4分化成熟的影响以及NF-κB信号通路在该激活效应中的作用。方法:1、采用MTT法检测拟康氏木霉胞外多糖(EPS)对小鼠树突状细胞系DC2.4细胞存活率的影响,以不同浓度EPS处理DC2.4细胞24 h后检测。2、用一定浓度的拟康氏木霉胞外多糖(EPS)处理静息状态下的DC2.4细胞,在不同时间点取样封片,倒置显微镜观察EPS引起细胞形态的变化。3、用流式细胞仪检测EPS处理前后DC2.4细胞表面分子CD11c、CD86、CD80、MHC-II表达情况以及细胞吞噬活性的变化。4、用酶联免疫吸附实验检测EPS处理后细胞因子IL-12p70分泌量的变化。5、采用免疫荧光染色技术观察EPS促使DC2.4细胞核转录因子NF-κB亚基p65发生核移位。6、用EPS处理DC2.4细胞后裂解细胞提取胞质蛋白用Western

Pomalidomide blotting技术检测NF-κB的抑制蛋白IκBa的降解和丝裂原活化蛋白激酶p38MAPK的磷酸化。7、用NF-κB和p38MAPK的抑制剂(BAY 11-7082、SB 203580)预处理细胞后再与EPS一起孵育取上清,检测IL-12p70含量与EPS单独处理时的差异。结果:1、MTT法检测发现EPS在2.5~400μg/mL剂量范围内对DC2.4细胞无明显细胞毒性。2、对照组DC2.4细胞呈半贴壁状态,形状不规则呈星形、蝌蚪形或梭形,加入EPS处理10 h后,与对照组相比,细胞树突分支增加、增粗、近圆形,由小渐大,多边形或具有规则的多分支的长突起。3、流式细胞仪检测结果显示经EPS诱导后,细胞表面分子的表达率为CD11c35.31%、CD86 43.49%、CD80 64.21%、MHC-II 53.66%,与空白对照组(RPMI-1640组)相比均有明显升高;流式细胞仪检测DC2.4对FITC-dextran吞噬作用结果显示,EPS组为27.38%,与空白对照组(RPMI-1640组)相比吞噬作用明显下降。4、酶联免疫吸附实验结果显示,EPS组含量为151 pg/mL,与空白对照组(RPMI-1640组)相比能显著提高细胞因子IL-12p70分泌量。5、免疫荧光染色技术显示,对照组DC2.4细胞内p65亚基荧光多分布松散,荧光强度较弱;而经EPS处理后,DC2.4细胞内p65亚基荧光多分布集中于核,荧光强度较强,表明EPS可以促使p65亚基发生核移位,激活核转录因子NF-κB。6、Western 也许 blotting结果显示EPS可以明显促使IκBa发生降解,p38MAPK发生磷酸化,提示EPS表明可以激活DC2.4细胞中的核转录因子NF-κB和p38MAPK。7、抑制剂(BAY

11-7082、SB203580)预处理细胞后,结果显示IL-12p70含量与EPS单独作用相比时显著下降,下降幅度分别为46.34%、42.68%,表明EPS可以通过NF-κB和p38MAPK两条信号转导通路来激活DC2.4细胞。结论:1、EPS能够促进DC2.4细胞分化成熟,上调DC2.4细胞表面分子CD11c、CD86、CD80、MHC-II的表达。2、EPS抑制DC2.4细胞对FITC-dextran的吞噬。3、EPS能够促进DC2.4细胞分泌IL-12p70。4、EPS通过NF-κB和p38MAPK信号转导通路来上调DC2.4细胞的免疫活性。
目的

