不同剂量芥子气所致小鼠染毒耳郭皮肤损伤模型的建立 芥子气所致皮肤损伤的严重程度与染毒剂量有关，染毒剂量越高，皮肤肿胀越明显。本研究采用文献中常用的32mg/mL芥子气5μL（低剂量）和在溶剂中达最大溶解度，即128mg/mL，5μL（高剂量）两个染毒剂量建立了不同损伤程度的芥子气小鼠耳郭染毒皮肤损伤模型，肿胀率分别为154.7%和204.8%。 2.甾体类抗炎药地塞米松对芥子气耳郭染毒小鼠皮肤损伤的影响 染毒前30min灌胃给予甾体类抗炎药物地塞米松（5mg/kg）对芥子气染毒小鼠耳郭肿胀无影响。 3.非甾体类抗炎药吲哚美辛抗芥子气损伤的药效评价 染毒前30min灌胃给予非甾体类抗炎药吲哚美辛（10mg/kg）对高、低剂量芥子气染毒小鼠耳郭肿胀均有显著地抑制作用，肿胀抑制率分别是40.0%和25.7%。

二、新型具有抗炎活性药物抗芥子气损伤的药效评价 芥子气致伤机制复杂，涉及多种炎性反应环节，因此本研究还进一步针对芥子气致炎的其它环节开展了研究。 1.辣椒素受体激动剂抗芥子气损伤作用评价 辣椒素受体激动剂可通过耗竭P物质抑制炎症反应，代表药物为奥伐尼。临床上用于减轻神经性炎症以及镇痛止痒等。目前仅有少量文献报道，其减轻芥子气所致皮肤损伤，但作用特点尚不明确。本研究以非甾体抗炎药吲哚美辛为阳性对照，考察了奥伐尼对染毒皮肤损伤的影响。结果表明，局部涂抹给予奥伐尼（0.125、0.25和0.05mg/耳）对低剂量芥子气染毒小鼠耳郭肿胀均有显著地抑制作用，且强于吲哚美辛，肿胀抑制率分别是68.2%、87.0%和81.6%；奥伐尼对高剂量芥子气染毒小鼠耳郭肿胀无明显影响。 进一步采用伊红-苏木素染色，观察奥伐尼对低剂量芥子气染毒耳郭皮肤病理损伤的影响。结果表明，奥伐尼可显著降低芥子气诱导炎性细胞浸润和表皮细胞坏死，且保护作用强于吲哚美辛。

这个 2. p38抑制剂抗芥子气损伤活性筛选与评价 p38激酶居于炎性反应的中央环节，其抑制剂是近年来抗炎免疫药理学研究的热点之一。BIRB796是第一个进入III期临床试验的p38抑制剂。本课题与化学合成实验室合作，获得了50个BIRB796类似物，并对它们的抗芥子气损伤活性进行了筛选和评价。 2.1BIRB796类似物的抗炎活性初筛 采用LPS诱导小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞的体外模型，以p38抑制剂SB203580作为阳性对照，观察了50个化合物的抗炎活性。结果表明，化合物p38-98、p38-99、p38-123细胞毒性低，且可显著性抑制LPS诱导TNF-α分泌，IC50分别为10.33μM、48.92μM和19.39μM。 2.1.1p38抑制剂抗芥子气损伤细胞水平药效评价 2.1.1.1p38抑制剂对芥子气染毒HaCaT细胞活力的影响 采用芥子气染毒HaCaT细胞模型，观察了p38抑制剂SB203580、BIRB796以及活性化合物p38-98、p38-99对染毒细胞的保护作用。结果表明，SB203580、BIRB796、p38-98、p38-99在染毒后6h时可显著改善200μM芥子气所致细胞活力的降低。 MDV3100溶解度 点击此处 2.1.1.2p38抑制剂对芥子气染毒HaCaT细胞IL-6和IL-8分泌的影响 采用芥子气染毒HaCaT细胞模型，观察了p38抑制剂SB203580、BIRB796以及活性化合物p38-98、p38-99对染毒细胞炎性介质分泌的影响。结果表明，SB203580、BIRB796、p38-98、p38-99均可显著地抑制炎性细胞因子IL-6和趋化因子IL-8的分泌，并呈良好的剂量依赖关系。在两种p38抑制剂代表化合物中，BIRB796抑制作用强于SB203580。

2.1.2p38抑制剂抗芥子气损伤整体动物水平药效评价 2.1.2.1p38抑制剂对芥子气耳郭染毒小鼠皮肤损伤的影响 染毒前24h、30min以及染毒后12h腹腔注射给予SB203580、BIRB796以及活性化合物p38-98、p38-99（10mg/kg），考察了上述p38抑制剂对染毒皮肤损伤的影响。结果表明，除SB203580外，BIRB796、p38-98、p38-99对耳肿胀均有一定的抑制趋势，抑制率分别是20.5%、17.4%和17.8%。 2.1.2.2p38抑制剂对芥子气全身中毒小鼠存活的影响 采用芥子气40mg/kg（LD99）进行皮下注射染毒建立芥子气全身中毒模型，静脉注射给予p38抑制剂SB203580、BIRB796以及活性化合物p38-98、p38-99（5mg/kg/d），观察小鼠染毒7天内的死亡情况。结果表明，模型组小鼠于染毒第5天全部死亡，药物处理组小鼠分别于染毒第6天和第7天全部死亡，提示p38抑制剂对全身中毒小鼠的存活率无明显影响 2.1.2.3p38抑制剂中活性化合物代谢稳定性研究 采用大鼠肝微粒体模型，对SB203580、BIRB796、p38-98、p38-99进行初步的代谢稳定性分析。结果表明，p38-98在大鼠肝微粒体中孵育60min后原型剩余量达到50%。提示p38-98具有较好的代谢稳定性。 2.1.3SB203580和BIRB796抗芥子气损伤机制研究 从药效评价结果可知，变构型p38抑制剂BIRB796对芥子气炎性损伤的保护作用强于竞争性p38抑制剂SB203580。本研究从对应激活化蛋白激酶（stress-activated proteinkinases，SAPKs）c-Jun氨基末端激酶（c-Jun Nterminal kinase，JNK）与p38活性的影响的角度，对SB203580和BIRB796的抗炎机制进行了考察。 2.1.4芥子气诱导染毒HaCaT细胞p38和JNK激酶活化 首先采用Luminex液相芯片技术，考察了芥子气对HaCaT细胞p38与JNK磷酸化的影响。结果表明，芥子气可迅速诱导p38和JNK激酶磷酸化水平升高，并在染毒后0.5h达到高峰。 2.1.

These

candidates warrant clinical evaluation as novel therapeutic targets in GIST.
通过分析雷贝拉唑、血清胃泌素与十二指肠球部溃疡的关系,阐述雷贝拉唑治疗十二指肠球部溃疡的效果及雷贝拉唑在治疗十二指肠球部溃疡的过程中对胃泌素的影响,探讨雷贝拉唑、血清胃泌素对DU发展及愈合的作用。
乳腺癌的发生与发展与患者体内信号通路的异常及癌基因的表达产物关系十分密切,而近年来针对这些方面的异常的治疗成为乳腺癌治疗研究的热点,一系列的靶向治疗的药物成功上市,这些药物的应用明显提高了乳腺癌患者的生存质量及生存率,曲妥珠单抗即为其中经典的药物之一。本文将从作用机制、临床应用、耐药、不良反应四个方面对其在乳腺癌中的研究进展进行简要综述。
由美国德克萨斯大学健康科学中心癌症治疗研究中心、美国癌症研究协会和贝勒(Baylor)医学院共同主办的第37届圣安东尼奥乳腺癌研讨会,于2014年12月9~13日在美国圣安东尼奥市顺利召开。作为全球乳腺癌领域的年度盛会,此次会议同样公布了一批令人瞩目的研究结果,其范围涵盖基础、转化和临床领域。在此,笔者选取一些热点的临床研究进行较详尽的回顾,以飨读者。1激素受体阳性乳腺癌治疗进展
应用5,6,7,8-四氢苯并噻吩膦亚胺(2)与烷基异氰酸酯的氮杂Wittig反应生成碳二亚胺2,在不同的条件下,2分别与不同的亲核试剂反应,有效地合成了不同取代的新型稠合噻吩并[2,3-d]嘧啶-4(3H)-酮衍生物.所得化合物的结构由1H Pifithrin-α分子重量 NMR,IR,MS和元素分析所确证.初步的体外抗肿瘤活性测试,结果显示目标化合物具有抑制肿瘤细胞的生长,其中5d对口腔肿瘤细胞KB2IC50值为19.0μmol/L,表现出潜在的抗肿瘤活性.
Two new α-aminophosphonate derivatives containing thieno[2,3-d]pyrimidine, diethyl(((6-ethyl-2-methyl-4-oxothieno[2,3-d]pyrimidin-3(4H)-yl)amino)(4-methoxyphenyl)methyl)phosphonate(1) and diethyl((4-bromophenyl)((6-ethyl-2-methyl-4-oxothieno[2,3-d]pyrimidin-3(4H)-yl)amino)methyl)phosphonate(2), have been synthesized by a facial phosphorylated reaction, and their structures were characterized

