sinensis(40 mg/L)+福辛普利(10-5mol/L)组,培养24 h后进行实验。MTT法检测不同浓度C.sinensis(0,5,10,20,40 mg/L)对NRK-52E作用24,48,72 h后的增殖情况,流式细胞仪Annexin V/PI双染检测凋亡率,比色法测定caspase-3酶活性。结果:C.sinensis(10~40 mg/L)在一定范围内可呈浓度依赖地促进培养的肾小管上皮细胞增殖(P0.05)。结论:C.sinensis对AngⅡ诱导的肾小管上皮细胞凋亡具有一定抑制作用,可能与抑制NRK-52E中caspase-3的激活有关。
糖尿病是一种慢性、低度炎症性疾病。多种因素刺激下,环氧化酶COX-2在胰岛及多种组织中高水平表达。它通过与炎症因子和炎症介质,如一氧化氮、核因子-κB、前列腺素E等相互作用,对相应组织产生作用,从而促进了糖尿病并发症的发生和发展。对COX-2的研究可进一步揭示糖尿病并发症发生的分子机制,为预防和治疗糖尿病并发症提供新的思路。
丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated

protein kinases,MAPKs)是广泛表达的丝氨酸/酪氨酸激酶,在哺乳动物细胞多种信号转导通路中起重要作用。MAPKs有3个主要家族:ERKs、JNKs和p38 MAPKs。近年来发现,p38信号通路是MAPK通路的一重要分支,它在炎症细胞、应激、凋亡、细胞周期和生长等多种生理和病理过程中起重要作用。随着研究的深入,p38 因为 MAPK可以作为神经元和胶质细胞中研究疼痛的靶标,很可能为疼痛性疾病的治疗提供一个良好的前景。
胃癌是我国最常见的恶性肿瘤之一,发病率和死亡率均较高。胃癌的发生由遗传和环境等诸多因素相互作用所致,是一个多因素、多基因、多步骤参与的癌变过程,涉及大量相关基因的结构和表达异常,其中c-met、Bmi-1、HER-2/neu和基质金属蛋白酶(MMP)-9等的活化在胃癌的发生、发展中起重要作用。本文就近年胃癌相关基因及其在胃癌治疗中的研究进展作一综述,旨在帮助理解胃癌发生、发展的分子机制,并为其基因靶向治疗提供一定的理论依据。
目的观察高渗透压对兔髓核细胞活性的影响及JNK/SAPK(c-Jun 查找更多 N-terminal kinases/stress-activated protein kinases)和p38信号转导通路在此过程中的作用。方法根据不同渗透压及时间段处理髓核细胞将实验分为对照组、刺激组和阻断组后采用流式细胞仪检测各组髓核细胞凋亡情况,同时利用免疫荧光和Western

blot技术检测磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(phospho-p38mitogen-activated protein kinases,P-p38MAPK)、磷酸化JNK/SAPK激酶(phospho-JNK/SAPK,P-JNK/SAPK)的亚细胞定位及表达水平,观察其对髓核细胞凋亡的影响。结果高渗透压[600mOsm/kg H2O(mOsm)]可导致髓核细胞显著凋亡及P-p38 MAPK和P-JNK/SAPK蛋白表达水平改变。600mOsm时各刺激组凋亡细胞与对照组相比,差异均有显著统计学意义(P
目的:研究骨碎补总黄酮(TFDF)对高浓度葡萄糖作用下成骨细胞(OB)分化活性及对细胞外信号调节蛋白激酶(ERK1/2)和p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号蛋白的影响,为TFDF能否用来防治糖尿病性骨质疏松提供细胞分子学依据。方法:二次酶消化法分离培养新生SD大鼠颅骨OB及活性观察;MTT法检测TFDF对OB的细胞毒性,确定实验药物在培养基中的添加剂量;pNPP、ELISA、茜素红染色法分别检测不同浓度葡萄糖对OB碱性磷酸酶活性(ALP)、Ⅰ型胶原(ColⅠ)、骨钙素(BGP)以及矿化能力的影响,并观察TFDF对高糖作用下OB分化活性的干预作用;Western-blot检测TFDF对高糖作用下OB

ERK1/2和p38蛋白磷酸化的情况。结果:原代分离培养新生SD大鼠OB,具有典型的OB分化特性;根据TFDF对OB的毒性试验,选择TFDF的浓度25、50、100 PS-341临床试验 mg/L为实验梯度浓度;葡萄糖(25、50 mmol/L)可以降低OB表达ALP、ColⅠ、BGP,降低其矿化能力;TFDF能剂量依赖性的提高高糖(25 mmol/L)作用下OB表达ALP、ColⅠ、BGP和矿化能力;TFDF(50 mg/L)能提高高糖(25 mmol/L)作用下p38和ERK1/2的蛋白磷酸化。结论:高糖可以降低OB分化和矿化能力,TFDF可提高高糖作用下OB的分化和矿化能力,其作用机理可能和提高p38和ERK1/2信号蛋白的磷酸化有关。
目的:探讨表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)对人食管腺癌SEG-1细胞尿激酶型纤溶酶原激活物(urokinase-type plasminogen activator,u-PA)mRNA和蛋白表达的影响及p38MAPK信号转导通路在其中的作用.方法:以相同浓度的EGF(100g/L)按时间梯度刺激SEG-1细胞,应用Western blot法测定各时间点总p38MAPK蛋白、磷酸化p38MAPK蛋白、u-PA蛋白表达,并应用RT-PCR方法检测各时间点u-PAmRNA表达.用p38MAPK特异抑制剂SB203580预处理细胞后,观察上述指标变化.结果:EGF可明显增强SEG-1细胞(u-PA)mRNA和蛋白的表达,并可激活p38MAPK蛋白的磷酸化,具有时间依赖性.SB203580能明显抑制EGF诱导的p38MAPK蛋白的磷酸化,用其阻断p38MAPK信号转导通路后,EGF对u-PAmRNA和蛋白表达的诱导作用受到显著抑制,并且具有剂量依赖性.结论:EGF可通过p38MAPK信号转导通路诱导SEG-1细胞表达u-PA.

Unfortunately, some of these new approaches have met with mixed results. Furthermore, no clear metrics are available to determine whether these designs are more successful than previous strategies. This review examines the evolution of phase I trials and draws upon several examples of strategies that have been successful as well as those that have not, and outlines a pragmatic approach to phase I trials as our understanding of the molecular 一般 biology of individual malignancies emerges.
利用局部和全身两种不同的治疗途径,科学家宣称他们在肺癌和黑色素瘤的治疗上取得了积极的进展。治疗上的一大进步针对进展期肺癌某些异常的基因,通过靶向治疗,大部分患者肿瘤明显缩小。尽管临床试验在82例患者的小范围内进行,而且也无对照组,但试验结果却有显著的临床价值。相关报告近期在
2010年ASCO会议上,关于非小细胞肺癌的研究精彩纷呈,将影响今后NSCLC的临床实践及研究方向,全文就晚期NSCLC的有关治疗进展作一综述。
传统的化疗治疗晚期非小细胞肺癌已经到了一个平台期,靶向药物为突破这一”瓶颈”提供了行之有效的解决方案。文中系统回顾了近年来的大型随机临床研究,提供目前靶向药物在晚期非小细胞肺癌中的应用规范,并提出靶向治疗中存在的问题及可能解决的方法。
1文献来源研究一:Takeuchi

K,Choi YL,Soda M,et al.Multiplex reverse transcription-PCR screening for EML4-ALK fusion transcripts[J].Clin Cancer Res,2008,14(20):6618-6624.
非小细胞肺癌切除后辅助化疗问题一直存在争议。已证明Ⅱ-Ⅲa期可从辅助化疗中获益,Ⅰb期可口服辅助化疗获益。尽管新药物的出现有力地提高了辅助化疗的疗效,但患者依从程度的提高有待于给药方案的改进。肿瘤分子标志物和酪氨酸激酶抑制药是今后提高术后辅助化疗疗效的研究方向。