肺炎链球菌（Streptococcus pneumoniae, S.pn）是临床常见的能够引起肺炎、脑膜炎、中耳炎和败血症的革兰阳性菌。在发展中国家肺炎链球菌性败血症致死占5岁以下儿童可预防性死亡的25%，每年导致120多万婴儿死亡。肺炎链球菌的溶血素（Pneumolysin，PLY）在细菌致病和诱导宿主防御应答中发挥重要作用，但是目前对宿主防御肺炎链球菌溶血素的分子机制尚不十分清楚。 细菌入血后，血液中的免疫细胞会与细菌及产物发生直接作用或者与感染组织分泌的信号分子发生间接的相互作用，从而引发宿主免疫防御。在这一过程中，单核细胞在机体的免疫防御中发挥了重要作用。但是目前关于单核细胞与PLY相互作用机制的研究少有报道，所以本文采用人急性单核细胞白血病单核细胞株（human acute monocyticleukemia cell line，THP-1）与PLY在体外共孵育的方式来初步探讨单核细胞与PLY相互作用的机制，研究单核细胞凋亡情况及凋亡通路信号分子的变化情况，为进一步研究PLY触发宿主瞬时和早期固有免疫应答机制奠定基础。 时间 方法 1．采用下述实验方法研究PLY对THP-1细胞生长状态的影响：MTT法测定PLY对THP-1细胞的增殖抑制情况；瑞氏染色观察PLY对THP-1细胞形态的影响；透射电子显微镜观察PLY诱导THP-1细胞亚细胞结构改变情况；流式细胞术检测细胞凋亡率；琼脂糖凝胶电泳观察凋亡细胞DNA片段化现象；同时将△A146PLY(PLY的第146位氨基酸发生缺失突变，无溶血活性)处理组作为阴性对照。 2．从以下几方面初步探讨PLY诱导THP-1细胞凋亡的免疫机制：分光光度法测定Caspase3,8,9活性；免疫细胞化学方法测定凋亡相关蛋白Bax、Bcl-xl及信号分子p38MAPK蛋白表达的变化；通过Western-Blot进一步验证p38MAPK总蛋白表达水平及其磷酸化水平变化；p38MAPK抑制剂处理后通过流式细胞术测定THP-1细胞凋亡率变化情况；同时将△A146PLY处理组作为阴性对照。 结果 1．将THP-1细胞分别与0.05、0.1、0.5、1、2.

020,r=0.138), p-S6K1的表达存在组织学分级之间的差异(p=0.029,r=0.044), p-mTOR和p-S6K1与ki-67的表达存在统计学差异(p值分别为0.028和0.011,r值分别为-0.130和-0.151)。三指标与各临床指标的单因素分析显示均与无病生存率无明显统计学差异,多因素分析显示不同民族(p=0.000)、BMI指数(p=0.048)、ki-67的表达(p=0.004)以及p-S6K1的表达(p=0.000)与无病生存率相关。无病生存的Log 这个 Rank检验的X2值分别为0.274,0.920和0.144,p值分别为0.619,0.337和0.704, p-mTOR、p-4EBP1、p-S6K1的表达与无病生存率之间无明显统计学差异。结论：mTOR信号通路及其下游分子4EBP1和S6K1在浸润性乳腺癌组织中被显著激活。磷酸化4EBP1和S6K1在细胞浆中表达增高可能与乳腺癌的发生相关。p-4EBP1的表达可能是维、汉民族之间差异的原因之一；4EBP1和S6K1的表达不能作为乳腺癌预后的独立指标。

第二部分：mTOR信号通路及其下游分子4EBP1和S6K1蛋白表达在转录水平的调控研究 目的：探讨mTOR及其下游分子4EBP1和S6K1蛋白在新疆维汉乳腺浸润性乳腺癌组织中的表达情况,以及是否受其相应mRNA表达的调控。方法：随机选取285例于2005年3月-2009年9月期间就诊于新疆医科大学附属肿瘤医院的维吾尔族、汉族女性浸润性乳腺癌患者癌组织与癌旁组织病理切片,使用免疫组化方法染色,通过染色结果评价磷酸化mTOR及其下游分子4EBP1和S6K1的表达情况。选取46对维、汉新鲜乳腺癌组织和癌旁组织样本,使用Western-blot蛋白检测方法检测mTOR及其下游分子4EBP1和S6K1的表达情况。随机收集2012年1月至2012年6月期间126例就诊于新疆医科大学附属肿瘤医院的新鲜乳腺癌及癌旁组织标本,使用荧光定量rtPCR方法检测mTOR、4EBP1和S6K1在癌组织和癌旁组织中的mRNA水平并进行对照研究。结果：新疆维、汉族浸润性乳腺癌组织和癌旁组织病理切片中p-mTOR的表达阳性率分别是72%(206/285)和60%(170/285),p=0.001;