by NMR, IR, HRMS and X-ray single-crystal diffraction. Compound 1(C21H28N3O5PS, Mr = 465.49) belongs to the orthorhombic system, space group P212121, with a = 10.83653(16), b = 12.04906(19), c = 18.0061(3) , V = 2351.06(6) 3, Z = 4, Dc = 1.315 g/cm3, μ = 2.177 mm-1, F(000) = 984.0, the 有 final R = 0.0389 and 购买MDV3100 w R = 0.0985 for all data. Compound 2(C20H25Br N3O4 PS, Mr = 514.37) belongs to the orthorhombic system, space group P212121, with a = 10.9187(5), b = 11.9522(4), c = 17.7667(7) , V = 2318.60(16) 3, Z = 4, Dc = 1.474 g/cm3, μ = 4.175 mm-1, F(000) = 1056.0, the final R = 0.0367 and w R = 0.0946 for all data.
【目的】确定PI3K抑制剂XC302连续口服给药的剂量限制性毒性(DLT)和最大耐受剂量(MTD),评估其耐受性并初步观察XC302治疗晚期实体肿瘤患者的疗效。【方法】常规治疗失败的晚期实体肿瘤患者分别进入4个组别接受XC302每天1次或每天2次口服治疗,起始剂量为50

mg/d,按”3+3″模式进行剂量递增或根据前一阶段试验结果调整。根据NCI-CTCAE 3.0版毒性评定标准评估不良反应。按RECIST 1.0版标准进疗效评估。【结果】共入组30例晚期肿瘤患者。XC302连续给药常见的不良反应包括白细胞减少(23.3%)、血红蛋白下降(30%)、恶心(20%)、谷丙转氨酶(ALT)升高(63.3%)及谷草转氨酶升高(AST)(50%)、碱性磷酸酶升高(ALP)(23.3%)和谷氨酰转肽酶升高(GGT)(26.7%)。DLT为可逆的3度ALT和AST升高。MTD为100 mg每天一次(空腹)及75 mg qd(餐后)。23例患者进行了疗效评价,12例(52.5%)达到稳定(SD)。有1例软组织肉瘤患者无进展生存期(PFS)长达64周。【结论】PI3K抑制剂XC302连续口服给药总体耐受性良好且治疗晚期实体肿瘤有较高的疾病控制率,值得进一步研究。
目的研究EGFR、Kras、BRAF在食管鳞癌(ESCC)组织中表达及与临床病理特征的关系。方法采用免疫组织化学SP法检测116例ESCC组织和20例癌旁正常组织EGFR、Kras、BRAF的表达,分析其与ESCC临床病理特征的关系。结果 116例患者的ESCC组织中EGFR、Kras、BRAF均有表达,阳性率分别为70.7%、49.1%和31.0%,高于癌旁正常组织。EGFR、BRAF在两者中表达差异有统计学意义(P<0.05);EGFR表达与分化、淋巴结转移、TNM分期有关(P<0.05),BRAF表达与浸润深度及分期有关(P0.

05)；随后淋巴细胞转化能力开始下降,到4 h时降到最低,且和运输1 h相比呈显著下降(P<0.05)。对于同一种稀释度的血清,加入PHA和LPS后都能显著的增强正常猪外周血T、B淋巴细胞的增殖活性(P
宿主与病原的相互作用是国际微生物感染免疫学前沿领域的重要命题。类立克次体是一类严格细胞内寄生的革兰氏阴性微生物,导致养殖牡蛎的大量死亡,但对于其分子生物学和致病机理知之甚少。本研究主要采用类立克次体菌体细胞和外膜蛋白诱导刺激近江牡蛎宿主,系统探索了类立克次体病原与宿主的相互作用：即类立克次体菌体细胞诱导宿主核转录因子CREB, LITAF的免疫功能与机理及类立克次体外膜蛋白ompR诱导刺激后宿主的分子免疫反应机制以及信号传导途径。

取类立克次体诱导刺激后的近江牡蛎血淋巴细胞,采用TRIzol法提取RNA,制备cDNA模板。根据CREB蛋白的保守结构特征设计了兼并寡聚核苷酸引物,采用RT-PCR和RACE INCB018424 PCR技术首次在双壳贝类中获得了Ca-CREB的全长cDNA序列。该cDNA序列含有一个1068 bp的读码框,编码一个39.3 kDa的蛋白,该蛋白具有转录因子CREB的特征性结构,与无脊椎动物海兔和蜗牛的CREB同源性较高,相似度分别为56%和58%。组织半定量RT-PCR结果表明：Ca-CREB在各组织中均有表达,但在血细胞和鳃中的表达量明显高于其它组织,预示该基因可能与免疫调节有关。通过构建重组表达质粒pET-CREB,在大肠杆菌中对Ca-CREB进行了诱导表达、蛋白纯化并制备了多克隆抗体,同时利用凝胶阻滞技术(EMSA)对重组蛋白的活性进行了研究。随后采用Real time RT-PCR、Western blotting和EMSA技术探讨了Ca-CREB在类立克次体诱导刺激条件下的激活机理及功能。结果表明：①Ca-CREB在大肠杆菌中得到了高效表达,获得的重组蛋白具有特异的DNA结合活性,制备的兔多克隆抗体的效价为1:12000。②在类立克次体诱导刺激不同时间段内,血淋巴细胞中Ca-CREB的基因表达水平没有显著差异,而Ca-CREB的DNA结合活性和磷酸化水平得到了明显提高,这表明核转录因子Ca-CREB在类立克次体诱导的宿主免疫反应中具有功能,且这种功能的激活发生在转录后水平上。接着,我们分别从表达载体、胶浓度及电泳条件等方面着手,对Ca-CREB原核表达产物比预测蛋白分子量偏大的原因进行了分析,结果表明：不同的表达载体及胶浓度对Ca-CREB融合蛋白在SDS-PAGE中表现的分子量大小没有影响,而不同SDS-PAGE体系分离融合蛋白时产生了融合分子量偏小的现象,推测不同的SDS-PAGE体系与分子量偏差的产生有关。

鉴于类立克次体在菌体细胞水平上能够诱导刺激宿主发生上述免疫反应,为深入探讨类立克次体在蛋白分子水平上是否能够诱导刺激宿主的分子免疫反应机制及信号传导途径,本实验通过基因组测序方法获得了首个贝类类立克次体病原的外膜蛋白ompR基因并研究了其免疫功能。该基因全长531bp,编码176个氨基酸,预测的蛋白分子量和等电点分别为19.76 OTX015 价格 KDa和9.76。核酸和氨基酸序列分析表明该蛋白具有细菌外膜蛋白的特征,与人Q热立克次体和潮虫立克次体外膜蛋白ompH具有20%-27%的相似性。随后以上述同样方法进行了ompR重组蛋白的表达、纯化和多克隆抗体的制备。在功能研究上,采用实时定量PCR、EMSA等技术手段分析了ompR诱导刺激后,宿主多个免疫相关因子的免疫反应机制及信号传导,结果显示：①该蛋白得到了成功地表达,制备的多克隆抗体与近江牡蛎类立克次体的总外膜蛋白产生了特异性的免疫反应,在目的蛋白位置出现了单一的免疫反应条带,表明已经获得了类立克次体外膜蛋白ompR。②ompR诱导刺激后,宿主免疫相关因子Myd88和TNF-α的表达水平发生了明显变化,而TGF-β基因的表达水平不受影响；在转录后水平上的调控表现为刺激后血淋巴细胞中P38的磷酸化水平明显地增加,JNK的磷酸化水平急剧下降,而ERK的磷酸化水平无变化；同时核转录因子NF-κB的DNA结合活性的明显增加,而P38激酶抑制剂可显著地抑制该结合活性。 Pomalidomide订单 在前面研究基础上,我们进一步克隆鉴定了近江牡蛎的LITAF(LPS-induced TNF-α),并对其功能进行了初步研究。Ca-LITAF全长750