上海抗肿瘤药专利创收四亿元我国自主知识产权生物医药专利向世界证明了自身价值。2010年8月26日,中科院上海生科院知识产权与技术转移中心宣布,将一项蛋白抗肿瘤药物专利授权给跨国制药集团赛诺菲-安万特公司,合同金额超过4亿元,并外加日后销售额提成。业内认为,此项专利作价之高,在国内科研领域堪称罕见。上海生科院生化与细胞所的这一成果,被国际肿瘤生物学权威杂志《癌细胞》以11页篇幅报道,并随刊配发了由两位美国科学家撰写的2页评论,称中国科学家所做工作乃”肿瘤新生血管形成研究‘必读’”。
MTH1酶属于Nudix水解酶,具有清理细胞核苷酸池内氧化嘌呤核苷酸,防止核酸氧化损伤的功能。多项研究表明MTH1酶在神经退行性疾病、抗衰老等,尤其是抗肿瘤方面发挥关键作用,有望成为抗肿瘤药物的新靶标。近年国内外有关MTH1酶抑制剂的研究也逐渐增多,该文概述了MTH1酶的转录和翻译、结构特点、催化机制、应用等各方面信息,特别是对其各类抑制剂的研究现状进行了较为全面的综述。
Pancreatic 以及 cancer

is an extremely aggressive disease; although progress has been made in the last few years, the prognosis of these patients remains dismal. FOLFIRINOX is now considered a standard treatment in first-line setting, since it demonstrated an improved overall and progression-free survival vs gemcitabine alone. However, the enthusiasm over the benefit of this three-drug regimen is tempered by the associated increased toxicity profile, and many Gefitinib efforts have been made to improve the feasibility of this schedule. After a more recent phase Ⅲ trial showing an improved outcome over gemcitabine, the combination of gemcitabine/nab-paclitaxel emerged as another standard first-line treatment. However, this treatment is also associated with more side effects. In addition, despite initial promising data on the predictive role of SPARClevels, recent studies showed that these levels are not associated with nab-paclitaxel efficacy. The choice to use this treatment over FOLFIRINOX is therefore a topic of debate, also because no validated biomarkers to guide FOLFIRINOX treatment are available. In the era of actionable mutations and target agents it would be desirable to identify molecular factors or biomarkers to predict response to therapy in order to maximize the efficacy of treatment and avoid useless toxic effects for non-responding patients.

362±0.022和0.636±0.047。⑥FCM对细胞凋亡及细胞周期分布的检测显示:48h高糖组细胞凋亡率(11.53±2.16

%)较对照组(1.23±0.07 %)明显增高;细胞周期G0/G1期比例明显增多,S期、G2/M期比例明显减少。 4尿酸对高糖环境下HMC细胞ONOO-、JAK/STAT信号途径、TGF-β1、FN表达的影响及其与HMC增殖和凋亡的关系 ①HMC形态学改变:高糖+尿酸组HMC形态接近正常对照组;与高糖组相比,细胞变短,突起增多,胞质内颗粒减少。②免疫细胞化学显示:高糖+尿酸组,NT总蛋白、p-JAK2、p-STAT3、TGF-β1蛋白表达较高糖组均明显减弱。③Western blot结果显示:与同期高糖组相比,高糖+尿酸组NT总蛋白、p-JAK2、p-STAT3表达均明显下降。④ELISA检测显示:尿酸可以有效的减少高糖组各个时段(12h、24h、48h)细胞上清液中TGF-β1及FN的含量。⑤MTT法检测细胞增殖水平显示:48h高糖+尿酸组细胞增殖活性较48h高糖组增高,OD值分别为0.698±0.014和0.362±0.022。⑥FCM对细胞凋亡及细胞周期分布检测显示:48h高糖+尿酸组细胞凋亡率(4.61±0.39 %)较48h高糖组(11.53±2.16 %)减少;细胞周期G0/G1期比例减少,S期、G_2/M期比例增多。 5 AG490对高糖环境下HMC细胞ONOO-、JAK/STAT信号途径、TGF-β1、FN表达的影响 很少 ①免疫细胞化学显示:高糖+AG490组,p-JAK2、p-STAT3、TGF-β1蛋白表达较高糖组均明显减弱。②Western blot结果显示:与同期高糖组相比,高糖+AG490组p-JAK2、p-STAT3表达均明显下降;而NT总蛋白表达与同期高糖组差异无统计学意义。③ELISA检测显示:高糖+AG490组各个时段(12h、24h、48h)细胞上清液中TGF-β1和FN的含量较同期高糖组明显减少。④FCM对细胞凋亡的检测显示:48h高糖+AG490组细胞凋亡率(5.70±0.72 %)较48h高糖组(11.53±2.16 %)减少。 结论: 1 NT总蛋白(ONOO-的标志物)高表达可能与DN的发生发展相关,ONOO-的特异性清除剂—尿酸可能在防治DN中发挥重要作用。 2 JAK/STAT信号通路的激活与DN的发生发展可能相关;尿酸对ONOO-的清除可能与JAK/STAT信号通路的激活受抑有某种相关性;ONOO-可能是作为JAK/STAT信号通路的上游信号分子参与DN的发生发展。

3 所以 TGF-β1及FN的过多生成可能是引发DN的机制之一;JAK/STAT信号通路的激活与TGF-β1及FN的过多生成可能相关;TGF-β1及FN的过多生成可能参与了ONOO-介导的糖尿病肾损伤。 4 ONOO-可能参与介导了高糖对MC增殖、凋亡和细胞周期的影响。
目的:研究低强度脉冲超声波(Low intensity pulsed ultrasound, LIPUS)对体外培养兔膝关节软骨细胞增殖、软骨细胞中金属蛋白酶-13(matrix metalloproteinase,MMP-13)及Ⅱ型胶原的影响,探讨LIPUS对软骨细胞活性的促进作用及机制。 方法:选用6只1月龄的新西兰白兔膝关节软骨进行体外培养,体外培养每只兔的软骨细胞传至第二代后,均分为对照组与4个LIPUS照射组,LIPUS强度分别是20 点击此处 mW /cm~2、30 mW /cm~2、40 mW /cm~2、50 mW /cm~2,每天照射20min,连续10天。每天进行细胞计数;分别在第0天、5天及第10天收集细胞,提取软骨细胞全蛋白及RNA,采用Western-blot技术、qRT-PCR技术检测软骨细胞中MMP-13、Ⅱ型胶原的含量。