BVD-523体外 p-4EBP1的表达阳性率分别是26%(74/285)和8%(24/285),p=0.000；p-S6K1的表达阳性率分别是42%(120/285)和18%(50/285),p=0.000,P值均小于0.01,差别均有显著统计学差异,p-mTOR、p-4EBP1、p-S6K1的在癌组织中的表达均明显高于癌旁组织。Western-blot结果提示p-mTOR在癌组织中表达的灰度平均值是1.490,癌旁组织是0,p=0.001;p-4EBP1在癌组织中表达的灰度平均值是1.759,癌旁组织是1.676,p=0.725;p-S6K1在癌组织中表达的灰度平均值是4.407,癌旁组织是3.657,p=0.473,三者在癌组织中的表达均高于癌旁组织。mTORmRNA在乳腺癌组织和癌旁组织中表达的平均水平分别是14.83、19.78,

t=-1.376, p=0.174; S6K1mRNA在乳腺癌组织和癌旁组织中表达的平均水平分别是66.06,87.51, t=-1.15, p=0.254;4EBP1mRNA在乳腺癌组织和癌旁组织中表达的平均水平分别是12.70、10.33,t=0.379,p=0.706,三者差异均无明显统计学意义(p>0.05)。结论:mTOR信号通路及其下游分子4EBP1和S6K1在浸润性乳腺癌组织中的表达明显高于癌旁组织,该信号通路在浸润性乳腺癌组织中被显著激活。mTOR及其下游分子4EBP1和S6K1mRNA在癌组织中的表达未见明显增高,其相应蛋白质表达的调控位点可能位于转录后水平或蛋白质水平。 第三部分：mTOR信号及其下游分子4EBP1和S6K1在新疆维、汉不同民族浸润性乳腺癌中表达的差异研究目的：探讨mTOR及其下游分子4EBP1和S6K1在新疆维吾尔族和汉族浸润性乳腺癌组织中的表达差异情况。方法：随机选取285例于2005年3月1日-2009年9月30日就诊于新疆医科大学附属肿瘤医院的维吾尔族、汉族女性浸润性乳腺癌患者癌组织病理资料,使用免疫组化方法检测磷酸化的mTOR及其下游分子4EBP1和S6K1的表达状况；选取63例维、汉新鲜乳腺癌组织样本,使用荧光定量rtPCR方法进一步检测mTOR及其下游分子4EBP1和S6K1的mRNA表达状况。结果：免疫组化染色结果显示,在维吾尔族和汉族乳腺癌组织中,p-mTOR的表达阳性率分别是54%和46%(p=0.067), 而且 p-4EBP1的表达阳性率分别是62%和38%(p=0.020),p-S6K1的表达阳性率分别是49%和51%(p=0.695)。荧光定量rtPCR结果显示,维、汉乳腺癌组织中mTORmRNA2－ΔΔct平均值分别为10.88和19.7,差异有统计学意义(p=0.045),4EBP1mRNA2－ΔΔct平均值分别为52.72和80.74,差异无统计学意义(p=0.128),S6K1mRNA2－ΔΔct平均值分别为7.97和17.92,差异无统计学意义(p=0.404)。结论：在mTOR信号通路中,p-mTOR和p-S6K1蛋白的表达无明显维、汉民族差异,而p-4EBP1在维吾尔族中的表达显著升高,且存在统计学差异,可能成为研究维、汉不同民族之间乳腺癌差异及个体化治疗的新方向。维、汉之间mTORmRNA表达水平存在差异,但因P值接近0.