bp,具有一个348 bp的读码框,编码一个分子量大小约为12.5 kDa的蛋白。该蛋白具有Zn2+结合区(CXXC和HXCXXC)和LITAF结构域等特征性结构,与其它动物的LITAF蛋白的相似度介于33%和96%之间,其中与无脊椎动物太平洋长牡蛎和扇贝的LITAF蛋白具较高同源性,同属一个亚群。实时定量PCR结果显示：Ca-LITAF在各被检组织中均有表达,在鳃和血淋巴细胞的表达量要高于其它组织,类立克次体诱导刺激后血淋巴细胞中Ca-LITAF的表达明显增强,表明Ca-LITAF与病原诱导的宿主免疫反应有关。综合上述结果,病原/MAPKs/NF-κB (CREB)信号途径可能存在于牡蛎天然免疫系统中,对抵抗外来病原的入侵起着重要作用。
与哺乳动物相比,鸡胚具有易于获取和操作、结合病毒转染和电转移可进行转基因操作等优势,因而常被作为发育生物学和比较医学研究的模型动物。尤其是近年来有关鸡胚各种组织器官发育分子机理的研究进展较快,这为鸡胚更好的作为模型动物奠定了一定的基础。为了更深层次揭示细胞发育和分化的机理,在内源性调节的基础上力图通过外源性调控,在体外获得干细胞来源、可用于组织功能修复的组织和器官,本实验以艾维因鸡胚为材料,分离了胚胎期原始生殖细胞(primordial germ cell, PGC)并通过传代培养获得了大量胚胎生殖(embryonic germ cell, EG)细胞,建立了EG细胞体内形成畸胎瘤及体外形成类胚体(embryoid body, EB)的模型,探讨了多种因素对EG细胞体外多向分化的调控,研究了EG细胞体外向成熟神经细胞、脂肪细胞、肝细胞和心肌细胞分化的潜能。 1.鸡胚胎生殖细胞分离和培养模型的建立 在体视显微镜下用玻璃细针分离3.

酪氨酸激酶作为抗肿瘤靶点研究广泛,效果良好,在抗肿瘤领域具有广阔的应用前景。目前已发现的蛋白酪氨酸激酶包括20余个受体酪氨酸激酶家族和10余个非受体酪氨酸激酶家族,他们与肿瘤的发生和发展关系密切。本文主要根据近3年的文献,结合酪氨酸激酶与肿瘤的关系,对酪氨酸激酶类靶点及其抑制剂的研究进展作一综述。
药物设计学课程是药学领域近年发展起来的新兴学科,是药学专业的必修课程。药学专业开设以计算机辅助药物设计为主要内容的药物设计学课程,有助于提高学生的新药研发能力。教学过程中从优化教学内容、改进教学方法等方面进行了探讨与实践,使教学效果得到提升。
背景与目的尼妥珠单抗是一种针对表皮生长因子受体的人源化Ig G1型单克隆抗体,可在多种肿瘤中提高化疗和放射治疗的敏感性;而非小细胞肺癌常用化疗药物有多种,尼妥珠单抗对这些药物敏感性的影响尚缺乏报道。本研究探讨尼妥珠单抗对顺铂、吉西他滨、紫杉醇、培美曲塞、长春瑞滨在非小细肺癌细胞中敏感性的影响及可能机制。方法选择PC9人肺癌细胞作为观察对象,WST-1法检测细胞增殖率、流式细胞仪检测细胞周期、TUNEL法检测细胞凋亡率、免疫荧光染色联合激光扫描共聚焦显微镜下观察细胞内微管、微丝的分布情况。结果尼妥珠单抗联合紫杉醇对PC9细胞的增殖抑制最为显著(P
软组织肉瘤(soft

tissue sarcoma,STS)是源于间叶组织和与其交织生长外胚层神经组织的恶性肿瘤,包括除淋巴造血组织外的非上皮组织,即纤维、脂肪、肌肉、间皮以及分布于这些组织中的血管、淋巴管和外周神经,多位于四肢、躯干和腹膜后等部位,占成人恶性肿瘤的1%,儿童肿瘤的10%[1]。其主要特点为:分布广、类型多。根据世界卫生组织(world

还有 health organization,WHO)的分类,STS具有60多种亚型,许多亚型易形成假包膜而被
近年来随着分子生物学研究的不断深入,靶向治疗成为当前肺癌治疗的趋势。目前肺癌个体化的最佳治疗效果日益受到重视,棘皮动物微管相关蛋白4-间变型淋巴瘤激酶(echinoderm microtubule associated protein like4 anaplastic lymphoma kinase,EML4-ALK)融合基因作为新兴生物标记物是当前肺癌治疗领域研究热点。与此同时,随着抗肿瘤治疗水平的不断提高,生存期明显延长,发生多原发癌(multiple primary carcinomas,MPC)的机会增多。EML4-ALK融合基因阳性的肺腺癌合并淋巴瘤发生于同一患者文献报道罕见。本文报道1例ALK融合基因阳性的非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)合并淋巴瘤病例,同时对异时性肺癌合并淋巴瘤的文献进行复习。
中国云南省宣威地区一直是全球范围内肺癌发病率和死亡率最高的地区之一。上世纪八十年代以来,国际上对该地区肺癌在流行病学、发病机制和分子生物学等方面进行了大量的研究。随着分子检测技术的进步和DNA二代测序技术的应用,有关宣威肺癌的致病环境因子和临床诊治的研究取得了更多进展。为进一步探讨这一国际热点问题,本文重点从宣威肺癌的环境风险因子、基因表达及突变、诊断和药物治疗等方面对云南宣威肺癌的研究现状进行概述,并展望第二代基因测序等生物学和信息学分析技术在宣威肺癌诊断和治疗过程中的积极作用。
随着肿瘤基因组学和肿瘤微环境研究的不断深入,抗肿瘤药物研发正逐步进入泛肿瘤研究和肿瘤免疫治疗的新时代。泛肿瘤研究可以帮助找到新的癌症相关的分子遗传学特征,并建立起基于分子机制的肿瘤分类法,让患者得到更为匹配的治疗。而肿瘤免疫治疗则利用增强免疫正调节和抑制免疫负调节这两种策略来逆转肿瘤微环境的免疫逃逸,最终控制和杀伤肿瘤细胞,并表现出了惊人的持久性应答。大量的泛肿瘤研究以及肿瘤微环境研究的数据累积,促使抗肿瘤临床试验发生模式上的转变,囊括多瘤种、多药物的整群试验模式正在逐渐兴起。
肺癌的治疗非常复杂,需要多学科联合来提供综合治疗。介入性肺脏病学是利用微创的方式为疑似肺癌的患者进行初步诊断和分期,在目前仍是一个不断发展的学科领域。支气管超声引导下的对纵隔淋巴结采样进行分期,同时进行驱动突变检测是早期和晚期肺癌诊断及治疗的重要工具,支气管超声引导下支气管镜的进步使得可疑周围性病变的组织学采样的并发症发生率大大降低同时为立体定向放疗植入基准标记。此外,介入性肺脏病学可以缓解不可手术的癌症及晚期癌症。由于低剂量CT扫描用于肺癌的早期发现,对肺部结节的治疗有经验的肺病专科医师来说,最重要的是尽可能减少侵袭性采样,整合多学科诊治的模式进行分期。
鼠类肉瘤病毒癌基因同源物B1(BRAF)基因是非小细胞肺癌(NSCLC)的驱动基因之一,在NSCLC中突变率为0.5%~4.9%,其中V600E突变类型占到一半以上。BRAF突变多见于女性、肺腺癌患者,亚裔人群中突变率相对较低。BRAF突变可与其他基因突变,如EGFR、K-Ras突变共存,但其临床意义尚不清楚。全球NSCLC患者数量庞大,尽管BRAF突变率在NSCLC中较低,低突变率基因及其靶向治疗的研究仍然相当重要。目前BRAF抑制剂治疗NSCLC正在临床试验中。本文就NSCLC中BRAF突变及靶向治疗的研究进展进行综述。
目的探讨手工免疫组化(immunohistochemistry,IHC)法检测不同克隆号ALK抗体在间变性淋巴瘤激酶(anaplastie