结果:1.软骨细胞计数:与对照组相比,各LIPUS照射组软骨细胞数均明显增高(P<0.05),但各照射组MMP-13含量均较其对照组显著降低(P<0.05)。但各照射组Ⅱ型胶原表达量均显著高于对照组(P<0.01);MO组关节软骨损伤明显,Mankin评分较MC组显著升高(P<0.01)。与EO组相比,ET组组织病理学改变程度轻,Mankin评分显著降低(P0.05)。2. PCNA检测:EO组PCNA较EC组显著升高(P 0.05)。3. PI3K检测: EO组PI3K与EC组相比,无显著增高(P >0.05);ET组PI3K较EO组显著升高(P 0.05)。 结论:研究提示LIPUS早期干预更有利于促进兔骨关节炎软骨修复,其作用机制与LIPUS促进了软骨细胞增殖,并激活PI3K信号转导通路密切相关。 目的:研究LIPUS对兔膝OA早期关节软骨Ⅱ型胶原、MMP-13及MAPKs信号通路的影响,探讨在OA早期应用LIPUS延缓关节软骨退变的作用机制。方法:新西兰白兔18只,随机分为照射组(operation plus LIPUS,O+L组)、假照射组(operation without LIPUS,O-L组)和假手术组( sham operation, SO组),每组6只。O+L组,右膝接受ACLT术,术后第3天起进行LIPUS照射,频率为3MHz,照射强度为40mW/cm~2,每次20min,每天1次,6天/周,持续6周。O-L组,手术及照射方案与O+L组一致,但无超声输出。SO组仅行关节囊切开术。治疗6周后将兔处死,取兔右侧膝关节行大体组织学观察,进行改良Mankin评分;应用蛋白质印迹法(Western-blot)检测Ⅱ型胶原蛋白、基质金属蛋白酶13(matrix metalloproteinase-13,MMP-13)及细胞外信号调节激酶1/2 (extracellular signal-regulated kinase1/2,ERK1/2)、丝裂原活化蛋白激酶38(Mitogen-activated protein kinase38,p38)、C6N末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)的表达。 结果:1.关节软骨Mankin评分:与SO组相比, O+L组、O-L组显著高于SO组(P<0.05,P<0.01);与O+L组相比,O-L组显著增高(P<0.05)。2.

05)；对照组、T2DM组和T2DM并CHD组三组间BMI差异无统计学意义(P>0.05)；T2DM、T2DM并CHD组WHR显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01或P0.05)； 2、各组间临床生化指标方面：MAP(mmHg)三组间差异无统计学意义(P>0.05)；对照组、T2DM组和T2DM并CHD组三组FINS、TC、LDL-C、脂蛋白(a)差异无统计学意义(P>0.05);

Dolutegravir临床试验 T2DM组、T2DM并CHD组FPG、HOMA-IR、 HbAlc、TG、VLDL-C显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01或P0.05); T2DM组、T2DM并CHD组HDL-C低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),且T2DM组与T2DM并CHD组组间差异也有统计学意义(P<0.05);T2DM并CHD组Hs-CRP显著高于T2DM组及对照组,差异有统计学意义(P<0.01)；T2DM组、T2DM并CHD组Leptin和IMT显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01),同时T2DM组与T2DM并CHD组组间差异也有统计学意义(P
术后认知功能障碍(POCD)是术后常见并发症之一,尤其多见于老年人。确切发生机制尚不明确,近年来研究集中于手术、麻醉等引起的炎症反应机制在POCD中的作用。本文就其进行综述,并加以分析。 POCD指麻醉或者手术后病人认知功能的持续性下降,人群中常用的评估工具有简易智能状态检查量表(MMSE)、韦氏成人记忆量表(WMS)、明尼苏达多项人格调查表(MMPI)等。尚缺乏一个权威化检测工具和明确定义。常用的动物实验方法有跳台法、水迷宫、穿梭箱等空间记忆测试方法及味觉厌恶实验、痛觉厌恶实验等感知觉记忆测验.常以长时记忆的形成为标准,尤其是以LTP的形成为测量依据。 POCD的炎症反应机制包括以下几方面：1.炎症细胞。星形胶质细胞阻碍神经再生、释放炎症因子等；活化状态的小胶质细胞释放神经毒性物质,损伤神经元,并以慢性持续活化形成长期作用；中枢神经系统炎症反应会易化外周炎性细胞的浸润,如淋巴细胞、单核细胞,各自以其方式影响认知功能。2.炎症因子。IL-1β可促进神经毒性物质释放,并通过ROS、MAPK等途径造成海马LTP形成受损；TNF-a可促进谷氨酰胺兴奋性神经毒性损伤、易化外周炎症因子浸润、扩大神经系统级联炎症反应等；IL-6可抑制LTP、抑制海马神经元发生并造成其形态变化。各炎症因子的作用在体外动物实验中已得到证实。并且炎症因子联合作用共同损伤神经元。

老年人中枢神经系统炎症因子、炎症细胞本身处于一个较高水平,在应激情况下易发生炎症反应,进而损伤认知功能。 丙泊酚、米诺环素、乌司他丁等药物可以干预中枢神经系统炎症反应,降低循环中炎症因子水平,改善术后认知功能,降低POCD发生率。丙泊酚对认知功能的改善多数是以与吸入麻醉七氟醚比较得出结论。米诺环素、乌司他丁的作用尚需要进一步的动物实验及临床验证 最后,以该综述内容及相关文献为背景,收集数例临床病例,对其中的典型病例发病因素、处理等加以分析。
目的：观察不同氧浓度对大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(AT-Ⅱ)水通道蛋白-5(AQP-5)的影响,并对其可能机制进行初步探讨。 点击此处 方法：原代培养的大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞随机分为五组(n=6)：A空白对照组；B LPS组;C LPS+40%O2组；D LPS+60%O2组;ELPS+90%O2组24h后ELISA检测各组细胞TNF-α含量,PT-PCR及Western Blot检测各组细胞AQP-5、p38MAPK mRNA及蛋白表达水平。 结果：1.ELISA结果显示,与A组相比B、C、D、E组TNF-α含量明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)；与B组相比C、D、E组TNF-α含量逐渐升高,差异有统计学意义(P
目的 本实验拟建立大鼠腹部不同深度切口模型,观察脊髓背角p-p38MAPK的表达变化,为更合理的研究围手术期应激反应的病理生理过程及疼痛机制提供新模型和思路。

方法 SD大鼠36只,随机分为6组(n=6)：(1)麻醉对照组(A组)：仅麻醉；(2)测压对照组(B组)：仅麻醉和监测；(3)模型组：切口长度均为2cm,根据切割深度不同分为4个亚组,①皮肤组(S组)：仅切割皮肤;②肌肉组(M组)：切割皮肤+肌肉;③腹膜组(P组)：切割皮肤+肌肉+腹膜;④探查组(G组)：切割皮肤+肌肉+腹膜+内脏探查。丙泊酚静脉麻醉下,建立大鼠腹正中切口模型。监测术中生命体征,测量热刺激缩足反射潜伏期(PWTL).观察体重、进食等变化。 另取大鼠32只,随机分为麻醉对照组(C组)和探查组(G2组),根据取标本时间不同,各组分为术后6h,1d,3d,7d四个亚组(n=4),免疫组织化学方法检测大鼠T8-T12节段脊髓背角p-p38MAPK表达的变化。 所以 结果 1.成功建立丙泊酚静脉麻醉下腹部不同深度切口模型。 2.模型组大鼠在切皮、切割完毕／探查完毕后1mmin、缝皮、术毕lmin,·MAP、 PR、 RR均高于基础值(PP>M>S。 3.术中大鼠未出现低血压、缺血缺氧等表现。术后所有大鼠均存活。 4.与A组、B组比较,术后第1d、2d模型组均有不同程度体重和进食下降,差异有显著性(P0.05)。与同时间点A组比较,探查组在术后6h与其有统计学差异(P<0.01)。探查组组内各时间点相比,差异有统计学意义(P
目的：本实验通过体外原代培样的方法建立SD大鼠关节软骨的有限细胞系,在此基础上采用脂联素诱导软骨细胞,观察NOS活性及NO、MMP-3浓度以及NO对MMP-3的影响,探讨脂联素在关节软骨病变发生、发展中的作用。 方法：1.选用SD大鼠的膝关节软骨作为细胞培养的组织来源,建立关节软骨细胞有限细胞系,选用第二代关节软骨为被干预细胞。2.实验1的实验组为0.25μg/ml脂联素组、0.5μg/ml脂联素组和0.75μg/ml脂联素组；对照组为同剂量DMEM培养基,其他条件同实验组。各组干预软骨细胞后,分别在24、48、72小时用硝酸还原酶法测定NO浓度、ELISA法测定NOS及MMP-3浓度。3.实验2的对照组为0.75μg/ml脂联素组；实验A组为0.75μg/ml脂联素联合氨基胍；实验B组为0.75μg/ml脂联素联合地塞米松。各组干预细胞后分别在24、48、72小时用硝酸还原酶法测定NO浓度、ELISA法测定NOS及MMP-3浓度。 结果：1.在实验1中,0.25μg/ml脂联素组的软骨细胞24h、48h、72h分泌的NO浓度与较对照组均显著升高(5.96+1.34vs2.00±0.69P<0.05；8.94±3.20vs2.67±0.37P<0.05；10.98±1.15vs2.78±0.95P<0.05),NOS表达水平也均显著升高(6.90±0.64vs2.43±0.15P<0.05；8.61+0.52vs2.61±0.33P<0.05；11.17±0.76vs3.19±0.31P<0.05；100.6±8.7vs111.5±12.1P<0.05；97.0±3.2vs111.5±12.