0和1.0μM NaAsO2的RPMI1640培养液培养HaCaT细胞48～72h,如此重复培养30代(约15周)后,观察细胞增殖情况和恶性程度；用0.0、0.5、1.0、2.0、5.0和10.0μM NaAsO2处理HaCaT细胞24或48h,观察细胞增殖、DNA损伤和细胞凋亡情况。 二、软琼脂集落形成实验 将恶性转化和相关对照的HaCaT细胞与含0.7%低熔点琼脂糖的RPMI1640培养液等体积混合后,铺于含0.7%低熔点琼脂糖的底层培养基上,待其凝固后,表面覆以适量培养液,37;C5%CO2培养,每3-4天换液一次,4周后终止培养并计数细胞集落数。 三、裸鼠皮下致瘤实验 将恶性转化和相关对照的HaCaT细胞按1×107/0.2mL密度注射于Balb/c裸鼠右侧腋窝皮下,饲养4周后将肿瘤组织取出,测量肿瘤体积、固定,并作组织切片、HE染色后进行组织病理学鉴定。 四、逆转录PCR (RT-PCR) 提取细胞总RNA并测定其浓度,逆转录成cDNA后,分别应用mot-2、mdm2、 survivin、CD34和K5引物扩增后用2%琼脂糖凝胶电泳检测。 五、Western blot 提取细胞总蛋白并测定浓度,用SDS-PAGE分离蛋白、半干法转膜,用特异性一抗4℃孵育过夜,进一步常温结合二抗1h后,用增强型化学发光法检测相关蛋白表达及磷酸化水平。

那个 六、Southwestern blot 提取细胞总蛋白,SDS-PAGE分离、半干法转膜后,将膜变性、复性处理,用生物素标记的κB序列DNA探针与膜杂交,通过化学发光法检测κB序列DNA与NF-κB的结合情况。 七、免疫共沉淀 提取细胞总蛋白,用IP抗体与蛋白混合过夜将靶蛋白沉淀后,用Western blot法检测蛋白-蛋白相互作用或用Southwestern blot检测DNA-蛋白相互作用。 八、免疫荧光法检测p53的核转位水平 将不同因素处理的HaCaT细胞用兔抗人p53一抗孵育24h后,用Cy3标记的山羊抗兔二抗孵育1h,用DAPI将细胞核染色15mmin后荧光显微镜下观察p53的胞内分布以检测p53的核转位水平。

九、悬浮集落形成实验 将1×104细胞接种至低吸附24孔板中,用含10ng/ml 还有 EGF和10ng/ml FGFβ的无血清DMEM-F12培养液培养,每2天进行一次半定量换液,如此连续培养2周后,镜下观察拍照并计数。 结果 一、亚砷酸钠对HaCaT细胞增殖和恶性转化及DNA损伤和凋亡的影响 用0.0、0.5、1.0、2.0、5.0和10.0μM NaAsO2处理HaCaT细胞24h;分别用0.0和1.0μM NaAsO2慢性处理HaCaT细胞30代(约15周)。结果发现0.5、1.0和2.0μNaAsO2引起HaCaT细胞增殖升高,1.0μM NaAsO2引起增殖最明显,并出现γ-H2AX水平轻度升高；而5.0和10.0μM NaAsO2引起HaCaT细胞增殖降低、且γ-H2AX水平和断裂caspase3水平均升高；1.0μM NaAsO2慢性处理HaCaT细胞能在裸鼠皮下形成肿瘤,肿瘤组织病理学切片显示为低分化上皮样癌细胞。结果显示NaAsO2在低浓度引起HaCaT细胞增殖和恶性转化：而在高浓度则引起HaCaT细胞DNA损伤和细胞凋亡。 二、亚砷酸钠对HaCaT细胞p53/survivin和MAPKs及NF-κB信号通路的影响 用0.0、1.0、5.0和10.0μM NaAsO2处理HaCaT细胞24h,结果发现1.0μMNaAsO2引起HaCaT细胞p-p53水平降低,而p-ERK、p-NF-κB/RelA、survivin和mot-2水平升高；5.0和10.0μM 可能 NaAsO2引起HaCaT细胞p-JNK、p-p38和p-p53水平升高,而survivin水平降低。结果显示NaAsO2在低浓度主要激活ERK和NF-κB信号通路、抑制p53功能而引起survivin和mot-2水平升高,而高浓度则主要激活JNK和p38信号通路、激活p53功能和引起survivin水平降低。