通常 selleck化学药品液面控制 lymphoma kinase,ALK)融合的非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中ALK蛋白表达,并与全自动免疫组化染色法进行比较。方法选取60例NSCLC石蜡样本,运用4种抗体D5F3(Ventana)、D5F3(Cell Signaling)、1A4/1H7(Ori Gene)、5A4(Abcam)联合常规手工IHC分别检测NSCLC中ALK蛋白水平,与抗体D5F3(Ventana)采用全自动IHC(Bench Mark)结果进行对比分析。结果 D5F3(Ventana+Bench Mark)检测发现ALK融合阳性NSCLC者32例,ALK融合阴性NSCLC者28例,经FISH法验证结果一致。采用手工IHC法检测4种抗体D5F3(Ventana)、D5F3(Cell Signaling)、1A4/1H7、5A4染色灵敏性分别为93.8%、84.4%、93.8%、56.3%,特异性均为100%,与D5F3(Ventana+Bench Mark)染色结果的一致性分别为96.7%、91.7%、96.7%、76.

gingivalis低毒力株ATCC 33277和高毒力株W83、人脐静脉血管内皮细胞株,建立P. gingivalis ATCC 33277和W83侵入HUVEC模型。 2、MTT比色法检测P. gingivalis侵入前后细胞增殖活性变化,流式细胞仪测定细胞周期。 3、Annexin V-FITC凋亡试剂盒检测细胞凋亡率,免疫荧光染色和细胞核DNA阶梯状图谱电泳分析进一步证实细胞凋亡 4、RT-PCR和Western印迹法检测P. gingivalis侵入血管内皮细胞前后ICAM-1、VCAM-1和E选择素基因的mRNA及蛋白表达变化,细胞免疫荧光染色法测定ICAM-1、VCAM-1和E选择素膜蛋白表达。 确认细节 5、Western印迹法检测IκB-α和磷酸化p38 MAPK表达；间接免疫荧光法检测HUVEC NF-κB p65核移位。 6、NF-κB抑制剂MG132和p38 MAPK抑制剂SB203580预处理细胞后,分别建立P. gingivalis ATCC 33277和W83侵入模型,分析NF-κB/IκB和p38 MAPK信号通路在P. gingivalis侵入血管内皮细胞影响粘附分子表达过程中的作用。

三、统计分析 结果以均数±标准差(x±s)表示,实验重复3次,采用SAS 8.12软件包,多组均数之间的比较采用重复测量资料的方差分析,P0.05)；P. gingivalis侵入改变细胞周期分布,使G1期细胞增加(P<0.05),8h显著回落(P0.05)；P. gingivalis ATCC 33277和W83侵入后4h即诱导ICAM-1、VCAM-1和E选择素膜蛋白表达(P<0.05),ICAM-1和VCAM-1蛋白表达在侵入后8h和24h有持续的高表达(P<0.05)；E选择素蛋白表达在侵入后8h达高峰,侵入后24h仍有较高的表达(P
普通针毛蕨(?)acrothelypteris Selleck PR 171 torresiana (Gaud.) Ching是金星蕨科针毛蕨属植物,主要分布于我国长江以南各省区。由于该植物具有亲热解毒,软坚散结的功效,在民间常被用于止血和治疗水肿。已有文献报道,普通针毛蕨中所含的主要成分Protoapigenone具有良好的抗肿瘤活性,且对诸多肿瘤细胞都表现出明显的细胞毒作用。本实验室研究发现,由该植物首次提取制备的黄酮类化合物2-(顺-1,2-二羟基-4-酮-环己-5-烯)-5,7-二羟基-色原酮(DEDC)是Protoapigenone的结构类似物,对多种肿瘤细胞也呈现出显著的增殖抑制活性。 近年来不断发现,植物黄酮(flavonoids)集许多优良的生理、药理学活性于一身,在癌症及心血管疾病的预防、治疗方面以其天然、高效、低毒的特点而倍受瞩目。黄酮类化合物抗肿瘤机制的报道常常见诸报端,但是总的来说,其具体的防癌、抗癌机理目前尚未明确。近一两年国外研究者在植物黄酮抗肿瘤研究方面取得了突破性的进展,发现许多药物具有的抗氧化与促氧化活性、生物膜保护作用、线粒体毒性损伤、蛋白酶体抑制反应、信号转导抑制与调节功能在抗肿瘤效应及诱导肿瘤细胞凋亡方面起关键作用。

植物黄酮结构上属于多酚类植物化合物,一直被认为是高效的天然抗氧化剂。事实上,植物黄酮作为功能物质起效时,同时具有抗氧化与促氧化两种截然相反的特性。人们通常把植物黄酮对疾病的预防作用归因于其具有良好的抗氧化活性及自由基清除特性。事实上,这些多酚类化合物在抗癌及诱导肿瘤细胞凋亡方面,其促氧化活性起着比抗氧化更为重要的作用。研究表明,这些植物多酚类物质能催化谷胱甘肽(GSH)或辅酶Ⅰ氧化而产生活性氧(ROS),而许多化疗药物能诱导细胞核DNA片段化引起不可逆损伤并促使肿瘤细胞凋亡都是通过ROS介导产生的。

目前,对于黄酮类化合物DEDC的抗肿瘤作用机制并不十分清楚,认为至少可能包括以下两个方面：1.DEDC通过在细胞内的促氧化作用,造成氧化压力,引起氧化应激而损伤生物膜、DNA及其它生物大分子诱导肿瘤细胞凋亡。2.通过在较高浓度下产生ROS调节某些细胞信号转导途径,如：丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs);转录信号传导子与激活子3(STAT3);核转录因子κB (NFκB)等的活性,继而调节细胞生理过程的各个方面,包括细胞的增殖、分化和凋亡 本研究用DEDC处理人肝癌细胞HepG2以及人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y后,采用台盼蓝拒染法、MTT比色法、流式细胞术(flow Apoptosis Compound Library购买 cytometry, FCM)凝胶电泳迁移实验(EMSA)、免疫印迹实验(Western-blot)、和反转录聚合酶链反应(RT-PCR)等方法分别检测HepG2及SH-SY5Y细胞在DEDC处理后,细胞DNA损伤情况和凋亡相关基因及蛋白表达水平的变化。为了进一步阐明ROS及有关细胞信号分子在肿瘤细胞凋亡中所起的作用, ROS清除剂N-乙酰半胱氨酸(NAC), JNK1/2抑制剂SP600125, P38 MAPK抑制剂SB203580被用于实验,测定ROS、JNK、P38等信号分子在DEDC诱导的HepG2细胞凋亡中起什么作用；同时,NAC和NF-κB抑制剂PDTC被用于检测ROS和NF-κB对SH-SY5Y细胞凋亡的影响。 第一部分DEDC对HepG2细胞毒性作用及其凋亡机制的研究 鉴于黄酮类化合物protoapigenone展示出较强的抗癌活性,本试验旨在探讨其结构类似物2-(顺-1,2-二羟基-4-酮-环己-5-烯)-5,7-二羟基-色原酮(DEDC),种首次从普通针毛蕨分离得到的黄酮类化合物,对肝癌细胞HepG2的生长抑制作用及其诱导凋亡的分子机制,同时为进一步检测了ROS捕获剂NAC及MAPK通路抑制剂对DEDC诱导,实验设计中采取了对细胞预先用不同抑制剂加以处理的方法再观察肿瘤细胞凋亡效应的变化。 将肝癌细胞HepG2和肝正常细胞LO2分别暴露于DEDC (2.5,5, 10μg/ml)或protoapigenone (2.