5μmol/L、1μmol/L和2μmol/L亚砷酸钠处理12小时和24小时后MDM2、p53和丝氨酸15位磷酸化的p53蛋白的表达水平,并且与5-Fu和紫外线处理作比较。采用细胞免疫荧光染色法研究砷剂处理前后p53蛋白的亚细胞定位及细霉素B和Nutlin-3预处理对其影响。 结果:低浓度砷剂上调了角质形成细胞中MDM2蛋白的表达,但对p53蛋白表达无明显影响。随着低浓度砷剂剂量的逐渐增加,MDM2蛋白的表达水平亦逐渐增加;随着砷剂作用时间的逐渐增加,MDM2蛋白的表达水平也逐渐增强。低浓度砷剂处理后角质形成细胞p53蛋白主要分布在胞浆。细霉素B和Nutlin-3预处理可以阻断砷剂诱导的p53胞浆分布。先用低浓度砷剂处理角质形成细胞后再加5-Fu刺激,此时5-Fu激活p53功能受到明显的抑制。 结论:低浓度砷剂呈剂量和时间依赖性上调角质形成细胞中MDM2蛋白的表达;低浓度砷剂可经由上调MDM2蛋白表达介导p53的胞浆分布;低浓度砷剂诱导的p53胞浆分布导致p53功能性失活。 第二章低浓度砷剂上调MDM2的机制探讨 目的:探讨低浓度砷剂上调MDM2表达的作用机制。

方法:构建pGL3-MDM2基因启动子报告基因表达载体,采用荧光素酶报告基因分析方法观察亚砷酸钠对MDM2基因P1、P2启动子转录活性的影响。应用1μmol/L和2μmol/L亚砷酸钠处理皮肤角质形成细胞24h后采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测MDM2 CP-673451购买 这个 mRNA的表达水平。应用PD98059、SB203580和LY294002等特异性信号转导通路抑制剂预处理后再观察砷剂对角质形成细胞MDM2表达的影响。

结果:低浓度砷剂可显著诱导MDM2基因P1启动子的荧光素酶活性(P＜0.05)。随着低浓度砷剂的剂量逐渐增加,MDM2 mRNA的表达水平逐渐增高。PD98059预处理可完全阻断砷剂上调角质形成细胞中MDM2的表达,而SB203580和LY294002预处理对砷剂诱导的MDM2表达上调无明显影响。 结论:通过MAPK/ERK信号转导通路,低浓度砷剂激活MDM2基因P1启动子的转录活性,从而诱导MDM2的表达。 第三章低浓度砷剂通过功能性失活p53发挥辅助致癌作用 目的:探讨低浓度砷剂对紫外线引起角质形成细胞凋亡的影响及其与砷性皮肤癌作用机制的关系。 方法:应用0.5μmol/L和1μmol/L亚砷酸钠处理角质形成细胞24h后,再用40mJ/cm~2紫外线照射。采用流式细胞术和Hoechst33258胞核染色检测砷剂和UV引起的细胞凋亡。 结果:0.5μmol/L和1μmol/L砷剂处理角质形成细胞后凋亡率分别为1.2%和1.5%,与正常对照组1.5%无显著性差异(P＞0.05)。而先经过0.5μmol/L和1μmol/L砷剂预处理后的角质形成细胞再照射紫外线,此时凋亡率分别为48.8%和39.9%,与未经砷剂预处理直接照射UV组凋亡率64.7%相比有显著性差异(P＜0.05)。表明砷剂预处理可导致角质形成细胞对UV的凋亡抗性。Hoechst33258核染色结果与之相一致。

结论:低浓度砷剂暴露可损害皮肤角质形成细胞对紫外线引起的凋亡反应;低浓度砷剂可通过功能性失活p53从而发挥其辅助致癌作用。
一、前言 胃癌是一种常见的恶性肿瘤,在我国是死亡率最高的恶性肿瘤之一。目前胃癌的治疗一般采用手术、化疗、放疗、免疫治疗等综合措施,其中化疗具有手术和放疗不能替代的地位。但肿瘤细胞的耐药性,尤其是肿瘤的多药耐药性(multidrug resistance,MDR)常导致化疗失败。据统计,晚期胃癌患者化疗有效率约为20%～40%,生存率平均6～12个月。肿瘤多药耐药是指肿瘤细胞接触一种化疗药物并对其产生耐药后,同时对其它化学结构和作用机制不同的化疗药物亦产生耐药。 转化生长因子β(transforming growth factor beta,TGFβ)超家族是一类结构相似但功能不同的肽类物质,在肿瘤的发展过程中,其作用机制较为复杂。我们的早期研究发现TGFβ1除了明显促进胃癌细胞的浸润及转移外,还可显著增加SGC-7901细胞中谷胱甘肽S转移酶π(GST-π)的表达,且胃癌组织中TGFβ1与GST-π的表达水平呈正相关。有研究表明,GST-π表达水平的改变与化疗耐药有关,由此提示TGFβ1可能参与了胃癌细胞的耐药过程,但迄今为止尚未见TGFβ1与胃癌耐药相关的报道。 selleck screening library 二、目的 本课题以TGFβ1处理SGC-7901细胞,观察其对化疗药物敏感性的变化,然后利用siRNA、蛋白质组学,Western blotting等技术分析可能参与此过程的信号分子,以探讨TGFβ1促胃癌耐药的分子机制,为临床克服耐药现象提供新的干预靶点。 三、方法与结果 1、利用MTT法检测经TGFβ1预处理过的SGC-7901和未经TGFβ1预处理过的SGC-7901对丝裂霉素的敏感性,结果发现:丝裂霉素对SGC-7901细胞的抑制率为89.5±10.6%;经10ng/ml TGFβ1预处理后,丝裂霉素对SGC-7901细胞的抑制率降为35.0±4.1%,二者间有显著性差异(反应细胞增殖情况OD490值的比较,均P＜0.