三、MAPKs和NF-κB信号通路在亚砷酸钠对p53的影响中的作用 分别用0.0和10.0μM ERK抑制剂U0126、NF-κB抑制剂Bay11-7082、JNK抑制剂SP600125和p38抑制剂SB203580处理HaCaT细胞6h后,再分别用0.0、1.0和10.0μM NaAsO2处理HaCaT细胞24h,结果发现阻滞ERK和NF-κB均使1.0μM NaAsO2所致HaCaT细胞p-p53降低回升,且阻滞ERK使1.0μMNaAsO2所致HaCaT细胞核内p53荧光强度降低回升；阻滞JNK则使10.0μMNaAsO2所致HaCaT细胞p-p53水平和核内p53荧光强度升高回降。结果显示ERK和NF-κB信号通路主要参与低浓度NaAsO2所致细胞p53抑制过程,JNK信号通路则主要参与高浓度NaAsO2所致细胞p53激活过程。 四、ERK通过NF-κB调控mot-2和survivin在低浓度亚砷酸钠所致HaCaT细胞恶性转化中的作用 用20.0nM NF-KB/RelA-siRNA和con-siRNA处理HaCaT细胞12h,或用0.0和10.0μM ERK抑制剂U0126处理HaCaT细胞6h后,再用0.0和1.0μMNaAsO2处理HaCaT细胞24h,结果发现阻滞ERK信号通路可以阻止低浓度NaAsO2所致NF-κB与κB序列DNA结合能力；关闭NF-kB或抑制ERK均可使1.0μM NaAsO2所致HaCaT细胞mot-2和survivin的：mRNA和蛋白水平升高回降。结果显示低浓度NaAsO2所致HaCaT细胞mot-2和survivin表达上调是通过ERK/NF-κB信号通路完成的。 分别用0.0和10.0μM ERK抑制剂U0126处理HaCaT细胞6h后,再用0.0和1.0μM NaAsO2处理HaCaT细胞24～48h,如此反复处理30代,结果发现阻滞ERK信号通路可阻止1.

986±1.784,Ptch mRNA 11.272±0.295,Smo mRNA 10.185±0.716),明显高于同期正常对照组(P
Hedgehog信号通道广泛地存在于人的体内,它主要参与了胚胎的发育与形成。在成年人体内,除了参与机体组织的维持以及修复外Hedgehog信号通道总是处于抑制状态。当它异常激活时会形成一系列的疾病,例如基底细胞癌以及髓母细胞瘤、乳腺癌、结肠癌、卵巢癌、前列腺癌等。除了环巴胺及其类似物外,已经发现了一些对Hedgehog信号通道具有抑制作用的小分子化合物,特别是GDC-0449于2012年1月被FDA批准用于治疗基底细胞癌,证明Hedgehog信号通道是可以用于治疗癌症的一个新靶点。本文主要综述了已经报道的对Hedgehog信号通道具有抑制作用且具有代表性的小分子抑制剂的结构以及它们相关的生物数据。
目的检测人肺癌组织中的Hedgehog信号通路主要成分SHH、Gli-1和血管内皮生长因子(VEGF)的表达,探讨其与不同临床病理特征的相关性。方法选取2013年3—10月广西医科大学第一附属医院临床病理明确诊断为肺癌,并行外科手术治疗的患者72例,取癌组织及癌旁组织(距离癌组织5