05表示具有统计学差异。 结果: 1.eGFR、Ccr与GFR的差异性比较 在T2DM中45例患者GFR≥90ml/min/1.73m~2,31例60≤GFR＜90ml/min/1.73m~2,11例30≤GFR＜60ml/min/1.73m~2,7例GFR＜30ml/min/1.73m~2。在NDM中则分别为15例、10例、20例、10例。在不同GFR分期的T2DM和NDM患者中,GFR及以CG公式、MDRD公式、MDRD-7公式评估的eGFR之间无显著性差异。在60≤GFR＜90 ml/min/1.73m~2的T2DM中,Ccr(75.92±8.88 ml/min/1.73m~2)与GFR(87.94±28.88 ml/min/1.73m~2)、CG公式估算的eGFR(74.45±16.80 ml/min/1.73m~2)均存在显著性差异(P＜0.05),在其它三期T2DM中Ccr、eGFR及GFR之间无统计学差异。 2.eGFR、Ccr与GFR的相关性比较 在T2DM患者中,不同GFR分期的患者以CG公式(r=0.76,P=0.003)、MDRD公式(r=0.79,P=0.001)、MDRD-7公式(r=0.79,P=0.004)评估的eGFR与GFR均明显相关,T2DM患者Ccr与GFR也明显相关(r=0.67,P=0.011),但eGFR与GFR的相关强度大于Ccr与GFR的相关性。在NDM患者中,以CG公式(r=0.76,P=0.003)、MDRD公式(r=0.80,P=0.005)、MDRD-7公式(r=0.79,P=0.005)评估的eGFR与GFR明显相关。

所以 3.eGFR、Ccr在ROC曲线下面积的比较 不同GFR分期的T2DM患者,以CG公式、MDRD公式、MDRD-7公式评估的eGFR在ROC曲线下面积均＞0.8,平均面积分别为0.892,0.853,0.839,1-2期GFR患者Ccr在曲线下面积为0.767,与CG评估的eGFR的曲线下面积0.895有统计学差异(P＜0.01)。在NDM患者,各公式评估的eGFR在ROC曲线下面积均＞0.8,平均面积为0.860,0.870,0.853,均无统计学差异。 4.不同性别、血压、UAE、血清ALB、Scr水平以及伴/不伴有代谢综合征T2DM患者,GFR及以CG公式、MDRD公式、MDRD-7公式评估的eGFR之间无显著性差异。 5.在T2DM中,年龄、HbAlc、UAE是GFR下降的独立危险因素。 结论: CG公式、MDRD公式及MDRD-7公式的eGFR在临床上均可替代~(99m)Tc—DTPA肾脏动态显像用于评估2型糖尿病患者的肾功能,其准确性优于Ccr。
目的:探讨P38 MAPK在顺铂化疗和热疗诱导肝癌细胞凋亡的机制,以及对正常肝细胞的影响,为临床应用提供实验依据。

方法:通过体外培养正常肝细胞HL-7702、癌旁肝硬化肝细胞QSG-7701和肝癌细胞QGY-7703,应用免疫组织细胞化学、MTT、激光扫描共聚焦显微镜、Western Blot、流式细胞仪和TUNEL法等方法观察顺铂和热诱导对其凋亡的影响,然后加入P38 MAPK的特异性抑制剂SB203580,再观察顺铂和热诱导对细胞凋亡情况的变化。 结果:P38 MAPK表达从正常肝细胞、癌旁肝硬化肝细胞到肝癌细胞逐渐增高。P38 MAPK的特异性抑制剂SB203580可以使细胞的凋亡率降低。3株培养细胞加顺铂后凋亡率均明显增加,存活率明显下降,加用P38 MAPK的特异性抑制剂SB203580后,可使细胞凋亡率下降。3株培养细胞对于顺铂的反应性不同,肝癌细胞最敏感,凋亡率和坏死率最高。热诱导可以使3株培养细胞发生凋亡,其中肝癌细胞最敏感,引起凋亡和坏死的细胞最多。 点击此处 结论1顺铂诱导细胞凋亡有P38 MAPK通路的参与。 2热诱导可以引起细胞凋亡,这过程中有P38 MAPK通路的参与。 3癌旁肝硬化肝细胞的生物学特性与正常肝细胞和肝癌细胞都不同,属于正处在转化过程中的癌前期细胞,值得进一步研究。
目的 研究七氟烷对在体大鼠缺血再灌注心肌梗死面积及肿瘤坏死因子α(TNF-α)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)表达的影响,探讨七氟烷预处理对缺血再灌注心肌的保护作用机制。 方法 建立大鼠在体心肌缺血再灌注损伤模型,实验设计分组示意图见图1。40只雄性SD大鼠,体重270-350g,所有大鼠经历225min。取16只大鼠,随机分为2组(n=8):组C:I/R组;组D:SEVO+I/R组,再灌注2h后用氯化硝基四氮唑蓝染色法测定心肌梗死面积,实验中监测血液动力学变化。取24只大鼠随机分为4组(n=6):组A:CON组建立动物模型,但不作七氟烷预处理及缺血处理;组B:SEVO组予七氟烷预处理,但不作缺血处理;组C:I/R组不予七氟烷预处理,单纯缺血再灌注;组D:SEVO+I/R组通过挥发罐吸入1.0MAC七氟烷30min,并在冠状动脉阻断前15min停止吸入以排除大鼠体内的七氟烷,30min的心肌缺血和随后120min的再灌注。实验结束采集左室心肌组织,Western

HIF 抑制剂 blot法半定量检测TNF-α、ICAM-1蛋白的表达。 结果 平衡期时,各组间心率(HR),平均动脉压(MAP)和心率-收缩压乘积(RPP)无统计学意义(P>0.05)。吸入七氟烷HR、MAP和RPP降低(P<0.05)。再灌注1h和2h引起各组MAP和RPP降低(P0.05);I/R组和SEVO+I/R组表达均增加(P
目的综述以大分子复合物和脂质体、聚合物纳米粒等胶粒为载体的被动靶向、pH敏感靶向及以黏附分子、叶酸、单克隆抗体介导的主动靶向给药系统在类风湿性关节炎治疗领域的研究进展。方法查阅近期国内外相关文献。结果与结论类风湿性关节炎具有活化免疫细胞侵袭,滑膜炎症,新生血管生成和滑膜血管翳的形成,致使炎性滑膜具有类似于肿瘤血管的通透性增强与滞留效应,及微环境pH值较正常组织低等特征,为靶向治疗类风湿性关节炎提供了可能。
目的:研究冬虫夏草提取液(Cordyceps sinensis,C.sinensis)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的肾小管上皮细胞凋亡的保护机制。方法:C.sinensis(0,5,10,20,40 mg/L)与10-8mol/L AngⅡ共同孵育NRK-52E 24,48,72 h,了解C.sinensis对细胞增殖的影响,确定最佳干预浓度;取AngⅡ(0,10-12,10-10,10-8,10-6mol/L)与NRK-52E共同培育24 h及10-8mol/L AngⅡ与NRK-52E共同培养24,48,72 h,观察AngⅡ对NRK-52E凋亡的影响,确定AngⅡ最佳干预浓度、时间后设立对照组,AngⅡ(10-8mol/L)组,AngⅡ(10-8mol/L)+C.

绵马素PB对多种肿瘤细胞株具有良好的增殖抑制作用。其中对HepG2细胞的抑制作用最强,IC50值是10.59±0.67μM,进一步检测结果表明,绵马素PB对HepG2细胞的增殖抑制作用是呈时间和浓度依赖的。然而,正常的小鼠单核巨噬细胞Raw264.7和小鼠胚胎成骨细胞MC3T3-E1的IC50值分别是42.50±0.54μM和38.19±0.92μM,远远大于HepG2细胞,说明绵马素PB对正常细胞株的毒性较小。另外,使用激光共聚焦显微镜从形态学角度观察绵马素PB作用于人肝癌HepG2细胞后的变化,可以看出其细胞染色质凝集并固缩,细胞核膜核仁碎裂成小片段形成凋亡小体。