骨髓移植实验证明免疫细胞在PDCD4缺失导致动脉粥样硬化减弱过程中发挥主要作用 (1)分别收集Pdcd4-/-和C57BL/6小鼠股骨和胫骨中骨髓细胞,通过尾静脉注射移植入受致死剂量X射线照射的Ldlr-/-小鼠体内,高脂喂养12周和16周后,分别处死小鼠,主动脉根部制备冰冻切片,HE和油红O染色观察并比较斑块的大小。 (2)冰冻切片进行免疫组化染色比较巨噬细胞和T细胞在斑块局部的浸润情况。 (3) Western blot的方法检测骨髓移植后高脂喂养2周、12周和16周的Ldlr-/-小鼠血管斑块中PDCD4的表达。

2.体内实验研究PDCD4缺失对巨噬细胞和T细胞亚群的影响 (1)Pdcd4-/-Apoe-/小鼠和Apoe-/-小鼠高脂喂养8周或16周后,研磨小鼠脾脏,制备脾细胞的单细胞悬液,用流式细胞术的方法检测并比较巨噬细胞和T细胞各亚群(CD4+,CD8+,Th17,Treg)比例的变化,并用直线回归的方法分析其比例与斑块面积大小的相关性。 (2)冰冻切片免疫荧光或免疫组化染色比较斑块局部CD4+和CD8+比例的变化。 3.体内实验研究PDCD4缺失对巨噬细胞和T细胞相关细胞因子的影响 (1)血清中：流式细胞微球芯片试剂盒和ELISA的方法检测并比较Pdcd4-/-Apoe-/-和Apoe-/-小鼠高脂喂养后血清中细胞因子(IL-2,IL-4,IL-6,IFN-γ, TNF-α, IL-17, IL-10, TGF-p)的改变,并用直线回归的方法分析细胞因子浓度与斑块面积大小之间的相关性。 购买BAY 73-4506 (2)斑块局部： 1)冰冻切片免疫双荧光染色比较斑块局部IL-17和IL-10水平的变化。 2)将含有大量斑块的主动脉弓及胸腹主动脉血管组织裂解提取RNA或蛋白,分别用real time PCR或Western

blot的方法检测并比较斑块局部细胞因子的改变。 4.体外实验研究PDCD4对T细胞功能的影响及其机制 (1)对T细胞增殖能力的影响： 1)体外培养脾细胞并刺激活化,CCK8试剂盒检测并比较实验组与对照组的增殖情况。 2)流式细胞仪检测CD4+和CD8+T细胞的增殖情况。 3)流式细胞仪分别检测CD4+和CD8+T细胞中协同刺激分子CD28、CD137和协同抑制分子CTLA-4比例的变化。 (2)对T细胞分泌细胞因子的影响：流式细胞微球芯片试剂盒检测并比较培养上 KRX-0401 花费 清中细胞因子的改变。 5.体外实验研究PDCD4对巨噬细胞功能的影响：收集Pdcd4-/-和C57BL/6小鼠腹腔巨噬细胞进行体外培养,并用氧化低密度脂蛋白(oxLDL)刺激不同的时间段使其活化,ELISA的方法检测并比较培养上清中促炎性细胞因子IL-6、TNF-α和抑炎性细胞因子IL-10的浓度。 6.体内干预治疗确定IL-17和IL-10在PDCD4缺失减弱动脉粥样硬化斑块形成过程中的作用：以Apoe-/-小鼠做正常对照,将Pdcd4-/-Apoe-/-小鼠分为三组,高脂喂养4周后分别给予生理盐水、重组IL-17细胞因子和IL-10中和性抗体腹腔注射一周一次,共注射5周,处死小鼠,主动脉根部制备冰冻切片,HE和油红O染色观察并比较斑块的大小。 7.分子机制研究探讨PDCD4从翻译水平还是转录水平调控IL-10的表达 (1)RNA蛋白结合免疫沉淀试剂盒(RIP)获得与PDCD4结合的全部RNA, real time PCR扩增IL-10,确定PDCD4是否与IL-10mRNA形成复合体从而确定PDCD4是否从翻译水平调控IL-10的表达。 (2)提取活化巨噬细胞的总RNA,用RT-PCR的方法检测并比较IL-10在mRNA水平的表达。 (3)提取活化巨噬细胞的蛋白,用Western

blot的方法检测并比较MAPK (JNK,ERK1/2,P38)信号通路的活化情况,并通过加入信号通路抑制剂后ELISA检测上清中IL-10的表达情况确定PDCD4通过哪条信号传导通路调控IL-10的转录。 结果 一、PDCD4在动脉粥样硬化斑块形成过程中的表达与作用 1.动脉粥样硬化小鼠模型的建立我们给予8周龄的Apoe-/-小鼠高脂饲料喂养,造成体内高血脂坏境,诱导斑块的形成。分别取8周龄(未高脂)做为无斑块期,16周龄(高脂8周)做为早期斑块期和24周龄(高脂16周)做为晚期斑块期。 2. PDCD4在动脉粥样硬化斑块形成过程中的表达 可能 为了明确PDCD4在动脉粥样硬化发展过程中的表达情况,我们分离16周和24周Apoe-/-小鼠富含斑块的主动脉弓及胸腹主动脉裂解蛋白,以8周龄无斑块血管为对照,western blot的方法检测了PDCD4的表达情况,结果显示随着高脂喂养时间的延长(即动脉粥样硬化斑块的发展)PDCD4的表达明显升高。免疫组化染色发现PDCD4主要表达于免疫细胞(巨噬细胞和T细胞),另外,在平滑肌细胞中也有表达,提示PDCD4可能具有促进动脉粥样硬化斑块形成和发展的作用。 3. PDCD4在动脉粥样硬化斑块形成过程中的作用 为了研究PDCD4在动脉粥样硬化形成过程中的作用,我们制备了Pdcd4和Aope双基因敲除(Pdcd4-/-Apoe-/-)小鼠,并以此小鼠为实验组,以Apoe-/-小鼠为对照组,研究了PDCD4缺失对动脉粥样硬化形成的影响。结果发现高脂喂养8周或16周后Pdcd4-/-Apoe-/小鼠主动脉根部的斑块和主动脉弓及胸腹主动脉段的斑块较对照组相比,面积均明显减小(p<0.01),脂质沉积减少(p<0.01),局部巨噬细胞和T细胞的浸润都较对照组明显减少(p<0.05)。另外,胶原含量、平滑肌细胞也明显减少(p<0.01),CD4+T细胞比例呈降低趋势,其中CD4+Foxp3+调节性T细胞(Treg)比例明显上升(p<0.01),而TregCFoxp3+)细胞数量占斑块面积的比例则比对照组明显升高(p<0.05),而IL-17和TGF-β浓度较对照组降低(p<0.05),而IL-10明显高于对照组(p<0.05),而TGF-β较对照组升高(p<0.05)；提供抑制信号的CTLA-4在CD4+和CD8+T细胞上的表达均较对照组升高(p
帕金森病(Parkinson’s disease, PD)是一种常见的神经退行性疾病,在65岁以上人群中PD的患病率为1%-3%,其临床表现为静止性震颤、运动迟缓、肌强直和姿势不稳。PD由英国医师James B.

目的观察克唑替尼治疗EML4-ALK阳性晚期非小细胞肺癌的临床疗效。方法 30例既往化疗失败的中晚期非小细胞肺癌(NSCLC)患者,随机分为实验组和对照组,实验组患者15例,给予克唑替尼治疗,克唑替尼胶囊250

