂苷Rg1

20、40 mg/kg组p-c-jun蛋白含量显著降低,与模型组比较有显著性差异(P＜0.05),其中40 mg/kg组p-c-jun蛋白含量最低;人参皂苷Rg1 10 mg/kg组与阳性药物对照组比较有显著性差异(P＜0.05),而Rg1 20、40 mg/kg组与阳性药物对照组比较无统计学差异(P＞0.05)。 结论: 1.人参皂苷Rg1可以显著改善脑缺血再灌注大鼠的神经功能缺损症状。 2.人参皂苷Rg1能显著降低脑缺血再灌注大鼠海马CA1区神经元凋亡率;进一步研究显示Rg1可能通过抑制脑缺血后海马CA1区的JNK及其效应分子c-jun的活化,进一步调节死亡受体、线粒体依赖的凋亡途径,抑制脑缺血再灌注后的神经元凋亡,降低缺血后迟发性神经元死亡,控制缺血半暗带向梗死区的发展,以发挥其对脑缺血再灌注损伤的保护作用。
肝细胞癌是目前严重威胁人类生命安全的疾病之一。寻求高效低毒的抗肿瘤药物及治疗方法一直是科学界研究的热点。氯喹是老药,具有广泛的生理学效应,以往主要用来治疗疟疾、自身免疫性疾病等,近年来发现氯喹具有治疗肿瘤的作用。本研究旨在研究氯喹的抗肝细胞癌作用并对其作用机制进行探讨。采用MTT法检测氯喹对人肝细胞癌HepG2细胞生长抑制作用;采用流式细胞术检测氯喹对人肝细胞癌HepG2细胞周期和凋亡的影响;采用免疫印迹法检测氯喹对HepG2细胞周期蛋白cyclinB1及NF-кB、p-IкBa、ERK、p-JNK和P38蛋白表达水平的影响。结果表明,氯喹可抑制HepG2细胞生长,诱导细胞发生G2/M期阻滞而影响细胞周期进程以及通过抑制HepG2细胞周期蛋白cyclinB1表达、抑制NF-кB、p-IкBa及ERK和诱导p-JNK蛋白表达水平促进细胞凋亡和抑制细胞增殖有关。本研究结果将为肝细胞癌的治疗提供新的药物,并且对老药氯喹用于治疗肝细胞癌的临床应用提供重要的实验依据。
【目的】建立三种干细胞即神经干细胞(NSC)、骨髓问充质细胞(BMSC)和造血干细胞(HSC),及两种支持细胞即嗅鞘细胞(OEC)和雪旺细胞(SC)的体外培养技术,并将两种支持细胞分别和三种干细胞分别联合移植入SD大鼠和猴损伤的脊髓,筛选出细胞联合移植治疗SCI的优化方案,并探讨与其相关的分子表达,找出相对重要的调节分子,研究该分子在SCI中的作用。为寻找细胞移植治疗SCI的有效方法和相关的分子机制提供实验依据,为指导临床应用干细胞移植治疗SCI提供新思路。

更多 B-Raf inhibition 【方法】 1.建立嗅鞘细胞、雪旺细胞、神经干细胞、骨髓间充质细胞和造血干细胞的体外培养技术,并对培养细胞进行鉴定。 2.建立SD大鼠脊髓T10全横断损伤模型。将动物分假手术组、单纯脊髓全横断手术组、脊髓全横断手术注射免疫抑制剂组,NSC移植组、BMSC移植组、HSC移植组、SC细胞移植组,OEC移植组,以及NSC+OEC,BMSC+OEC,HSC+SC联合移植组。术后14d沿原切口暴露损伤脊髓,选取距离瘢痕5mm的脊髓上下端和瘢痕各取左右两个位点(脊髓上下端旁开脊髓后正中沟0.5mm,瘢痕处的左右侧位点参照脊髓上下端的左右位点定位),共6个位点用立体定向仪进行细胞移植(1.0×10~5/5uL,每个位点)。用5mg/kg/天腹腔注射环孢素(CsA)以减轻细胞移植后的免疫排斥反应。 GSK2656157细胞系 3.后肢运动功能评分:移植术后1～24周,采用双盲法由三名观察人员每周末进行大鼠后肢BBB运动功能评分。最后将三人所得分值求平均分后进行统计学处理。筛选出促进脊髓损伤功能恢复最好的一组为NSC+OEC联合移植组。 4.神经电生理检测:对NSC+OEC联合移植组,及其相应对照组进行神经电生理检测,进一步探讨NSC+OEC联合移植组促进SCI的实验依据。 (1)运动诱发电位(MEP)的测定 采用了神经电生理经颅磁刺激器对NSC+OEC联合移植组14d组,及其对照组假手术组、脊髓全横断手术注射免疫抑制剂组、NSC移植组和OEC移植组的MEP进行检测。3.6%水合三氯乙醛麻醉固定动物后,用盘状电极通过导电膏粘附于大鼠耳朵作为地线,记录电极置于大腿股四头肌,正负电极间距1cm,磁力板中心置于大脑皮质运动区之上刺激大脑皮质,以刺激强度40%刺激大脑皮质,记录股四头肌收集到得电位变化,待波形稳定且重复3次时中止并描记结果。

(2)皮层体感诱发电位(CSEP)的测定 本实验采用了皮层体感诱发仪(MEDTRONIC公司产品-KEYPOINY)对移植14d的NSC+OEC联合移植组,及其对照组假手术组、脊髓全横断手术注射免疫抑制剂组、NSC移植组和OEC移植组进行了检测。电流为方波脉冲型,刺激电极置于大鼠左下肢胫后神经处,正负电极间距为1cm,参考电极置于大鼠鼻正中皮下,记录电极置于大鼠右侧大脑皮层处皮下,接地电极置于大鼠耳朵。参数设置:扫描速度10ms/D,灵敏度10uv/D,滤波低频10Hz,滤波高频2KHz,刺激强度以引起大鼠后爪抖动为止。每次均记录300次波形后将其叠加平均得到最终的检测结果。 5.植入细胞存活检测: 在第12和24W末取部分动物用3.6%的水合氯醛进行腹腔注射麻醉,4%的多聚甲醛灌注固定后取材、冰冻切片,荧光显微镜下观察植入细胞存活,迁移。 6.PCR扩增疤痕组织的神经营养因子及其受体,和凋亡相关因子: 将14d、21d、28d的各组全横断脊髓(手术注射免疫抑制剂组、NSC移植组、OEC移植组和NSC+OEC联合移植组)活体取出疤痕部位及临近组织,匀浆、裂解、提取总RNA、逆转录合成cDNA,进行神经营养因子NGF、BDNF、NT-3、CNTF、PDGF-B、IGF-1、bFGF、TGF-β1,及其受体TrkA、TrkB和TrkC,和凋亡相关因子Bax、Bcl-2、Caspase-3及内参照β-actin的PCR扩增,琼脂糖凝胶电泳检测扩增产物。测光密度值,进行统计学分析,筛选出有变化的因子。推测其中与SCI有关的重要分子。 7.