2.绵马素PB能够诱导HepG2细胞发生凋亡。首先,使用罗丹明123染色法检测绵马素PB作用于人肝癌HepG2细胞后线粒体跨膜电位的变化,结果呈现明显地下降趋势。其次,采用琼脂糖凝胶电泳检测梯状条带(DNA Dolutegravir数据表 Ladder)的产生,可以看出加入绵马素PB后的HepG2细胞的泳道内均有明显的DNA Ladder出现。最后,利用AnnexinV-FITC/PI双染试剂盒检测细胞凋亡百分率,结果显示绵马素PB作用于HepG2细胞48h后,细胞的凋亡百分率显著升高,并且呈浓度依赖的方式。 3.绵马素PB通过调节PI3K/Akt/GSK-3β信号通路从而引起HepG2肝癌细胞凋亡(1)绵马素PB可以抑制PI3K的表达,抑制Ser473Akt的磷酸化,抑制Ser9GSK-3β的表达,随后上调NAG-1的表达。相似地,加入PI3K抑制剂渥曼青霉素后,各蛋白的表达效果和绵马素PB作用一致。该结果说明PI3K/Akt/GSK-3β信号通路可能是绵马素PB作用于HepG2肝癌细胞的主要分子机制之一。 LY294002体外 (2)绵马素PB诱发了caspase-3的激活和PARP的裂解。用广谱caspase抑制剂Z-VAD-FMK预处理HepG2细胞2h后,可明显地抑制二者的变化。这说明绵马素PB诱导的HepG2细胞凋亡是通过caspase所依赖的途径。 综上所述,绵马素PB在不影响正常细胞生长的状况下,可以有效地抑制HepG2肝癌细胞的增殖,这种增殖抑制作用与其诱导的细胞凋亡密切相关。绵马素PB通过caspase所依赖的途径诱导HepG2肝癌细胞发生凋亡,其中PI3K/Akt/GSK-3β/NAG-1信号通路可能作为最主要的分子机制之一。上述研究结果将对绵马素PB进一步的研究并开发为新药提供良好的理论基础。
世界范围内，乳腺癌发病率与死亡率高，是影响女性健康的重要疾病。其中HER-2(Human

epidermal growth factor receptor-2)蛋白过表达乳腺癌，传统检测易误诊、漏诊，在治疗过程中易产生副作用及引发不良预后。随着纳米科技理论的进步及纳米颗粒制备工艺的改善，因金纳米颗粒独特的理化特性，将其引入肿瘤医学领域，对乳腺癌的检测与治疗有创新意义。 目的 通过金纳米颗粒制备及曲妥珠金纳米探针合成，探讨颗粒毒性、探针暗场应用及处理乳腺癌细胞实验效果，为乳腺癌纳米医学诊断与治疗研究提供依据。 并且 方法 以柠檬酸盐还原法制备金纳米颗粒(Gold nanoparticles,GNPs)，对颗粒进行透射镜(TEM)表征及紫外吸收光谱检测，通过静置检测金纳米颗粒时间稳定性；GNPs通过静电作用吸附曲妥珠单抗(Herceptin)，进而合成曲妥珠金纳米探针(GNP@Herceptin)，表征及稳定性检测方法同GNPs；中科院上海细胞库购买人乳腺癌细胞株MCF-7、SK-BR-3，免疫组化检测细胞HER-2蛋白表达；利用扫描电镜(SEM)，检测定位于细胞膜表面GNP@Herceptin，并在暗场环境下观察细胞膜上GNP@Herceptin；设置0-400mg/mL7浓度梯度GNPs，并设置培养液空白组，细胞增殖抑制剂盒检测GNPs细胞毒性；设置0-200ng/mL7浓度梯度GNPs、Herceptin和GNP@Herceptin，并设置培养液空白组，细胞增殖抑制试剂盒检测MCF-7与SK-BR-3细胞增殖抑制效果；设置0-1.0μg/mL4浓度梯度Herceptin、GNP@Herceptin，细胞凋亡试剂盒检测SK-BR-3细胞凋亡，细胞周期试剂盒检测SK-BR-3细胞周期阻滞；运用SPSS21.0对同种细胞不同浓度颗粒毒性、抗体与探针增殖抑制、细胞凋亡及周期阻滞数据进行单因素方差分析，同一浓度两种细胞颗粒毒性数据及抗体与探针最佳处理剂量采用两组独立样本t检验，检验水平α为0.05。

结果 金纳米颗粒近似圆形，粒径大小(14.11±1.13) nm，并可与曲妥珠单抗成功吸附，溶液澄清透亮，稳定性好；GNPs与Herceptin结合率为2.25：1，结合效果好；通过SEM检测，可发现定位于细胞膜表面的GNPs@Herceptin，并且在暗场环境下，可看到SK-BR-3细胞周围的橘黄色生物探针；GNPs浓度在400μg/mL时，MCF-7细胞存活率减少至43.9%(t=39.709，P=0.001)，在100μg/mL时，SK-BR-3细胞存活率为65.1%(t=6.796，P=0.002)，均有明显细胞毒性效果，但金纳米颗粒浓度下降至50μg/mL时，SK-BR-3与MCF-7细胞生存率分别为82.8%(t=1.979，P=0.119)、99.3%(t=0.177，P=0.868)，且未显示出细胞增殖抑制效果，说明低浓度GNPs有良好的生物相容性。Herceptin处理SK-BR-3细胞后，最佳用药剂量为7.143ng/1×104细胞，GNP@Herceptin处理细胞后最佳用药量从50ng/mL降低至25ng/mL，且差异具有统计学意义(t=14.

抗LDL及抗oxLDL IgM亚类单抗的制备为研究天然抗体在体内脂质代谢和相关心脑血管疾病如动脉粥样硬化等发生发展中的作用提供了重要的研究工具。 2.天然属性抗oxLDL IgM亚类抗体3A6降低了泡沫细胞的形成,可能对动脉粥样硬化形成有预防作用。 selleck产品 3.天然属性抗oxLDL IgM亚类抗体3A6对apoE基因敲除小鼠血脂及血浆oxLDL含量无明显影响;但对apoE基因敲除小鼠胸主动脉粥样硬化斑块形成有抑制作用。 4. 3A6不能抑制脂多糖活化的巨噬细胞对oxLDL的摄取,并且通过其Fc段与巨噬细胞的结合而促进了oxLDL介导的泡沫细胞的生成。脂多糖通过TLR-4受体活化了p38MAPK和NF-κB通路,并且上调了Fcα/μ受体在巨噬细胞表面的表达。 5.我们的研究结果证实了LPS浓度升高加重动脉粥样硬化形成的内在机制。
第一部分大鼠同种异体原位肺移植模型的建立 目的:通过大鼠套管法吻合技术建立大鼠左侧原位肺移植模型。方法:将60只SPF级SD大鼠随机分为供、受体两组,采用三套管吻合技术完成大鼠肺移植模型。结果:30例手术中,供肺灌注到摘取时间(10±1)分钟,供肺完成套管时间(10±4)分钟,供体动静脉、支气管吻合时间(15±2)分钟,移植肺热缺血时间(16±2)分钟,冷缺血时间(30±5)分钟,手术平均时间(80±10)分钟,术后15天生存率达86%,其中两例死于急性肺水肿,一例死于肺静脉栓塞,一例死于对侧气胸。结论:三套管大鼠同种异体肺移植模有效、可靠,为临床肺移植提供了较好的实验基础,但是模型操作复杂,需要长时间的学习和反复操作来提高肺移植模型的稳定性。

第二部分落新妇甙对大鼠肺移植排斥反应的抑制作用 目的:运用排斥反应分级及观察落新妇甙对大鼠移植肺中支气管肺泡灌洗液诱导肺成纤维细胞胶原增生的抑制作用实验,探讨落新妇甙对大鼠肺移植排斥反应的抑制作用。方法:采用大鼠左侧原位肺移植模型。随机将肺移植后的60只大鼠分为4组:A组肺移植后用生理盐水(1ml/天)灌胃,B组肺移植后用环孢素A (5mg/kg/天)灌胃,C组肺移植后用落新妇甙(1mg/kg/天)灌胃,D组肺移植后用环孢素A (2.5mg/kg/天)及落新妇甙(1mg/kg/天)灌胃。术后第30天(每组抽取5只大鼠)切取移植肺观察肺急性排斥反应分级情况;另外每组10只大鼠,取受体支气管肺泡灌洗液。用收集的支气管肺泡灌洗液在体外刺激人胚胎成纤维细胞,通过MTT比色法和酶联免疫(ELISA)法分别检测人胚肺成纤维细胞的增殖及Ⅰ型胶原的合成,并对检测结果进行分析。结果:(1)B组、C组及D组移植肺排斥反应分级均低于A组(P<0.01);D组移植肺急性排斥反应最轻,优于C组(P<0.05)和B组(P<0.01)。(2)受者移植肺中支气管肺泡灌洗液显著促进了人胚肺成纤维细胞的增殖和胶原合成;(3)B、C、D组的支气管肺泡灌洗液诱导的人胚肺成纤维细胞Ⅰ型胶原合成有显著的抑制作用(P0.05)。D组(落新妇甙加PI3K/Akt抑制剂LY294002组)T细胞凋亡和PIK3/Akt表达明显高于对照组,p38MAPK明显低于对照组。结论:落新妇甙诱导大鼠肺移植排斥反应中活化T细胞凋亡与其激活p38MAPK信号传导通路、及抑制PI3K/Akt信号传导通路有关。
前言:胃癌是一种常见的恶性肿瘤,据有关文献报道,在我国其死亡率居各种恶性肿瘤之首。胃癌患者的主要死因为肿瘤病灶的侵袭及转移。因此探讨其侵袭转移机制显得尤为重要。