mg,口服,1粒/次,2次/d,早晚确定时间各服1粒,1 d剂量为500 mg。对照组15例,给予多西他赛单药化疗,多西他赛75 mg/m2,于第1天静脉滴注,21 d为1个治疗周期,化疗前1 d给予口服地塞米松8 mg,2次/d常规预处理,避免患者出现过敏反应。对比两组患者的疗效,不良反应及生存期。结果克唑替尼用于二线治疗NSCLC与化疗相比,实验组和对照组有效率分别为60.0%、20.0%;控制率分别为93.3%、53.3%,实验组具有更好的疗效及安全性。结论能否将克唑替尼应用于EML4-ALK基因阳性NSCLC患者的一线治疗,有待于大样本的临床试验进一步确定。
转化医学作为一种医学科学研究新理念,其核心是在实验室与临床之间建立一个沟通桥梁。药理学是生命科学领域中一门特殊的重要桥梁学科,是转化医学的重要形式。药理学的发展可以有效地将基础医学和临床医学、药学和医学、化学与生命科学、工程科学与医学、基础科学与临床医学紧密结合起来,形成这些学科之间的桥梁,最终实现药物防治疾病的临床应用目的。推动药理学的学科发展,是实现转化医学发展的重要途径,是实现转化医学最终目标的核心内容。
具有强效抗肿瘤活性的新型PI3K-p110β/Δ抑制剂KA-2164[关键词]KA-2164;PI3K-p110β/Δ抑制剂;抗肿瘤活性[中图分类号]R979.1Karus http://www.selleckchem.cn/products/dorsomorphin-2hcl.html Therapeutics公司研发的KA-2164是一种口服PI3K-p110β/Δ抑制剂,临床前研究显示其具有潜在的抗癌活性。KA-1264对人胶质母细胞瘤U-87MG细胞的IC50为1 800 nmol·L-1。KA-2164对多种PTEN缺陷型肿瘤细胞系具有抗增殖活性,IC50范围为
T790M突变是表皮生长因子受体(EGFR)敏感突变的非小细胞肺癌患者接受靶向治疗耐药的主要机制之一。研究表明,T790M突变在靶向治疗前即存在并具有一定预测疗效和预后的作用。本文就T790M在非小细胞肺癌靶向治疗作用的最新研究进展作一综述。
Hsp90作为热休克蛋白家族中的重要一员,是一种对细胞生存所必需的分子伴侣,它发挥着稳定顾客蛋白构象、维持其功能的作用。许多顾客蛋白在肿瘤中处于过度表达或持续激活状态,与肿瘤的发生发展有着密切的关系。因此,Hsp90在近年的研究中倍受关注,已经发展为抗肿瘤治疗的良好靶点,目前已经有多个Hsp90抑制剂进入临床实验。近年随着肿瘤分子生物学的研究,肿瘤分子靶向治疗已取得明显成果,针对多种癌症已获得了多个用于靶向治疗的单克隆抗体或小分子化学物质,如用于治疗某些HER2阳性乳腺癌的曲妥珠单抗、用于治疗NSCLC的吉非替尼等。然而随着这些药物的应用,肿瘤耐药性不可避免的产生。多方面研究表明Hsp90抑制剂会引起与耐药相关的多个分子的降解,提示其在拮抗耐药方面具有重要的意义。本文就Hsp90分子抑制剂在拮抗肿瘤耐药方面的研究进行综述。
目的探讨Puma对于卵巢癌细胞生长及体内成瘤的影响,了解其行使功能的分子机制。方法采用腺病毒载体实现Puma在卵巢癌细胞中的过表达,并通过CCK-8检测细胞增殖情况,通过Annexin-V染色测定细胞凋亡情况,通过小鼠荷瘤实验确定卵巢癌细胞体内成瘤能力。并进一步通过Western

selleck化学 blot的方法检测了细胞凋亡相关基因Caspase-9和Bax蛋白的表达及定位情况。结果成功构建hTERT基因启动子介导的Puma基因腺病毒表达载体,并实现Puma基因在卵巢癌细胞中的过表达,过表达Puma后,卵巢癌细胞增殖被明显抑制(P<0.05),细胞凋亡增加,从对照组细胞的7.2%增加为过表达组的29%(P
随着厄洛替尼、吉非替尼、埃克替尼等表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKIs)的应用,EGFR突变的非小细胞肺癌患者的PFS和OS得到了延长。然而在临床治疗过程中,EGFR-TKIs耐药的出现往往导致治疗最终失败。EGFR-TKIs的耐药包括原发性耐药和获得性耐药,尽管目前对EGFR-TKIs耐药机制的研究取得了一些成果,但是许多耐药机制并未明确。中医药联合EGFR-TKIs治疗进展期非小细胞肺癌中在临床中可见到明确疗效,而研究中医药在对抗EGFR-TKIs耐药有很大的前景。文章主要论述了原发性、获得性耐药机制和中医药在对抗EGFR-TKIs耐药机制上的进展。
As

GSK-3 抑制剂 molecular targets continue to be identified and more targeted inhibitors are developed for personalized treatment of non-small cell lung cancer(NSCLC), multigene mutation determination will be needed for routine oncology practice and for clinical trials. In this study, we evaluated the sensitivity and specificity of multigene mutation testing by using the Snapshot assay in NSCLC. We retrospectively reviewed a cohort of 110 consecutive NSCLC specimens for which epidermal growth factor receptor(EGFR) mutation testing was performed between November 2011 and December 2011 using Sanger sequencing.

基于大鼠肝脏组织代谢组数据建立的PLS-DA模型,计算出三个主成份,模型能够很好地区分炎症期、硬化期和肝癌期三个阶段；

9.基于大鼠肝癌组织和肿瘤邻近组织代谢组数据建立的OPLS模型,发现牛磺酸结合胆汁酸是最重要的代谢产物； 10.人血浆的代谢组与上述50个不同代谢产物相比,共有29个可以配对上； 11.用这29个代谢产物所建立的PLS-DA模型,能够很好地区分肝炎、肝硬化及肝细胞癌病人； 12.二元logistic回归进行计算,方程式显示如下(1,2)：5个代谢产物进入最后的肝癌预测方程。这些产物包括：二氢(神经)鞘氨醇(Measured mass:301.2980,X1),棕榈酰肉碱(Measured mass:399.3351,X2),一种胆汁酸衍生物(Measured mass:356.2711,X3),溶血磷脂酰胆碱(LPE(22：5),Measured mass:569.3475,X4),以及溶血磷脂酰乙醇胺(LPC(16：0),Measuredmass:453.2856,X5),5个代谢产物组合后的ROS曲线下面积为0.951； 13.5个代谢产物在肝癌病人血浆相对浓度与肝炎病人及肝硬化病人相比,除了胆汁酸衍生物在HCC与肝硬化之间差异没有统计学意义,均有显著差异。 [结论] 本研究采用液相色谱—质谱联用分析技术(LC-MS),对DEN诱导的大鼠肝癌动物模型血浆及肝脏组织进行代谢组学研究,筛选出区分肝癌与非肝癌的50个代谢产物,与肝炎、肝硬化及肝癌病人的血浆代谢组数据比较,最终寻找到5个潜在代谢标志物：二氢(神经)鞘氨醇,棕榈酰肉碱,一种胆汁酸衍生物,溶血磷脂酰胆碱,以及溶血磷脂酰乙醇胺。研究结果为寻找肝癌分子标志物、肝癌代谢相关通路研究及肝癌的诊断提供了新的思路与方法。 什么 第二部分Hedgehog信号通路在肝内胆管癌发生发展中的作用 C59体外 [研究目的] 肝内胆管癌(Intrahepatic Cholangiocarcinoma,ICC),又称胆管细胞癌或周围型胆管癌,是来自肝内二级分支以下胆管树上皮的肿瘤。在世界范围内,肝内胆管癌是仅次于肝细胞癌的第二大肝脏恶性肿瘤,占原发性肝脏恶性肿瘤的10%-20%,其发病率近年来呈上升趋势。肝内胆管癌具有发生隐匿、恶性程度高、发展迅速、手术切除率低、复发转移早、临床预后差等特点,严重影响病人的生活质量及生存率。以往对这类非肝细胞起源的肝脏恶性肿瘤的发生与发展过程缺乏系统的了解,研究水平也相对滞后。因此针对临床肝内胆管癌诊治中的难点进行深入研究,尤其是研究其发生、发展以及复发、转移的机制,以寻找新的有效的肝内胆管癌特异性治疗方法十分必要。