cm),另选取同时期良性肺病变组织30例。收集肺癌患者临床病理资料,免疫组织化学法检测SHH、Gli-1和VEGF的表达,实时荧光定量PCR检测其mRNA的表达。结果肺癌组织中SHH阳性表达率为73.6%(53/72),癌旁组织为16.7%(12/72),良性肺病变组织为6.7%(2/30),差异有统计学意义(χ2=64.819,P<0.05)。不同性别、年龄、吸烟史、分化程度、术前放化疗肺癌患者Gli-1阳性表达率比较,差异均有统计学意义(P<0.05);不同淋巴结转移、远处转移、TNM分期、早晚期、分化程度、病理类型、术前放化疗肺癌患者VEGF阳性表达率比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。肺癌组织中SHH、Gli-1和VEGF的表达与mRNA相对表达量均呈正相关(P
肺癌是当今世界上严重威胁人类健康与生命的一种恶性肿瘤,其发病率在逐年增加。最新流行病学数据显示,我国肺癌发病率已占据恶性肿瘤发病率的第1位。尽管在过去的数十年间对肺癌进行了较为深入的研究,但肺癌患者的早期诊断及远期存活并无显著改善。而非小细胞肺癌(NSCLC)占所有肺癌病例的80%~85%,并且大部分患者就诊时已属于中晚期,疗效不佳。近年来研究发现Sonic
Hedgehog(Hh)信号通路在正常人类胚胎发育及胚胎形成后细胞的分化过程中发挥着重要的作用。研究表明,Hh信号通路异常激活与胰腺癌的发生、发展密切相关。深入探讨Hh信号通路转导机制及其与胰腺癌的关系,有望为胰腺癌的早期诊断和分子靶向治疗提供新的思路。
目的本实验旨在研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古霉素A(TSA)联合Hedgehog(Hh)信号通路阻断剂环巴胺(CYA)干预对胰腺癌PANC-1细胞凋亡的影响并初步探讨其可能机制。方法采用CCK8方法检测曲古霉素A、环巴胺作用24

NVP-BEZ235 并且 h对PANC-1细胞50%抑制浓度(IC50)。用Hochest 33258荧光染色观察曲古霉素A、环巴胺单独及联合处理PANC-1细胞24 h后凋亡;荧光定量聚合酶链式反应(Q-PCR)检测Hedgehog信号通路关键分子及凋亡相关基因mRNA表达的变化;蛋白免疫印迹法检测凋亡相关蛋白(Bcl-2、活化胱天蛋白酶-3,活化胱天蛋白酶-8,活化胱天蛋白酶-9)及Hedgehog通路关键分子蛋白(Gli1、Smo、Ptc-1)表达的改变;细胞免疫荧光标记法检测Gli1蛋白表达的变化。结果 不 Hochest 33258染色显示,曲古霉素A及环巴胺均可诱导胰腺癌PANC-1细胞凋亡,24 h IC50分别为(0.51±0.07)μmol·L-1和(33.6±2.3)μmol·L-1,两者联合指数为0.835,具有低度协同作用。曲古霉素A及环巴胺干预后Bcl-2 mRNA表达下降,Bax mRNA表达上调,尤以联合组明显。曲古霉素A 0.5μmol·L-1干预可抑制Gli1 mRNA的表达,联合环巴胺20μmol·L-1后对Hedgehog通路的抑制效应进一步增强,降低Gli1、Smo mRNA表达量,上调Gli3 mRNA的表达。Western印迹结果显示,曲古霉素A

0.5μmol·L-1、环巴胺20μmol·L-1单独及联合处理PANC-1后,凋亡相关蛋白胱天蛋白酶3、胱天蛋白酶8和胱天蛋白酶9活化程度进一步上升,凋亡抑制因子Bcl-2的表达明显下降,Hedgehog信号关键分子蛋白Gli1、Smo、Ptc-1表达均明显下降,以联合组最为明显。细胞免疫荧光结果也显示Gli1表达明显下降。结论曲古霉素A、环巴胺可协同抑制Hh通路,诱导胰腺癌PANC-1细胞的凋亡。
肺癌干细胞的发现及对其生物学特性的认识,为肺癌的研究及临床治疗提供了新的思路。文章就肺癌干细胞的发现、来源、表面标志、调控机制及相关治疗策略的研究进展作一综述。
信号转导是各类信号通过细胞膜或胞内信使分子引起细胞基因表达改变的过程。因此,当细胞信号转导过程发生障碍或异常,必然会导致细胞生长、分化、代谢及生物学特征异常,从而引起各种疾病甚至肿瘤的发生。目前已知与肺癌相关的细胞信号转导通路有Wnt、Notch、酪氨酸激酶和Hedgehog信号转导通路。现将近年来的研究进展作一综述。
干细胞是一类具有自我更新和多向分化潜能的细胞群体。越来越多的研究表明,干细胞异常分化可导致肿瘤。并且在肿瘤组织中存在部分细胞,它们具有干细胞的多种特性,被称为肿瘤干细胞(cancer stem cell,CSC)。肿瘤干细胞理论的提出,为肿瘤的治疗与研究提供了新的方向。本文综述了正常干细胞异常分化、肿瘤干细胞的存在和特性、肿瘤干细胞靶向治疗的前景及所面临的问题等方面的研究进展。
Hedgehog信号通路是近年来抗肿瘤靶向治疗药物研究的一个新热点.本研究以4-(嘧啶-2-氨基)苯甲酰胺为母核,基于先导化合物1的构效关系,设计并合成了14个未见文献报道的4-(嘧啶-2-氨基)苯甲酰胺类Hedgehog信号通路抑制剂,并进行了初步的抗Hedgehog信号通路活性筛选.结果表明:所合成的化合物均表现出较好的Hedgehog信号通路抑制活性,其中化合物8e的活性最好,IC50为5.