哪里 在众多的促转移分子中,转化生长因子β(transforming

selleck抑制剂 growthfactor beta,TGFβ)是一重要分子,它参与了多种肿瘤的侵袭和转移过程。用基因转染的方法诱导肿瘤细胞中TGF-β1表达可增加肿瘤细胞的转移能力。同时有研究表明,阻止TGF-β信号通路可以抑制胃癌的转移。我们的早期研究发现TGF-β1可以促进胃癌细胞SGC7901和BGC823的浸润和转移。一些临床研究也显示:TGF-β1的表达与淋巴结的转移和预后不良呈正相关。目前虽然已有许多研究证实了TGF-β1在肿瘤侵袭和转移中的作用,但其具体机制尚不明确。 研究表明TGF-β促浸润转移作用可由smad依赖通路及smad非依赖通路介导。TGF-β与细胞膜Ⅱ型受体(TβRⅡ)结合后,激活Ⅰ型受体,活化的Ⅰ型受体激活下游分子smad2和smad3,随后smad2/smad3与smad4结合形成smad复合物并转移到核内,调节TGF-β介导的靶基因转录。而在smad非依赖通路中,JNK,Erk和P38通路则被认为是关键性的通路。基于TGF-β在肿瘤发生与转移中的重要性,所以深入探讨TGF-β促转移机制具有非常重要的理论及临床意义。 人类fascin 1基因属于fascin家族,其蛋白质编码产物是一种分子量为55 kDa的细胞骨架蛋白,可与F肌动蛋白结合,定位于细胞质张力纤维和细胞膜皱褶(ruffles)边缘与细胞的运动、癌细胞的转移有密切关系的公状伪足、微棘(microspikes)的核心肌动蛋白束中。细胞内fascin 1基因表达上调引起细胞间连接发生解离,同时细胞的运动也相应增加。而将fascin 1基因转染至fascin 1基因低表达的结直肠癌细胞系SW 1222中,结果细胞膜表面突起增多,细胞分化程度降低,细胞运动性增强。Fascin蛋白在胃癌中表达明显增高,它的高表达与胃癌的浸润深度、淋巴结转移、TNM分期和复发密切相关。有研究表明在肺癌中TGF-β1可诱导fascin1基因表达上调,且TGF-β1和fascin1蛋白都与肺癌的侵袭与转移有关,但是目前TGF-β与fascin1在胃癌侵袭与转移中是否存在调控关系尚未见文献报道。 RNA干扰(RNA interference,RNAi)是近年来发展起来的一种新技术,由于它能特异而有效地阻断靶基因的表达,目前被广泛应用于各种肿瘤的研究。我们构建了针对Fascin1的短发夹RNA(shortharpin RNA,shRNA)真核表达载体并首次转染人胃癌细胞MKN45,观察抑制fascin1表达前后,TGF-β1作用对胃癌侵袭和转移的影响,并对其机制作初步探讨。 目的:研究TGF-β1对fascin1基因表达的影响,以及fascin1在TGF-β促胃癌侵袭与转移中的作用。探讨以fascin1为靶的胃癌基因治疗以及进一步揭示TGF-β1促胃癌侵袭和转移机制提供理论和实验依据。 方法: 1.

0软件对49个2,4-二芳基氨基吡啶类似物化合物进行三维定量构效关系(3D-QSAR)研究及蛋白质分子对接(Docking)研究,用数据阐述模型的可靠性,对后续类似ALK磷酸激酶抑制剂的研究起到至关重要的作用。论文第五章,对于文章的中心思想进行了总结,阐明用计算机辅助药物设计的方法对于ALK磷酸激酶抑制剂的研究具有重大的意义。
在癌症的化疗与靶向药物的治疗过程中,普遍存在耐药性问题。目前,研究者通常通过建立耐药细胞系模型,研究耐药性机制和筛选耐药基因标志。然而,现有的耐药细胞系分析方法存在很大的缺陷,其中两个主要的问题是(1)缺乏判断耐药细胞系模型是否建立成功的金标准(gold

JQ1研究购买 standard);(2)在耐药与敏感细胞系间选择差异表达基因的方法普遍缺乏严格的统计控制。这些问题可能是导致不同研究工作找到的耐药基因表达标志不具有可重复性的重要原因。针对此问题,本文以癌细胞系耐药模型为主要研究对象,提出了一种细胞系分析方法,从多组用不同处理方法建立的耐药细胞系中筛选具有显著可重复性的耐药关键基因。本文主要研究内容分为以下两个部分:第一部分针对之前工作中采用的人为设定倍数差异(Fold Change,FC)阈值的方法存在的不确定问题,提出由技术重复细胞系样本(replicates)获得的耐药相关基因的可重复性判断的统计模型,用于评估由耐药细胞系的样本获得的差异基因的可靠性。然后,在几套培养处理模式各不相同的独立细胞系数据中分别筛选差异表达基因,并评价其差异表达模式(上、下调方向)一致的基因,将其作为耐药基因标志。最后,寻找几套数据集的差异基因富集到的具有重现性的功能类,分析耐药性影响的相关功能。在第二部分中,针对三类临床常见的癌症治疗药物(他莫昔芬、奥沙利铂和厄洛替尼)的耐药细胞系模型,我们应用上述算法分别在其中筛选耐药基因表达标志。在他莫昔芬耐药的乳腺癌细胞系中,我们确定了91个与他莫昔芬耐药相关的基因表达标志,并发现了他莫昔芬耐药性的产生主要与溶酶体、RNA运输等功能相关;在奥沙利铂耐药的结肠癌细胞系中,我们发现了20个与奥沙利铂耐药相关的基因表达标志,其耐药性的产生与mRNA修饰、碱基替换或颠换编辑相关;在厄洛替尼耐药的肺癌细胞系中,我们找到了18个与厄洛替尼耐药相关的基因表达标志,且发现厄洛替尼耐药性的产生会扰动细胞扩增相关的功能。
目的:(1)探讨碱性成纤维细胞生长因子单克隆抗体(b FGF单抗)联合Lobaplatin(LBP)对肺癌细胞系A549细胞增殖、凋亡和转移的影响及其可能的作用机制。(2)系统评价Lobaplatin联合化疗治疗晚期非小细胞肺癌(NSCLC)的疗效和安全性。方法:制备腹水型bFGF单抗,体外培养肺腺癌A549细胞,将细胞分为四组(control组、b

TSA HADC FGF单抗组、LBP组及b FGF单抗+LBP组)处理48h。(1)CCK-8法测定其对A549细胞增殖的影响;流式细胞仪检测药物作用后细胞周期分布的变化,Western blot法检测细胞周期相关蛋白CDK4和cyclin D的表达水平。(2)流式细胞仪检测药物作用A549细胞凋亡,DAPI染色激光共聚焦显微镜下观察细胞凋亡过程中细胞核的变化,western blot法检测细胞凋亡PI3K/Akt信号通路有关蛋白bcl-2、caspase-3、caspase-9、PARP及BAX、cleave-caspase-3、cleave-caspase-9、cleave-PARP的表达变化。(3)划痕实验及Transwell小室检测不同药物分组对A549细胞侵袭及迁移能力的影响,Western selleck产品 blot法检测细胞侵袭迁移相关蛋白MMP-2和MMP-9的表达。(4)计算机检索Cochrane Library、Pub Med、EMBase、中国期刊全文数据库(CNKI)、中国生物医学文献数据库(CBM)、维普中文期刊数据库、万方数据库,纳入LBP联合化疗对比顺铂联合化疗治疗晚期NSCLC的随机对照试验(PCT),根据纳入与排除标准筛选后,运用改良后的Jadad量表评价纳入文献的方法学质量,并采用Cochrane协作网提供的Rev