Hedgehog(Hh)基因是编码一系列分泌蛋白的基因家族,1980年首先在果蝇中被发现。Hh信号转导通路最早被发现对胚胎发育过程中的细胞分化和增殖起重要作用。近年来通过对其信号转导途径深入研究,发现Hh通路的异常在人类肿瘤的形成中也有极其重要的作用。HH基因在不同组织中过度表达以及靶基因突变,均可导致细胞特异性的组织增生,参与肿瘤的发生和发展。Hh通路与肿瘤的关系最早在Glioma中被证实,其与脑部神经瘤的形成联系密切,后又发现Hh信号异常与基底细胞癌、肺癌、前列腺癌、口腔癌和消化道肿瘤等的形成均有重要关系。 Hh信号通路在肝脏发育、细胞分化以及肿瘤发生上均起重要作用,本实验拟分析Hh信号通路相关分子在肝内胆管癌组织及肝内胆管癌细胞系中的表达,体内外调节Hh信号通路观察其对肝内胆管癌细胞系生物学特性的影响,并分析Hh信号通路下游转录分子Gli1、Gli2表达水平与肝内胆管癌病人临床病理资料及预后的相关性。以上工作有助全面揭示肝内胆管癌发生、发展的分子机制,深化对Hh信号通路的认识,为寻找肝内胆管癌新治疗靶点提供线索和思路。 Selleckchem Sorafenib [研究方法] 1. Real-time PCR检测正常肝内胆管上皮组织与对肝内胆管细胞癌组织中Hh通路信号分子的mRNA表达水平； 2.免疫组织化学检测正常肝内胆管上皮组织与对肝内胆管细胞癌组织中Hh通路信号分子的蛋白表达水平； 3.体外用小分子化合物改变Hh信号通路的活性,观察其对肝内胆管癌细胞系生物学特性的影响； 4.体内用小分子化合物改变Hh信号通路的活性,观察其对肝内胆管癌细胞系生物学特性的影响；

5.Hh通路信号分子与肝内胆管癌病人临床病理资料及预后资料的统计分析。 [结果] 1.Hh信号通路在肝内胆管癌组织中异常激活：Hh信号通路配体shh和ihh分别有87.8%和78.0%表达升高,受体ptchl有87.8%表达升高,下游分子smo有85.4%表达升高,下游转录分子gli1、gli2及gli3分别有65.9%、87.8%及36.6%表达升高,下游靶分子hhip、bcl2和c-myc分别有17.1%、75.6%和82.9%表达升高； 2.Hh信号通路在肝内胆管癌细胞系QBC939、RBE及HCCC-9810中也异常激活； 3.在体外用Hh信号通路特异性抑制剂KAAD-Cyclopamine能够抑制QBC939、RBE和HCCC-9810的增殖,且其抑制程度与KAAD-Cyclopamine呈剂量依赖性； 4.在体内Cyclopamine能够明显抑制QBC939细胞种植肿瘤的大小； 5.肝内胆管癌组织中Hh信号通路下游转录分子Gli1蛋白高表达的病人更易发生肝内转移,预后更差； 6.肝内胆管癌组织中Hh信号通路下游转录分子Gli2蛋白高表达的病人更易发生肝内转移和血管侵犯,预后更差； 7.单因素分析发现发现血清CA19-9>37units/ml、最大肿瘤直径>5cm、伴有肝内转移、淋巴结转移、血管侵犯、T3/4、TNMⅢ/Ⅳ期和Gli1、Gli2蛋白在肿瘤组织中高表达的肝内胆管癌病人总体生存率更低； 8.

01,P<0.05),表明RIP2表达质粒成功转染SW480细胞；大肠杆菌感染SW480细胞后,随着时间的推移,胞内的大肠杆菌数量也随之增长,说明大肠杆菌在SW480细胞内的生长呈增加趋势；将大肠杆菌刺激细胞24h后,转染RIP2细胞组的活菌数较转染空质粒组和未转染质粒组胞内活菌数数量明显减少,其差异有统计学意义(P<0.01),蛋白表达水平较对照组增高(P
目的:丝裂原活化蛋白激酶家族(Mitogen-activated protein kinase, MAPKs)是细胞内广泛存在的一类含丝氨酸/苏氨酸残基的蛋白激酶,介导细胞生长、发育、分裂、凋亡等多种生理过程。p38

MAPK是MAPKs家族的一个亚型,大量研究发现,p38 MAPK信号传导通路与脑缺血损伤及脑缺血耐受诱导有着密切联系。我们既往的研究结果表明,在体脑缺血预处理通过引起星形胶质细胞谷氨酸转运体-1 ( glial glutamate transporter-1, GLT-1)大量表达而诱导脑缺血耐受,但脑缺血预处理引起GLT-1大量表达的机制目前尚不清楚。脑缺血预处理是否通过p38 MAPK信号转导通路诱导GLT-1大量表达而发挥脑保护作用目前尚未见相关报道。因此,本实验旨在观察脑缺血耐受诱导过程中,p38 MAPK激酶对大鼠海马CA1区谷氨酸转运体GLT-1蛋白表达的影响,探讨脑缺血预处理是否通过p38 MAPK通路诱导GLT-1蛋白大量表达而发挥保护作用,从而为将来脑缺血性疾病的防治提供理论依据。 购买EPZ-6438 方法:健康雄性Wistar大鼠(280～320g)300只,随机分为以下三部分: 1脑缺血预处理对p-p38 MAPK蛋白及GLT-1蛋白表达的影响 除control组之外,其余大鼠均首先永久凝闭椎动脉,恢复2天后,进行假手术或脑缺血处理,具体分组如下:①control组(n=5);②sham组(n=45):只暴露双侧颈总动脉,不阻断血流;③脑缺血预处理(cerebral ischemic preconditioning, CIP)组(n=45):夹闭双侧颈总动脉3 min,然后恢复血流再灌注;④损伤性缺血(ischemic insult, II)组(n=45):夹闭双侧颈总动脉8 min,然后恢复血流再灌注;⑤CIP+II组(n=45):夹闭双侧颈总动脉3 min作为脑缺血预处理,再灌2天后,再次夹闭双侧颈总动脉8 min作为损伤性缺血,然后恢复再灌注。除control组之外的其余各组,又分为9个时间点,即假手术或末次缺血后0

min、15 min、30 min、3 h、6 h、1 d、2 时间 d、4 d、7 d(每个时间点n=5)。 在规定的时间点,断头取海马脑组织,硫堇染色进行神经病理学评价;应用Western blot法观察p-p38 MAPK蛋白及GLT-1蛋白的表达。2 p38 MAPK的特异性抑制剂SB203580对脑缺血耐受诱导的影响 具体分组如下:①sham组(n=5);②CIP组(n=5);③II组(n=5);④CIP+II组(n=5);⑤SB203580+sham组(n=15):暴露颈动脉前30分钟右侧脑室注射p38 MAPK特异性抑制剂SB203580,其余步骤同sham组;⑥3% DMSO+CIP+II组(n=5);暴露颈动脉前30分钟右侧脑室注射3%DMSO