05）。联合用药组上述蛋白表达与单用雷帕霉素组无明显差异。 结论 1雷帕霉素具有抗肿瘤作用，联合顺铂有协同效应，可增加传统化疗药顺铂的促凋亡能力，增强肿瘤细胞对于顺铂的化疗敏感性。 2雷帕霉素单独及联合顺铂作用呈现明显的时间依从性，72h效果最明显。 3雷帕霉素可能通过阻断mTOR信号通路，同时抑制抗凋亡蛋白Bcl-2的表达，引起细胞G1期阻滞，促进细胞凋亡，来发挥抗肿瘤及化疗增敏作用。
目的： 而且 子宫内膜癌(endometrial carcinoma, EC)是女性生殖道常见的三大恶性肿瘤之一,其中80%-90%为子宫内膜样腺癌(endometrioid adenocarcinoma, EA),子宫内膜上皮内瘤变(endometrial intraepithelial neoplasia, EIN)是单克隆性生长的子宫内膜样腺癌的癌前病变,将其从子宫内膜增生中分离出来,并将传统模式“子宫内膜增生—非典型增生—子宫内膜样腺癌”改变为“良性子宫内膜增生—EIN—子宫内膜样腺癌”。磷酯酰肌醇3激酶(phosphatidylinositol3–kinase,

P13K)/蛋白激酶B (protein kinase B, PKB/Akt)是细胞内重要的信号转导通路,在广泛的人类肿瘤谱中失调,该通路某些成分的突变与细胞增殖、凋亡、癌性转化、浸润转移等众多过程密切相关。本文通过检测PI3K. cyclinD1、P27和GSK-3β (glycogen synthase kinase-3p)蛋白在增殖期子宫内膜、良性增生性子宫内膜、EIN、子宫内膜样腺癌中的表达水平及其相关性分析,探讨这些PI3K/Akt通路的下游分子在子宫内膜癌前病变发生发展过程中的作用机制。 方法： 复查2009年至2011年天津医科大学总医院病理科刮宫标本常规HE切片,筛选出增殖期子宫内膜(proliferative endometrium, PE)10例；子宫内膜单纯性增生(simple hyperlasia endometrium)15例,子宫内膜复杂性增生(complex hyperlasia endometrium)15例,单纯性增生与复杂性增生合为一组即良性增生性子宫内膜(benign hyperlasia endometrium, Dabrafenib BE)30例；根据新标准复查切片,找出EIN38例并选取30例；子宫内膜样腺癌(EA)20例。运用免疫组织化学的方法SP法分别检测各实验组中PI3K、cyclinD1、P27、GSK-3p蛋白的表达水平,采用SPSS16.0软件包分析实验数据(Kruskal-WallisH检验、Mann-WhitneyU检验、Wilcoxon秩和检验及Spearman秩相关分析)