Man5.2统计学软件进行Meta分析。结果:(1)CCK-8结果显示不同的药物分组可抑制A549细胞的增殖,并以bFGF单抗+LBP对肺癌A549细胞增殖作用最为明显,流式细胞仪检测结果发现b FGF单抗联合LBP可抑制A549细胞周期的进行,阻止细胞周期在G0/GI期。Western blot检测结果表明b FGF单抗和LBP可下调细胞内CDK4和cyclin D的表达。(2)流式细胞仪检测结果显示b FGF单抗,LBP单独及联合可诱导A549细胞凋亡。DAPI染色激光共聚焦显微镜下发现可引起细胞核固缩、核裂解。Western blot结果表明b FGF单抗联合LBP通过下调bcl-2、casepase-3、casepase-9、PARP的表达,上调BAX、cleave-casepase-3、cleave-casepase-9、cleave-PARP的表达来诱导A549细胞的凋亡。(3)划痕实验和Transwell小室基质胶实验显示b FGF单抗,LBP单独及联合可抑制A549细胞侵袭迁移能力。Western blot检测结果发现药物作用后可下调MMP-2和MMP-9蛋白表达来阻断细胞的侵袭迁移。(4)共纳入11项RCT,合计724例患者。Meta分析结果显示,试验组患者的客观缓解率[RR=0.96,95%CI(0.79,1.16),P=0.65]、白细胞减少发生率[RR=0.95.,95%CI(0.83,1.08),P=0.42]和血小板减少发生率[RR=0.96,95%CI(0.80,1.15),P=0.68]与对照组比较差异无统计学意义;但试验组患者恶心呕吐发生率[RR=0.55,95%CI(0.46,0.

1-myc-his(-)B-IL-24的构建及鉴定;第二部分稳定转染pcDNA3.1-myc-his(-)B-IL-24的上皮性卵巢癌SKOV3细胞株增殖、细胞周期、凋亡率及相关凋亡蛋白的变化;第三部分IL-24对上皮性卵巢癌SKOV3细胞株放疗敏感性的改变观察;第四部分稳定转染pcDNA3.1-myc-his(-)B-IL-24的上皮性卵巢癌SKOV3细胞株裸鼠成瘤试验,IL-24对上皮性卵巢癌SKOV3细胞株裸鼠移植瘤模型治疗试验研究。 目的:IL-24真核表达载体pcDNA3.1-myc-his(-)B-IL-24的构建及鉴定。 方法:分离人外周血淋巴细胞,提取细胞总RNA,自行设计特异性引物,对IL-24编码序列进行克隆,通过基因重组,连接到pcDNA3.1-myc-his(-)B载体上,构建IL-24真核表达载体pcDNA3.1-myc-his(-)B-IL-24,用PCR、酶切鉴定和序列测定证实序列无误后,大量扩增。 结果: 1、正常人外周血淋巴细胞中提取的总RNA质量检测:从正常人外周血淋巴细胞中提取的总RNA,经1%琼脂糖凝胶电泳,可见28s、18s、5s三条带,且28s的光密度值是18s的两倍,表示该RNA样品完整性好,降解少。

2、总RNA经RT-PCR扩增IL-24基因:以总RNA为模板,RT-PCR扩增IL-24 cDNA,经琼脂糖凝胶电泳扩增出约为600~+bp大小的特异性条带,与预期设计的IL-24 cDNA大小相符。 3、PCR鉴定:以构建的真核表达载体pcDNA3.1-myc-his(-)B-IL-24为模板,PCR扩增IL-24 DNA,经1%琼脂糖凝胶电泳,扩增出约为600~+bp大小的特异性条带,与预期设计的IL-24 所以 DNA大小相符。 4、酶切鉴定:经蓝白筛选后,挑取数个单菌落扩增,提取质粒,用BamHⅠ和HindⅢ双酶切,1%琼脂糖凝胶电泳,可见被酶切的质粒出现两条带,约5.4Kb、600~+bp大小,分别与pcDNA3.1-myc-his(-)B和IL-24基因片段大小一致。pcDNA3.1-myc-his(-)B上有两个XbaⅠ酶切位点,用XbaⅠ单酶切后,1%琼脂糖凝胶电泳,可见被酶切的质粒出现两条带,约5.4Kb、600~+bp大小,分别与pcDNA3.1-myc-his(-)B和IL-24基因片段大小一致。

5、质粒的测序结果:对经上述鉴定后符合要求的质粒交invitrogen公司进行序列测定,经NCBI提供的BLAST程序分析对比,结果显示本实验获得的IL-24序列与genebank公布的IL-24基因序列完全一致,符合预期结果。 结论: 1、正常人外周血淋巴细胞中有IL-24 mRNA的表达。 2、成功构建了IL-24真核重组表达载体pcDNA3.1-myc-his(-)B-IL-24。 目的:稳定转染pcDNA3.1-myc-his(-)B- IL-24的上皮性卵巢癌SKOV3细胞株增殖、细胞周期、凋亡率及相关凋亡蛋白的变化。

方法:培养上皮性卵巢癌SKOV3细胞株,优化G418筛选浓度。将重组真核表达载体pcDNA3.1-myc-his(-)B-IL-24电穿孔转染SKOV3细胞中,G418筛选后获得稳定表达IL-24分子的阳性细胞克隆。RT-PCR和Western Decitabine订单 购买NVP-BKM120 Blot检测细胞转染前后IL-24 mRNA和蛋白的表达情况。细胞计数法绘制细胞生长曲线、四甲基偶氮唑蓝(MTT)法和平板克隆形成试验检测细胞体外增殖状况。倒置显微镜下观察细胞形态学改变。Hoechest 33258荧光染色法检测细胞凋亡。FCM(流式细胞仪)PI荧光染色分析细胞周期的改变,AnnexinV—FITC和PI荧光染色分析细胞凋亡率的改变。RT-PCR检测IL-24转染前后细胞p53 mRNA和caspase-3 mRNA的表达。 结果: 1、pcDNA3.1-myc-his(-)B-IL-24转染生长良好的SKOV3细胞后,经G418筛选,未转染组全部死亡,1周后转染组形成少量细胞克隆,2周后转染组形成大/小克隆细胞团。 2、用RT-PCR法检测SKOV3细胞转染pcDNA3.1-mvc-his(-)B-IL-24、转染pcDNA3.1-myc-his(-)B与未转染组细胞中IL-24 mRNA的表达。可见IL-24转染组SKOV3细胞,IL-24与GADPH扩增片断长度分别为600~+bp、400~+bp左右,空载体转染组与未转染组未见IL-24条带。表明SKOV3细胞未转染和空载体转染组无IL-24 mRNA表达或表达太低,转染后IL-24表达明显增加。 3、Western Blot检测细胞转染前后IL-24蛋白的表达情况,可见IL-24转染组SKOV3细胞有IL-24蛋白(分子量大小为23.8KD)表达,未转染组和空载体组细胞中未见IL-24蛋白的表达。 4、经细胞计数法测得各组的细胞数,绘制生长曲线。IL-24基因的导入可使上皮性卵巢癌SKOV3细胞株的活力受到明显抑制(P=0.000)。两两分析表明,转染IL-24的SKOV3细胞,细胞数与其它两组相比,差异具有统计学意义(P=0.000)。未转染组与转染空载体组细胞相比,差异无明显统计学意义(P=0.145)。 5、MTT比色法测得细胞各组的吸光度值。经析因设计的方差分析表明,IL-24基因的导入可使上皮性卵巢癌SKOV3细胞的生长受到明显抑制(P=0.000)。两两分析表明,转染IL-24的SKOV3细胞增殖能力与其它两组相比,差异具有统计学意义(P=0.000)。未转染组与转染空载体的SKOV3细胞相比,差异无明显统计学意义(P=0.326)。 6、细胞培养2周后可见接种三种细胞的平皿中均有明显的细胞集落形成。未转染、转染空质粒及转染IL-24真核表达载体的SKOV3细胞集落形成率分别为(62.00±0.