20μl,其余步骤同CIP+II组;⑦SB203580+CIP+II组(n=15):脑缺血预处理前30分钟右侧脑室注射SB203580,其余步骤同CIP+II组。其中,⑤、⑥、⑦组根据SB203580剂量不同,又分成1.25 nmol、2.5 nmol、5n mol 3个亚组,每个亚组n=5。 末次缺血或假手术后7天取材,应用硫堇染色观察海马CA1区病理学分级和神经元密度,探讨p38 MAPK的特异性抑制剂SB203580对脑缺血耐受诱导的影响。 3 p38 MAPK的特异性抑制剂SB203580对脑缺血耐受诱导过程中GLT-1蛋白表达的影响 具体分组如下:①3% DMSO+CIP+II组(n=30);②SB203580+CIP+II(n=60)。根据设计,脑缺血预处理前30分钟侧脑室注射3% DMSO或SB203580,然后夹闭双侧颈总动脉3 min作为脑缺血预处理,再灌2天后,再次夹闭双侧颈总动脉8 selleck screening library min作为损伤性缺血,而后恢复再灌注。根据SB203580剂量不同,又分成2.5 nmol、5 nmol两个亚组,每个亚组n=30。 于末次缺血后即刻(0 min)、3 h、6 h、1 d、4 d、7 d时取海马脑组织(每个时间点n=5),应用western blot法观察GLT-1蛋白的表达,探讨抑制p38 MAPK信号转导通路对GLT-1蛋白表达的影响。 结果: 1在脑缺血耐受诱导过程中,大鼠海马CA1区p-p38 MAPK蛋白和GLT-1蛋白的表达及其时间对比 Western blot分析显示,control组大鼠海马CA1区有一定量的GLT-1蛋白的基础表达。但control组大鼠海马CA1区p-p38MAPK蛋白的基础表达极低。 与control组相比,sham组GLT-1的表达在各时间点均有所上调,IOD比值在各时间点均明显升高(P0.05),从3 h时间点开始降低,随着时间的推移逐渐降低,以4 d、7 d时间点最明显(P0.05)。第二次高峰从缺血后6 h开始逐步升高,到4 d时达到其峰值,7 d时依然很高(P0.05)。p-p38MAPK的western blot分析显示,p-p38MAPK在早期即0 min、15 min、30 min、3 h时间点表达非常明显(P0.05)。 II组大鼠在2天内未见CA1区明显的锥体神经元损伤;7 d时,细胞形态发生明显改变,几乎全部神经元死亡或缺失,ND值为17±8.06,与sham组相比,HG明显升高(P<0.01),ND明显降低(P<0.01),ND值为180±11.67、明显升高(P0.05)。 3% DMSO+CIP+II组的大鼠海马CA1区锥体神经元排列整齐,形态完整,未见损伤。与CIP+II组相比,HG、ND(189±11.03)均无显著差别(P>0.

1正常组、空白组以及各治疗组之间颗粒细胞中ACTA、ACTRIIB、ALK4、Smad2、Smad3、Smad4 m RNA表达比较正常组较空白组颗粒细胞中ACTA、ACTRIIB、ALK4、Smad2、Smad3、Smad4 m RNA表达升高(P<0.05);疏肝中剂量组表达高于疏肝低剂量组(P<0.05),其余各组表达由高至低依次是补肾中剂量组、疏肝高剂量组、疏肝中剂量组、补肾低剂量组、疏肝低剂量组,差异具有统计学意义(P0.05);空白组、正常组与疏肝低剂量组ACTA、ACTRIIB、ALK4、Smad2、Smad3、Smad4

m RNA表达下降(均P0.05);空白组、正常组与补肾低剂量组ACTA、ACTRIIB、ALK4、Smad2、Smad3、Smad4m RNA表达下降(均P<0.05)。2各组之间体外培养卵巢壁颗粒细胞中ACTA、ACTRIIB、ALK4、Smad2、Smad3、P-Smad2、P-Smad3、Smad4蛋白的表达2.1免疫组化结果2.1.1正常组、空白组以及各治疗组之间颗粒细胞中ACTA、ACTRIIB、ALK4、Smad2、Smad3、P-Smad2、P-Smad3、Smad4蛋白表达比较正常组与空白组之间比较,正常组颗粒细胞中ACTA、ACTRIIB、ALK4、Smad2、Smad3、P-Smad2、P-Smad3、Smad4蛋白表达均高于空白组(均P<0.05)。与空白组、正常组比较,疏肝低、中、高剂量组颗粒细胞中ACTA、ACTRIIB、ALK4、Smad2、Smad3、P-Smad2、P-Smad3、Smad4蛋白表达升高(均P<0.05);且疏肝高剂量组蛋白表达最高,其次为疏肝中、低剂量组,呈剂量依赖性。与正常组、空白组比较,补肾低、中、高剂量组的颗粒细胞中ACTA、ACTRIIB、ALK4、Smad2、Smad3、P-Smad2、P-Smad3、Smad4蛋白表达升高(均P0.05),补肾中剂量组较疏肝中剂量组蛋白表达均升高(P0.05)。2.1.2疏肝、补肾阻断剂组与非阻断剂各组ACTA、ACTRIIB、ALK4、Smad2、Smad3、P-Smad2、P-Smad3、Smad4蛋白表达比较与疏肝阻断剂组比较,疏肝高剂量组ACTA、ACTRIIB、ALK4、P-Smad2、P-Smad3、Smad2、Smad3、Smad4蛋白表达明显升高(均P0.05);空白组、正常组与疏肝低剂量组ACTA、ACTRIIB、ALK4、Smad2、Smad3、P-Smad2、P-Smad3、Smad4蛋白表达下降(均P<0.05)。与补肾阻断剂组比较,补肾高剂量组ACTA、ACTRIIB、ALK4、Smad2、Smad3、P-Smad2、P-Smad3、Smad4蛋白表达明显升高(均P0.05);空白组、正常组与补肾低剂量组ACTA、ACTRIIB、ALK4、Smad2、Smad3、P-Smad2、P-Smad3、Smad4蛋白表达下降(均P<0.05)。2.2细胞免疫荧光结果2.2.1正常组、空白组以及各治疗组之间颗粒细胞中ACTA、ACTRIIB、ALK4、Smad2、Smad3、P-Smad2、P-Smad3、Smad4蛋白表达比较正常组与空白组之间比较,正常组颗粒细胞中ACTA、ACTRIIB、ALK4、Smad2、Smad3、P-Smad2、P-Smad3、Smad4蛋白表达均高于空白组(均P<0.05)。与空白组、正常组比较,疏肝低、中、高剂量组颗粒细胞中ACTA、ACTRIIB、ALK4、Smad2、Smad3、P-Smad2、P-Smad3、Smad4蛋白表达升高(均P<0.05);且疏肝高剂量组蛋白表达最高,其次为疏肝中、低剂量组,呈剂量依赖性。与正常组、空白组比较,补肾低、中、高剂量组的颗粒细胞中ACTA、ACTRIIB、ALK4、Smad2、Smad3、P-Smad2、P-Smad3、Smad4蛋白表达升高(均P0.05),补肾中剂量组较疏肝中剂量组蛋白表达均升高(P0.05)。2.2.2疏肝、补肾阻断剂组与非阻断剂各组ACTA、ACTRIIB、ALK4、Smad2、Smad3、P-Smad2、P-Smad3、Smad4蛋白表达比较与疏肝阻断剂组比较,疏肝高剂量组ACTA、ACTRIIB、ALK4、Smad2、Smad3、P-Smad2、P-Smad3、Smad4蛋白表达明显升高(均P0.05);空白组、正常组与疏肝低剂量组ACTA、ACTRIIB、ALK4、P-Smad2、P-Smad3、Smad2、Smad3、Smad4蛋白表达下降(均P<0.05)。与补肾阻断剂组比较,补肾高剂量组ACTA、ACTRIIB、ALK4、Smad2、Smad3、P-Smad2、P-Smad3、Smad4蛋白表达明显升高(均P0.05);空白组、正常组与补肾低剂量组ACTA、ACTRIIB、ALK4、Smad2、Smad3、P-Smad2、P-Smad3、Smad4蛋白表达下降(均P
肺癌(1ung

Selleck CP 868596 selleck化学药品 selleck cancer)是原发性肺癌的简称,其中85%是非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)。2008年,全球确诊为肺癌约1.61亿人,为癌症总人数的13%。我国每年肺癌发生增长率为26.9%,若不及时采取相关措施,2025年可能达100万人,其中云南宣威市肺癌标准化死亡千分率为0.83,是全国平均水平的4.