结果： 1.PI3K在增殖期子宫内膜、良性增生性子宫内膜、EIN、子宫内膜样腺癌中表达依次增高,组间表达差异有统计学意义(p<0.01)。其中良性增生性子宫内膜组的表达高于增殖期子宫内膜组(p<0.01),EIN组的表达高于良性增生性子宫内膜组(p<0.01),子宫内膜样腺癌组的表达高于EIN组(p<0.05),EIN组的表达低于良性增生性子宫内膜组(p0.05)。 4. GSK-3β胞浆的表达在增殖期子宫内膜、良性增生性子宫内膜、EIN、子宫内膜样腺癌组间表达差异有统计学意义(p<0.01)。良性增生性子宫内膜组的表达高于增殖期子宫内膜组(p<0.05),EIN组的表达高于良性增生性子宫内膜组(p<0.01),子宫内膜样腺癌组的表达高于EIN组(p<0.01);与P27表达互为负相关(p<0.01)。PI3K、cyclinD1、GSK-2表达与组别、年龄呈正相关(p<0.01),P27表达与组别、年龄呈负相关(p
目的： 1.检测已经建立的非小细胞肺癌放射抗拒细胞系的放射敏感性。 2.初步探讨PTEN/PI3K/AKT/mTOR信号通路抑制剂LY294002和Rapamycin对大分割放疗的增敏作用。 方法： 1.体外培养A549、A549R2Gy-R和A549R4Gy-R细胞。3种细胞均接受射线照射,克隆形成实验检测照射后3种细胞增殖能力的差异；免疫荧光实验检测3种细胞放疗后24h残留的yH2AX焦点的差异。

2.体外培养A549、A549R2Gy-R和A549R4Gy-R细胞。实验分组：对照组(A549、A549R2Gy-R和A549R4Gy-R细胞)、LY294002组、Rapamycin组、LY294002+Rapamycin组,给予相应的射线照射。通过克隆形成实验检测加入抑制剂LY294002和／或Rapamycin后大分割放疗抗拒细胞放疗后的增殖能力；通过免疫荧光实验检测加入抑制剂LY294002和／或Rapamycin后大分割放疗抗拒细胞24h后的yH2AX焦点数。应用SPSS17.0统计分析软件包,实验数据以均数±标准差(x士S)表示,在检验数据正态分布及方差齐性的条件下,多组间数据比较采用方差分析,各组组间差异的比较用LSD—t检验。以P值<0.05),单抑制剂组与A549对照组相比未见明显差异,而双抑制剂组较A549组明显增加(P
优势结构(privileged selleck公司

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selleck公司 structures)的概念在1988年被Evans等首次提出,它是指能够与多种受体结合的单一分子骨架(A single molecular framework able to provide ligands for diverse receptors)。2000年Patchett和Nargund进一步阐述了优势结构的概念：通过合理的结构修饰,能够与多种受体结合的分子骨架称为优势结构,它具有“似先导化合物”、“似药”等性质。优势结构的概念被提出以后,以优势结构为骨架快速构建小分子化合物库,然后通过活性筛选寻找先导化合物的理念,吸引了药物化学家的极大兴趣。本论文的工作主要是围绕噻吩并嘧啶类小分子库的合成方法学研究和多样性导向的化合物库设计、合成及其相关生物活性的评价来展开的。 噻吩并嘧啶是典型的优势结构之一,许多生物活性化合物都含有噻吩并嘧啶结构单元。在本课题组前期对氯代嘧啶类化合物合成方法学研究的基础上,我们设计并合成了具有2-3个不同反应活性位点的噻吩并嘧啶砌块,作为构建该类小分子库的起始原料。基于多样性导向合成策略(DOS),通过亲核取代和Suzuki偶联反应,我们初步合成了一个含有130个化合物的噻吩并嘧啶小分子库1,并在蛋白激酶c-Met、腺苷受体A1R和PI3K等靶点上对这些化合物的生物活性进行了评价： 1)c-Met:结果表明库1中的绝大部分化合物不是很好的c-Met抑制剂。 2)A1R：化合物库1在腺苷受体A1R上初步发现了9个抑制率大于50%的阳性化合物,其中LXY-67是活性最好的化合物,在浓度是5μg/mL时,对腺苷受体A1R的抑制率为91.58%,在活性的基础上我们通过构效关系总结,合成了含有11个化合物的聚焦化合物库2,发现了活性优于LXY-67的化合物LXY-83,在浓度是5μg/mL时,其对腺苷受体A1R的抑制率为92.